齐鲁细胞治疗CTL细胞资料及回输注意事项

齐鲁细胞治疗CTL细胞资料及回输注意事项

1 CTL (Cytotoxic T Lymphocyte)简介

CTL (Cytotoxic T Lymphocyte)，细胞毒性T细胞，其表面标志是CD8。这些细胞的功能就像一个“杀手”，它们可以直接攻击带有特殊抗原的靶细胞，在抗病毒感染和抗肿瘤免疫中具有极其重要的用，细胞毒性T细胞也被称为杀手T细胞。体内T细胞经过胸腺的阳性选择和阴性选择，分化成CD8+T细胞，在机体被感染时，经过抗原递呈细胞将特异性抗原递呈给CD8+T而使其激活，发挥免疫清除、免疫调节的作用。体外CTL诱导培养首先抽取患者外周血，分离得到外周血单个核细胞（PBMC），分别培养DC及T细胞，DC 细胞可以显著刺激初始型T细胞（naïve T cell）增殖。将抗原负载DC细胞，抗原致敏诱导成熟的DC细胞与T细胞混合培养，通过TCR与抗原肽-MHC分子复合物结合提供T细胞活化的第一信号，DC表面的共刺激分子提供第二信号（见图1），通过DC细胞强大的抗原递呈功能激活初始CD8+ T细胞，激活的CTL细胞回输至患者体内，发挥强大的免疫清除及免疫调节作用，杀伤带有特殊抗原的靶细胞，达到治疗感染性疾病及肿瘤的目的。

图1

CTL的杀伤特点：a. 杀伤力强；b. 直接、连续、特异性反复杀伤靶细胞，而且在杀伤靶细胞的过程中本身不受损；c. MHC限制性。

2 CTL的作用机理

CTL对靶细胞的杀伤过程可以分为三个时相：a. 接触相：CTL通过TCR特异性识别靶细胞表面的抗原-MHC I类分子复合物，在粘附分子辅助下与靶细胞紧密接触。此过程只需要几分钟。b. 分泌相：CTL与靶细胞紧密结合后，CTL活化并使细胞颗粒性内容物呈现极化分布，随即启动胞吐机制，分泌细胞毒性物质，作用于靶细胞，这些毒性物质包括穿孔素

（perforin）、颗粒酶（granzyme）、颗粒溶解素（granulysin）及淋巴毒素等。c. 裂解相：靶细胞死亡过程。一是CTL分泌的穿孔素在靶细胞膜聚合，形成跨膜通道，使靶细胞膜出现大量的小孔，水分子进入靶细胞内，导致渗透压发生改变，细胞因渗透性溶解而死亡。颗粒酶经穿孔素形成的跨膜通道进入细胞内激活半胱天冬蛋白酶-10(caspase10)，诱导靶细胞凋亡。颗粒溶解素进入靶细胞，亦可直接杀灭靶细胞内的病原体。二是CTL 细胞通过高表达的FasL与靶细胞表面的Fas 结合，经Fas/FasL 途径激活半胱天冬蛋白酶

-8(caspase8)，导致靶细胞凋亡。

3 CTL与肿瘤

肿瘤免疫主要包括体液免疫和细胞免疫，体液免疫以B细胞为主，在抗感染中起主要作用。肿瘤免疫主要以T细胞介导的细胞免疫应答为主。T细胞介导的效应主要有两种基本形式：一是细胞毒性T淋巴细胞介导的特异性细胞裂解作用。二是超敏反应性T细胞介导的、以单个核细胞浸润为主的炎症反应。其中以CTL对肿瘤细胞的裂解作用最为重要。但患者体内肿瘤细胞通过多种方式逃避CTL对它的杀伤，例如肿瘤细胞表面低表达MHC-I 类分子，肿瘤细胞协同刺激信号异常，肿瘤细胞表达高水平的FasL而诱导表达Fas的T细胞的凋亡等。体外诱导激活的CTL细胞脱离体内肿瘤微环境，获得强大的抗肿瘤活性，回输至患者体内，可以发挥高效的杀伤活性，清除体内残留的肿瘤细胞，有效治疗肿瘤。CTL细胞治疗肿瘤方案

配合手术使用

术前采血培养，术后第7天回输，提高免疫力，机体恢复快，清除残留肿瘤细胞和组织，防止复发和转移。

配合化疗使用

化疗前采血培养，细胞培养期间进行一次低剂量化疗，化疗疗程结束后第3-7天回输（可根据化疗药物的半衰期调整，一般化疗药物半衰期过后回输，免疫细胞回输完后，间隔至少7天再进行下个疗程的化疗），提高机体免疫力，降低药物毒副作用，进一步抑制或杀伤癌细胞。

配合放疗使用

放疗前采血，放疗疗程间歇期回输（例如，周五放疗后给细胞，周一开始放疗），或采血后冻存种子细胞，待放疗疗程结束后回输免疫细胞（放疗结束后当天即可回输免疫细胞，免疫细胞回输完后，间隔至少7天再进行下个疗程的放疗），提高机体免疫力，提高化疗敏感性，降低放疗毒副作用，进一步抑制或杀伤癌细胞。

与靶向药物联合使用

提前采血，靶向药物使用后的第2天回输，利用ADCC效应杀伤肿瘤细胞。

单独使用

采血培养，14天左右回输，首次使用最好连续回输两个周期。

综合治疗

手术、放化疗、微创治疗、靶向药物治疗、免疫细胞治疗等治疗手段的联合治疗，首先手术，然后采用放化疗、微创治疗、靶向治疗等手段降低肿瘤负荷，肿瘤负荷降低后回输免疫细胞杀伤残留肿瘤细胞，起到防止复发和转移的作用。

治疗效果

1）提高患者对放化疗的敏感性；

2）清除体内的残留肿瘤细胞；

3）防止肿瘤复发和转移

4）回输后可改善机体免疫环境，增强机体的免疫功能；

5）改善患者的生活质量，延长生存期

4 CTL与肝炎

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起的一种世界性疾病。HBV 是一种嗜肝DNA病毒，非直接致细胞病变，HBV引起的肝损伤是免疫应答介导的。HBV 的免疫清除对促进肝功能恢复、防止和减少肝硬化和肝细胞癌的发生有着最根本的意义。慢性丙型肝炎（CHC）是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）引起，严重威胁人类健康，HCV是除了HBV感染引起肝细胞癌的主要致病因素之一。CHC的治疗目前尚无理想药物，干扰素是目前唯一有效的抗病毒药物，但是其治疗尚难令人满意，治愈率低且停药后约一半病例复发。

近年来研究证明，利用HBV抗原肽刺激急性HBV感染者的外周血单个核细胞，能够引起特异性HLA-I类分子限制的CTL应答。HCV感染所诱发的细胞毒性T细胞在清除HCV 和控制HCV感染中起重要作用。干扰素联合利巴韦林是目前公认的治疗慢性丙肝的方法，但疗效欠满意，尤其是治疗过程中出现的严重副作用，使不少患者无法耐受。用HCV多肽抗原在体外诱导、增殖、活化丙肝患者的单个核细胞，获得体外激活的CTL细胞回输体内后可在体内继续增殖并聚集在其他靶细胞部位，引起强烈的细胞免疫反应而清除丙肝病毒的作用。细胞毒性T淋巴细胞能杀灭表达特异性抗原的靶细胞，在机体抵抗各类病毒感染和/或导致免疫病理损伤中起着极为重要的作用。

CTL的杀伤作用是抗原特异性的，初始CD8+ T细胞识别抗原后，进行程序性克隆扩增并分化为CTL，一方面通过CTL表面表达的Fas配体和分泌的TNF-α与靶细胞上的Fas 受体（CD95）和TNF受体结合，诱导感染细胞凋亡；另一方面介导细胞溶解机制，成熟CTL胞质释放大量穿孔素（PF）和颗粒酶等，杀伤感染细胞。此外，活化的CTL还可分泌IFN-γ和淋巴毒素等细胞因子，而IFN-γ一方面可以直接抑制病毒在宿主细胞中的复制和增