阿莫西林中2-乙基己酸的测定

阿莫西林中 2-乙基己酸的测定
摘要目的：气相色谱法测定原料药阿莫西林中2-乙基己酸有机溶剂的残留量。

方法：以3-环己丙酸作为内标物，在聚乙二醇毛细管柱上进行测定，分离效果良好。

检测器温度：300℃；进样口温度：200℃；结果：2-乙基己酸在
0.002568294-2.568294mg/ml浓度范围内线性关系良好，线性方程为y=1.3541x-0.0379，R=0.9991，专属性、检出限、定量限、重复性、回收率等均符合相关要求，该方法适用于阿莫西林中2-乙基己酸的测定。

关键词2-乙基己酸；阿莫西林；气相色谱法；溶剂残留
1.仪器及条件
梅特勒XS-204电子天平，梅特勒XP-105电子天平
岛津GC-2010 plus气相色谱仪
检测器：FID检测器检测器温度：300℃
进样方式：直接进样分流比：40:1 进样口温度：200℃
流速：9.0ml/min 载气：高纯氮气
氢气：40ml/min 空气：400ml/min 尾吹气：30ml/min
理论塔板数：＞5000 分离度：＞2.0，分析方法：内标法
色谱柱：采用聚乙二醇为固定液的毛细管柱型号：DB-WAX
30m×0.53mm×1.0μm，编号：USE737147H
升温程序：恒温150℃
2.对照品、试剂及样品
2.1 标准物质：2-乙基己酸厂家：上海研拓生物科技有限公司；
批号：YT2907；纯度：99.5%
1.
环己丙酸厂家：上海研拓生物科技有限公司；
批号：YT2907；纯度：99.0%
2.2 试剂：环己烷厂家：国药集团化学试剂有限公司；批号：13018039；
纯度：≥99.5%
盐酸厂家：天津科密欧；批号：144918；纯度：36%--38%
2.3 样品：阿莫西林原料药
3.方法学验证内容
3.1 内标溶液的制备
称取3-环己丙酸0.50380g，置500ml量瓶中，用环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，既得。

2-乙基己酸对照品溶液的制备
精密称取2-乙基己酸对照品2.58120g，置50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，得浓度为51.36588mg/ml的储备液。

3.2 标准曲线
分别精密量取上述储备液0.1ml、0.1ml、0.1ml、0.5ml、1.0ml、5.0ml、
5.0ml、3.0ml、5.0ml至200ml、100ml、50ml、50ml、50ml、50ml、25ml、10ml、10ml的容量瓶中，用环己烷定容至刻度，再分别量取上述系列溶液5ml至50ml
量瓶中，用内标溶液定容至刻度，分别取上述溶液各1ml，加33%盐酸溶液4.0ml，剧烈振摇1分钟，静置使分层，取上层液，即得浓度为0.002568294 mg/ml、
0.005136588 mg/ml、0.010273176 mg/ml、0.05136588 mg/ml、
0.10273176mg/ml、0.5136588mg/ml、1.0273176mg/ml、1.5409764mg/ml、
2.568294mg/ml、的标准曲线。

直接进样，测定2-乙基己酸和3-环己丙酸的色谱峰面积，以2-乙基己酸系列标准工作液的浓度为横坐标，以2-乙基己酸与3-环己丙酸峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，见表1。

表1 乙醇标准工作曲线峰面积
C2-乙基己酸(mg/ml)A3-环己丙酸A2-乙基己酸
A2-乙基己酸/A3-环
己丙酸
0.00256829
439662510830.00273053
9
0.00513658
839683818000.00453585
6
0.01027317
63736264120
0.01102707 0.05136588364308183860.05046828 0.10273176363639327510.09006459 0.51365883679872180810.592632
1.0273176384155484294 1.26067
1.5409764389331789969
2.02904
2.5682943932691376984
3.50137
y=1.3541x-0.0379 R=0.9991
3.3 供试品制备及检测
样品处理与制备：
精密称取供试品0.3g，平行两份，加33%盐酸溶液4.0ml使溶解，精密加入
内标溶液1 ml，剧烈振摇1分钟，静置使分层，取上层溶液作为供试品溶液。

直
接进样，测定峰面积，按内标法以峰面积计算，即得。

结果2-乙基己酸未检出。

3.4 专属性
精密称取空白样品0.3g，加33%盐酸溶液4.0ml，精密加入内标溶液1 ml，
剧烈振摇1分钟，静置使分层，取上层溶液作为空白溶液，直接进样，在2-乙基
己酸与3-环己丙酸出峰处未发现干扰峰。

3.5 检出限确定
精密量取对照溶液（0.2568294mg/ml）0.5ml置50ml量瓶中，用内标溶液溶
解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，加33%盐酸溶液4.0ml，剧烈振摇1分钟，静置使分层，取上层液作为供试品溶液，进样，信噪比约为3，故检出限为
0.002568mg/ml。

3.6 定量限确定
精密量取对照溶液（1.0273mg/ml）0.5ml置50ml量瓶中，用内标溶液溶解
并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，加33%盐酸溶液4.0ml，剧烈振摇1分钟，
静置使分层，取上层液作为供试品溶液，进样，信噪比约为3，故检出限为
0.010273mg/ml。

3.7 重复性试验
照“样品处理与制备”项操作，制得供试品，平行六份，按标准曲线法计算，结果见表2。

123456
RS D(%)
A2-乙基己酸
5468
60
5470
10
5454
79
5486
78
55190
6
5534
75
/
A3-环己丙酸
4188
23
4238
43
4188
56
4198
88
42123
3
4233
55
/
A2-乙基己酸 1.30 1.29 1.30 1.30 1.310 1.30/
/A3-环己丙酸57070596230767252157354
C （mg//ml）
0.99
23
0.98
11
0.98
97
0.99
30
0.995
6
0.99
35
0.
52%表2 重复性试验结果
3.8 精密度试验
照“样品处理与制备”项操作，制得供试品，直接进样，连续进样6次，测定峰面积，按标准曲线法以峰面积计算，即得。

结果见表3。

表3 精密度试验结果
123456
RS D(%)
A2-乙基己酸
5113
56
521
426
5118
22
5193
30
51300
7
5192
79
/
A3-环己丙酸
4006
35
401
910
3934
51
4006
42
39940
6
4077
04
/
A2-乙基己酸/A3-环己丙酸1.27
6364
1.2
9737
1.30
0853
1.29
6245
1.284
425
1.27
3667
/
C乙（g//ml）
0.97
06
0.9
861
0.98
87
0.98
53
0.976
5
0.96
86
0.
88%
3.9 回收率试验
精密称取2-乙基己酸对照品1.8405g，置50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，得浓度为36.626mg/ml的储备液。

精密量取对照溶液（36.626mg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用内标溶液稀
释至刻度。

精密称取空白样品0.3g，平行6份，分别加入上述溶液各1ml，加33%盐酸溶液4.0ml，剧烈振摇1分钟，静置使分层，取上层溶液作为供试品溶液。

直接进样，测定峰面积，按内标法以峰面积计算，即得。

结果见表4。

表4 2-乙基己酸回收试验结果
序号
A2-乙基
己酸
A3-环
己丙酸
A2-乙基
己酸/A3-环己丙
酸
测
得量
（mg）
加
入量
（mg）
回
收率
（%）
均
值
（%）
R
SD
（%）
15088
439
519
0.01
1576
1.
8269
1.
8313
99
.76
10
0.14
.38
25266
442
553
0.01
1899
1.
8388
10
0.41
35003
435
176
0.01
1496
1.
8240
99
.60
45194
438
189
0.01
1853
1.
8371
10
0.32
55400
458
085
0.01
1788
1.
8347
10
0.19
65280
441
032
0.01
1972
1.
8415
10
0.56
4结论
4.1该方法以阿莫西林为样品测定2-乙基己酸，进行了包括线性、专属性、
重复性、精密度、回收率等在内的方法学验证。

验证结果均符合要求，证明该方
法对于2-乙基己酸的测定准确有效。

4.2样品处理过程中在静置分层时，如有必要，可离心，也可进行二次提取：分取出下层溶液，精密加入内标溶液1ml，静置使分层（如有必要，可离心），
弃去下层溶液，合并上清液，作为供试品溶液。

参考文献
【1】中华人民共和国药典，中国医药科技出版社，国家药典委员会，2020
【2】国家食品药品监督管理局化学药物质量控制分析方法验证技术指导原
则 2005。