综合性实验三

（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效 价
临床意义、方法评价：
• 外斐反应——斑疹伤寒立克次体 • 肥达试验——诊断伤寒、副伤寒 • 交叉配血 既能定性又能半定量，但特异性、敏感性不高。
试管凝集试验的原理：
在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断 试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合 反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝 集现象。
1:80 1 :160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 —
①加NS； ② 1/10稀释血清； ③待检血清作倍比稀释，
④加诊断菌液Ag
⑤
37C02-4h
观察结果
或室温过夜
凝集结果观察 分五级：
（++ 的最高稀释度为血清中抗体的效价）
（四）间接血凝试验测抗“O” 和“H”血清效 价
充分混匀
37℃1-2h
3.结果观察： -：细胞沉积于孔底。
+ ：细胞沉积于孔底，周围有少量散在凝集。
++：细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松 散。 +++：细胞形成片层凝集，面积略大于2+ 。
++++：细胞形成片层凝集，均匀布满孔底， 或边缘 皱缩如花边状。
A 生理盐水（ml) 0.9
受检血清（ml) 0.1
管
号
阴
1
Leabharlann Baidu
2
3
4
5
6
7
8性
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 对
照：
0.5
0.5
0.5 0.5
0.5
0.5
× 0.5 弃
血清稀释倍数 诊断菌液(ml) 最终稀释倍数
1:10 0.5 1:20
1:20 0.5 1:40
1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 — 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
综合性实验三
西安医学院 曹励民 武永红
（一）细菌培养与免疫原的制备
（二）“O”和抗“H”血清的制备
（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效 价
（四）间接血凝试验测抗“O” 和“H”血清效 价
（一）细菌培养与免疫原的制备
伤寒沙门 生理盐水溶解 肉汤培养基
菌标准菌
接种
接种
株干粉
SS培养基
100℃水浴制备O抗原
人的O型RBC或绵羊、家兔、红细胞上制成致敏颗粒，
技术要点：
1．致敏SRBC的制备 取2%SRBC悬液与等量1：10 伤寒沙门菌O（H）菌液混合，置37℃水浴2小时， 其间每隔15分钟摇动一次，取出后离心，弃上清 液，用生理盐水洗涤3次，最后用生理盐水配成 2%的致敏SRBC悬液。
2．试验操作程序
生理盐水菌液 甲醛处理制备H抗原
（二）“O”和抗“H”血清的制备
伤寒沙门菌 O和H抗原
分别免疫两组家兔 Ag
抗O血清和抗H血清
O/H抗原的免疫程序：
日序（天） 免疫剂量（ml）
1
1
8
1.5
15
1.5
22
1.5
免疫途径 皮内五点注射
耳静脉注射 耳静脉注射 耳静脉注射
试血方法：试管凝集试验 放血方法：颈动脉采血
方法评价：快速、敏感、操作简便且无需特殊实验
设备。
临床应用：
（1）检测抗原 （2）检测抗体，主要用于检测抗病原生物抗体， 如抗结核杆菌抗体、抗脑膜炎球菌抗体、抗-HIV抗 体、抗溶血素“O”抗体等，类风湿因子、抗DNA抗 体等自身免疫性疾病的抗体和青霉素抗体等变态反 应的抗体。
间接血凝试验原理
待测抗原 O或H抗体 SRBC（载体微球）
（单位：ul）
管号
1
23 4 5 6
7
8
生理盐水 1：10O(H) 血清
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
25
25
25 弃25
致敏SRBC
25 25 25 25 25 25 25
25
终血清稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560