高效液相色谱法测定美洛昔康注射液美洛昔康含量

高效液相色谱法测定美洛昔康注射液美洛昔康含量

王海为;李剑勇;杨亚军;李冰;张继瑜;刘希望;周旭正;牛建荣;魏小娟

【摘要】建立了测定美洛昔康注射液中美洛昔康含量的高效液相色谱法.采用C18:色谱柱(5 pm,4.6 mm x150 mm),流动相为V(甲醇):V(水,磷酸调pH值至

3.0)=40:60,流速为1 mL/min,检测波长为355 nn,进样量10 μL,柱温为室温.美洛昔康浓度在5～200 μg/mL内,峰面积与浓度的线性关系良好(r(2)= 0.9998).平均回收率为99.20%,RSD为1.30% (n =4).此法简便、快速、灵敏度高、重现性好.【期刊名称】《江苏农业科学》

【年(卷),期】2011(039)002

【总页数】3页(P439-441)

【关键词】美洛昔康;含量测定;高效液相色谱法

【作者】王海为;李剑勇;杨亚军;李冰;张继瑜;刘希望;周旭正;牛建荣;魏小娟

【作者单位】甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州,730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜

牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050

【正文语种】中文

【中图分类】O652.63

美洛昔康是一种烯醇酰胺类新型非甾体抗炎药(NSAIDs),可选择性抑制环氧合酶-

2(COX-2),具较强的镇痛消炎作用,用于缓解急性胃神经痛、急性腰部风湿病等多种疼痛[1-2]。美洛昔康临床给药途径有多种,目前临床使用的主要有口服片剂、胶囊

及皮肤用的凝胶剂,针对犊牛肺炎我们成功制备出了复方美洛昔康注射液。此注射

液含有抗生素药物,既具有很好的抗炎作用,又具有很好的抗菌作用。为了控制该注

射液的质量,建立注射液中美洛昔康含量的 HPLC测定方法非常迫切。用于美洛昔

康含量测定的方法与技术主要有紫外分光光度法[3]、电化学法[4]、高效液相色谱

法[5-7]。依据该注射剂的特点,通过对各种试验条件的优化,建立了一种简便、快捷、准确、重现性好、灵敏度高的测定美洛昔康含量的高效液相色谱法。

1 材料与仪器

1.1 材料

试验材料有美洛昔康对照品,含量为99.6%(购于武汉远程科技有限公司),复方美洛

昔康注射液(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所制备),水为超纯水,甲醇为色谱纯, N,N-二甲基甲酰胺。

1.2 仪器

试验仪器有Waters-2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司生产),Waters-2489紫外检测器,Sartorius BS110S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司生产),WR-2001溶剂过滤器(上海嘉鹏科技有限公司生产),AS5150A超声波清洗器

(天津奥特塞恩斯仪器有限公司生产),UV1900系列紫外可见分光光度计(上海亚研

电子科技有限公司生产)。

2 试验方法

2.1 紫外检测波长的选择

精密称取美洛昔康适量,加 N,N-二甲基酰胺超声溶解,再用甲醇适量溶解后,加流动

相稀释配制成10μg/mL的美洛昔康溶液,测定其在200～600 nm范围内的紫外吸收光谱,选择美洛昔康的紫外检测波长。

2.2 色谱条件

色谱柱为C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为V(甲醇)∶V(水,磷酸调pH值

至3.0)=40∶60,检测波长为355 nm,柱温为室温,流速为1m L/min,进样量10μL。

2.3 样品制备

精密量取浓度为1 mg/mL美洛昔康注射液2.5 mL,置50m L容量瓶中,加流动相

稀释定容至刻度,0.22μm微膜过滤,进样10μL进行HPLC分析。

2.4 杂质干扰试验

取空白注射液(与美洛昔康注射液相比只是不含美洛昔康,其余成分相同)适量,按照“2.3”的方法处理,进样10μL,记录色谱图。

2.5 线性关系

准确称取干燥恒重的美洛昔康对照品100 mg,置100 mL容量瓶中,先用N,N-二甲基甲酰胺溶解再用无水甲醇稀释配制成浓度为1 000μg/mL的贮备液。分别精密

量取适量储备液,用流动相稀释至刻度即得 5、25、50、75、100、200μg/mL的美洛昔康标准溶液,用0.22μm微膜过滤,分别进样10μL,记录色谱图。以浓度(C,μg/m L)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行线性回归,得回归方程。

2.6 加样回收率

精密量取不同体积已知含量的美洛昔康注射液,分别加入10mL试管中,依次加入不

同量的美洛昔康标准溶液,进行回收率的测定。

2.7 稳定性试验

取对照品溶液和样品溶液,分别在 0、2、4、6、8、12 h进样,观察结果。

2.8 样品含量测定

精密量取美洛昔康注射液0.25m L,按照“2.3”的方法处理,取10μL进样,记录色谱峰面积。另取美洛昔康对照品配制成50μg/mL的溶液,取10μL进样,记录色谱峰

面积。按照外标法以峰面积计算即得。

3 结果与分析

3.1 紫外检测波长的选择

图1显示美洛昔康在355 nm处有最大吸收峰,而各种载体材料在此波长处无干扰。因此确定 355 nm为美洛昔康检测波长。

3.2 杂质干扰试验

由图2可以看出,美洛昔康的保留时间为21.463min,空白乳剂对美洛昔康的HPLC 测定无干扰。

3.3 线性关系

表1、图3表明,美洛昔康在5～200μg/mL范围内线性关系良好。以浓度 C对峰

面积 A进行线性回归,得回归方程:A=16 723C-35 415,r2=0.999 8。

表1 美洛昔康浓度与峰面积的关系美洛昔康浓度(μg/m L)峰面积(AU) 5 742 41

10 131 963 25 375 460 50 767 619 75 1 222 905 100 1 640 353 150 2 477 935 200 3 310 589

3.4 回收率