高效液相色谱法测定清热祛湿颗粒中绿原酸的含量

高效液相色谱法测定清热祛湿颗粒中绿原酸的含量
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定清热祛湿颗粒中绿原酸的含量。

方法：用50%甲醇提取，AgilentC18色谱柱（4.6 mm×250 mm，10 ?滋m）为固定相，乙腈-0.4%磷酸（8∶92）为流动相，检测波长327 nm。

结果：绿原酸在进样量0.0825~0.4949 μg范围，其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均回收率为100.25%（RSD=1.3%）。

结论：该方法能消除其他成分的干扰，准确可靠，重现性好，操作简便快捷，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】绿原酸；清热祛湿冲剂；高效液相色谱法
清热祛湿颗粒由党参、茵陈、岗梅根、黄芪、苍术、野菊花、陈皮七味药材经加工制备而成，具有清热祛湿，益气生津的功能。

临床上广泛用于暑湿病邪引起的四肢疲倦、食欲不振、身热口干等的治疗。

本品处方中含绿原酸，部颁标准《中药成方制剂》第九册中无该制剂的含量测定方法，文献未见报道，质量可控有待完善。

本实验采用高效液相色谱法测定该制剂中绿原酸的含量，为控制该药品质量提供一种简便快捷、专属性好，结果准确可靠的定量分析方法。

1 仪器和试药
LC-10AD vp型高效液相色谱仪，LC-AD vp型高效液相泵，SPD-10A vp型紫外检测器，清热祛湿颗粒（A厂提供，规格：10g/包。

批号分别为：20050501、20050502、20050503），绿原酸对照品（中国药品生物检定所，批号：110753-200212），乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，10 ?滋m），流动相: 乙腈-0.4%磷酸（8∶92），检测波长：327 nm[1]，流速：1.0 ml/min，柱温：室温，进样量10 μl。

在此色谱条件下所得色谱图（见图1）。

结果表明绿原酸色谱峰与其它成分分离效果良好。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品10 mg，置100 ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取4 ml置10 ml棕色量瓶中，
加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备：将样品适量，研细，精密称取约10 g，置100 ml 具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，加50%甲醇补充减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。

2.4 空白对照试验：按处方配比投入缺茵陈、野菊花的其它中药和辅料，制成空白中药制剂，按样品测定项下的色谱条件测试，见图c。

由此可知，在绿原酸色出峰时间段没有干扰，分析条件专属性良好。

2.5 线性关系的考察：以对照品溶液浓度C（41.24 μg/ml）2，4，6，8，10，12 μl进样。

按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（x），峰面积为纵坐标(y)进行线性回归，得回归方程：y=
3.1533E-07x-1.0965E-03，r =0.9999。

结果表明：绿原酸进样量在0.0825~0.4949 μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验：取上述对照品溶液10 μl进样，重复进样6次，纪录每次测得峰面积，峰面积的RSD为1.09%，结果表明精密度良好。

2.7 重现性试验：取同一品供试品（批号20050501）6份，按样品测定方法操作，进行重现性试验，结果RSD为1.32%，表明重现性较好。

2.8 稳定性试验：取同一供试品（批号20050501）溶液10 μl进样，分别于0、1、3、6、10、20小时测定峰面积，记录每次测得峰面积，结果峰面积的RSD 为0.74%，表明供试品溶液在20小时内稳定。

2.9 加样回收率试验：取已知含量的样品（批号20050501，1.27 mg/袋）约10 g，精密称定，按2.3项操作方法分别提取供试液，精密量取5 ml，精密加入对照品（41.24 μg/ml）1 ml，2 ml，按照样品含量测定方法操作，测定绿原酸的含量，计算回收率。

结果表明，该方法有良好的回收率。

见表1。

2.10 样品测定：取三批样品（批号20050501、20050502、20050503）各2份，按2.3项操作方法分别配制供试液，取对照品溶液和样品溶液分别在上述色谱条件下进样10 μl，按外标法以峰面积计算样品含量。

结果见表2。

3 讨论
3.1 测定波长的选择：紫外可见分光光度计对绿原酸对照品甲醇溶液进行扫描，结果绿原酸在327 nm处有最大吸收，故采用327 nm作为测定波长。

在此条件下，绿原酸的回收率测定、精密度和线性考察，都能获得满意的结果。

3.2 样品的提取：本实验比较了30、45、60 min超声提取绿原酸的含量，结果：30、45 min提取含量差异无显著性，故确定样品提取时间为30 min。

3.3 实验结果表明，该方法重现性好，操作简便，可用于清热祛湿冲剂中绿原酸的含量测定，为制定该制剂的质量标准提供参考依据。

参考文献：
[1] 王隶书，程东岩，严玉清.肝康颗粒中绿原酸的HPLC测定[J].中国药师，2004，7(11)：857.。