有机磷诱发的迟发性神经毒性的神经蛋白抗体和毒性的改善
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有机磷化合物诱导的迟发 性神经毒性的神经蛋白抗 体和毒性的改善
Neurotoxicology and Teratology
Hassan A.N. El-Fawal，Wilfred C. McCain Neurotoxicology Laboratory at Mercy College, USA
1. 前言
• 血清抗神经抗原自身抗体，被建议用于证 明外来物质引起的神经损伤，先前对此的 研究是基于对神经变性疾病，如帕金森， 阿尔茨海默，肌萎缩侧索硬化等。在这些 疾病病中，神经细胞的蛋白抗体、髓磷脂 和受体曾被报告过。尽管这些神经变性并 没有公认与自身免疫有关，但自身免疫的 存在对神经组织的损伤具有指示意义。因 此，在神经毒理学的背景下，我们将提供 一种有效的生物标记来评价和监测潜在的 神经毒性的进展和毒性的改善。
• 在本研究中NF-M和NF-H与临床症状得分之 间缺乏相关性，可能反映了骨架蛋白的磷 酸化状态。在OPIDN过程中神经丝蛋白的 磷酸化会导致神经丝蛋白聚集而导致其运 输减少，这在若干个研究中已被报告出来。 这可能是由于钙调蛋白的蛋白激酶活性增 强而导致，如果是这个原因，则自身抗体 会升高来对抗磷酸化，而不是对抗天然蛋 白，这或许能够解释为什么最初的抗NF-M 水平相比抗NF-L的升高是在第7天而不是第 21天，因此未来的研究将尝试检测抗磷酸 化的神经丝蛋白底物的抗体。
• 众所周知，有机磷化合物（OPs），包括农 药和工业化学品，会对神经系统产生不利 影响，有机磷农药对神经系统的急性毒性 与酯酶的抑制有关。因此，血液胆碱酯酶 活性被作为暴露和神经毒性的测量指标。 然而，其他有机磷化合物，如增塑剂，润 滑剂等，在一次暴露后可引起迟发性神经 毒性(OPIDN)，这种神经病变被认为与神经 毒性酯酶(NTE)的抑制有关。NTE存在于动 物模型的神经组织和人淋巴细胞中。这就 需要一种生物指标，能够反映由这种或其 他神经毒性所引起的神经损伤和毒性的改 善。
• 维拉帕米在PSP注射的前一天开始，连续 注射四天， 在PSP注射前（0天）和注射后 的第3天，第7天和第21天，采用臂静脉穿 刺采血收集血清，此方案类似前瞻性研究， 每只母鸡担当自身对照。染毒后第0 ，3 ， 7 ，9 ，13 ，15 ，18，21天观察母鸡的临 床症状，至少两人进行独立评估和记录并 取平均值。得分根据Sprague建议的比例进 行评分，其中：0为正常，1为步态改变，2 为难以行走和站立，3为严重共济失调，4 为腿部麻痹，5为腿和翅膀瘫痪。
2.2 自身抗体酶联免疫吸附法 （ELISA）
• 所有五种抗神经蛋白抗体的样本分析在研 究结束后的同一天的同一时间进行，血清 中神经典型和胶质典型蛋白的自身抗体按 照El-Fawal所描述的方法测定。
• 纯化的牛脊索蛋白(NF-L; NF-M; NF-H or GFAP; American Research Products, Belmont, MA) or MBP (Sigma-Aldrich)，溶 解于10mM Tris缓冲液（ph=7.4）中，浓度 为5μg/ml（MBP以外），而MBP浓度为 25μg/ml。平底的Immulon微孔板(Fisher Scientific)涂有100 μl蛋白溶液，4 °C过 夜，之前微孔板用含有0.05%吐温-80的Tris 缓冲液润洗三次。非特异性结合位点在室 温下用溶解在Tris缓冲液中的5%脱脂乳溶 液阻滞30分钟
• 第0天和第3天，血清中检测不到五种神经 蛋白抗体的任何一个，这与体液免疫的初 期激发有四天以上的延迟时间相一致。在 此研究背景下，初期激发表现为神经的退 行性病变和自身抗原暴露于免疫效应物。
• NF抗体的升高与OPIDN引起的轴突病变相 一致。在第21天时，抗NF-L IgG的占优可 能反映了与之相关的其他NF的抗原的丰度， 从低分子量到高分子量，以4：2：1或6：2： 1的比例存在，这种NF-L抗体滴度的优势与 McConnell在一次甲胺磷暴露案例中的观察 相一致。NF-L的抗体滴度与临床症状的严 重程度呈显著相关，显示其与周围神经轴 突，中枢神经白质尤其是脊髓的实体损耗 有关。
• 包括中枢神经系统在内的神经系统抗原， 可以适当的刺激免疫活化，并能够在周围 神经中检测到。这说明，在神经元和髓鞘 变性时，比如由环境化合物引起中枢或周 围神经沉淀析出时，具体到这些结构的特 殊蛋白是存在的，尤以细胞内的骨架蛋白 的抗原为甚。不论这些抗体产生于中枢神 经系统还是周围神经系统，它们都能在血 清中和脑脊液中被检测到。
• McConnell在一次由甲胺磷引起的神经病变 个案研究中报告了神经元细胞骨架蛋（神 经丝蛋白NF）和神经胶质蛋白（神经胶质 原纤维酸性蛋白GFAP，和髓磷脂碱基蛋白 MBP）的自身抗体的存在。甲胺磷和其他 的一些有机磷酸盐类，具有诱发OPIDN的 能力。OPIDN的发展可能与其扰乱神经元 钙稳态有关，其表现是钙依赖蛋白酶活性 被激活。在此研究背景下， 显示OPIDN的 进展可以被钙通道阻滞剂如二氢吡啶类 （硝苯地平，尼莫地平）和苯烷基胺 ，维 拉帕米等缓和。
• 微孔板用分析仪在405nm处读数，用于计算 等值的标准曲线采用商用的兔抗神经抗原的 多克隆抗体 (Encor Biotechnology, Gainesville, FL)制作， 标准曲线8个点的范 围从0至2000ng/mL，检测阈值0.20ng/ml。 • 不同时间点和组间的IgG抗体滴度的差异用 Newman–Keuls方差分析进行比较，p<0.05 则认为差异有显著性，除非额外指明，所有 的数据均以均数+标准差的形式表示。自身抗 体滴度与临床症状得分的相关性用线性回归 法进行分析。
ห้องสมุดไป่ตู้
• 在此次研究中能够检测到抗GFAP抗体， OPIDN是一种中枢-周围神经病变，但是目 前还没有关于有机磷导致的神经胶质毒性 的报道。脑GFAP的下降可能是由于压力诱 导的皮脂类固醇的释放导致，然而，在本 研究中GFAP抗体的检出提示明显的骨架蛋 白的分泌。
• 一些OPIDN诱导剂具有明显的抗胆碱酯酶 活性，能够破坏以星形胶质细胞作为神经 接触界面的血脑屏障。而且Guizzetti报告， 用毒死蜱培养星形胶质细胞，会对其增殖 产生抑制效应。然而，如果这种情况发生 在体内，则可能是很短暂，因为GFAP水平 的增加，表明了星形胶质细胞的增生，这 在以前的OPIDN的研究中曾报告过。抗 GFAP抗体的存在及其随时间的增加，与之 前人暴露于甲胺磷的研究报告相一致。
• 这样的话，免疫系统或许提供了一种手段， 使得神经系统的细胞损伤可以被记录并通 过血清来测量。近年来，人们越来越多的 关注能引起神经变性疾病的环境因子，和 反映其神经毒性的生物标记物。神经免疫 应答可能会提供这样一个纽带。一些研究 已经表明，曾在第一次海湾战争中暴露于 有机磷和氨基甲酸磷脂的退伍军人体内， 发现了细胞免疫和体液免疫的异常，如抗 MBP自身抗体和其他非神经抗原的异常。
• 血清稀释度为1：100，用脱脂乳溶液稀释， 每孔加样100μl，一式三份。微孔板室温培 养2小时，之前用含有0.05%吐温-80的Tris 缓冲液润洗三次。小鼠抗鸡碱性磷酸酶IgG (Jackson Immunoresearch)，以1：3000比 例加样后微孔板培养1小时，之前用含有 0.05%吐温-80的Tris缓冲液润洗三次，并加 入碱性磷酸酶底物 • (p-nitrophenylphosphate，Bio-Rad)。 • 终止反应时，每孔加100μl 0.4N NaOH 来 终止反应。
• 本研究的目的在于评估把血清中的抗神经 蛋白作为反映周围神经毒性的生物标志物 的效用。
• 研究暴露于三基甲苯基磷酸酯（TOTP）的 活性同源物苯基水杨苷磷酸酯（PSP）后 所引起的OPIDN的发展，同时实验性的给 予维拉帕米来评价干预效果作为这一评价 的模型系统。
2.方法
• 2.1 动物与处理方法
• 维拉帕米和其他钙通道阻断剂对免疫调节 的证据尚不明确，例如，根据Swash 和 Ingram的研究，维拉帕米加剧了自身免疫 性疾病患者的肌无力症状，而另一些研究 则表明，维拉帕米对由刺激物引起的B淋巴 细胞活化具有抑制作用并能能通过抑制巨 噬细胞的功能来缓解微粒物所致的氧化损 伤。维拉帕米的免疫抑制活动对于证明上 述自身抗体是否能致病有一定作用，但这 还有待进一步确定。应当指出的是，维拉 帕米对PSP导致的迟发神经病的缓解，不 太可能涉及免疫调节。
3.结果
• OPIDN临床症状和NTE的抑制结果，此前 已被McCain发表，注射PSP的母鸡最早在 给药后的第7天便出现了明显的临床症状， 维拉帕米和PSP共同注射的母鸡在第7天并 没有出现明显的共济失调的症状。在后几 天里OPIDN进展加重，在第15天时，所有 的注射PSP母鸡，不管有没有给予维拉帕 米，都出现了不同程度的OPIDN，那些只 给予PSP的母鸡在整个21天的实验过程所 受到的影响都是最严重的。
• El-Fawal先前的研究表明，钙通道阻断剂硝 苯地平和维拉帕米，具有改善有机磷引起 的神经病变的能力，这可能涉及以下方面： 1.卡配因的活化作用减少，线粒体和突触中 的蛋白质磷酸化作用减弱（Wu 注射TOTP 和维拉帕米）。2.激酶活力减弱 （Choudhary 和 Gill，尼莫地平干预敌敌畏 导致的迟发性神经毒性）。在本研究背景 下，上述研究对于评定维拉帕米在免疫学 上尤其是自身免疫学上的直接作用是仍然 很是重要的。
• 血清GFAP和MBP抗体同样能在第7天和21 天检出，这些能够检出的免疫球蛋白的抗 体滴度，注射PSP的母鸡组要显著高于 PSP-维拉帕米母鸡组(Table 1)。
• 第7天和第21天，抗NF-L和抗MBP抗体水 平与临床症状得分呈显著相关 (Fig. 1A)。 同样，这两种蛋白的抗体滴度互为相关(Fig. 1B)。而抗NF-M, NF-H, GFAP IgG的抗体 滴度与临床指征成边缘相关，但不具有统 计学意义。
• 白来航鸡（>7个月， 1.2-1.8公斤），获得 于Department of Poultry Science, Virginia Polytechnic Institute and State University，笼养，自由饮水和取 食，经过一段时间的适应，母鸡被循环胸 肌内注射PSP（2.5 μg/kg，溶解在DMSO 里），和先前描述的一样，分为维拉帕米 （钙通道拮抗剂，溶解在无菌生理盐水中7 mg/kg）干预组和非干预组。
• 抗MBP抗体的存在可能反映轴突损伤中的 次级神经髓鞘变性。由于轴突的损耗和髓 鞘变性， Bungner氏带常常较明显。抗 MBP抗体的存在与人暴露于甲胺磷和毒死 蜱的报告相一致。在后者的研究中，暴露 于毒死蜱的个体有76%（22/29）经血清脊 髓免疫组化法测定含有抗 髓磷脂（MPB） IgG。 本文所报告的注射PSP的母鸡临床得 分与抗MBP抗体的相关性表明：髓鞘的变 性与功能而缺陷有关，而抗NF-L和抗MBP 抗体滴度之间显著相关进一步支持了轴突 变性和髓鞘变性之间的相关性。
• 在第0天和第3天，没有检出任何神经系统五种自 身抗体中的任何一个，NF抗体在单独注射PSP后 的7天检出(Table 1).。抗NF-L IgG，第21天相比 第7天有显著升高。血清抗NF-L抗体滴度，单独 注射PSP的母鸡与PSP-维拉帕米共同注射的母鸡 相比显著升高。在21天时NF-M 和NF-H的抗体也 出现显著升高。在第7天而不是第21天，单独注 射PSP的母鸡血清中NF-M的抗体滴度比PSP-维 拉帕米共同注射的母鸡血清的抗体滴度显著升高。 而且,在第7天，抗NF-M抗体滴度要显著高于NF-L 抗体滴度，而NF-H并不显著高于NF-L。只有在 21天时，，注射PSP的母鸡组的抗NF-H的抗体滴 度显著高于PSP-维拉帕米母鸡组。
4.讨论
• 本研究阐明了把检测血清神经蛋白抗体作 为反映神经毒性及神经病变改善情况的生 物标记物的效用。这次试验使用的母鸡， 被注射了能够诱导神经病变的有机磷和之 前被曾报告能够减轻神经病变的钙通道阻 滞剂-维拉帕米。只注射PSP的母鸡的神经 细胞骨架蛋白(NF)抗体和髓磷脂碱基蛋白 （MBP）抗体水平显著升高。所有暴露的 母鸡中，NF-L和MBP的抗体滴度与临床指 征呈显著相关。
Neurotoxicology and Teratology
Hassan A.N. El-Fawal，Wilfred C. McCain Neurotoxicology Laboratory at Mercy College, USA
1. 前言
• 血清抗神经抗原自身抗体，被建议用于证 明外来物质引起的神经损伤，先前对此的 研究是基于对神经变性疾病，如帕金森， 阿尔茨海默，肌萎缩侧索硬化等。在这些 疾病病中，神经细胞的蛋白抗体、髓磷脂 和受体曾被报告过。尽管这些神经变性并 没有公认与自身免疫有关，但自身免疫的 存在对神经组织的损伤具有指示意义。因 此，在神经毒理学的背景下，我们将提供 一种有效的生物标记来评价和监测潜在的 神经毒性的进展和毒性的改善。
• 在本研究中NF-M和NF-H与临床症状得分之 间缺乏相关性，可能反映了骨架蛋白的磷 酸化状态。在OPIDN过程中神经丝蛋白的 磷酸化会导致神经丝蛋白聚集而导致其运 输减少，这在若干个研究中已被报告出来。 这可能是由于钙调蛋白的蛋白激酶活性增 强而导致，如果是这个原因，则自身抗体 会升高来对抗磷酸化，而不是对抗天然蛋 白，这或许能够解释为什么最初的抗NF-M 水平相比抗NF-L的升高是在第7天而不是第 21天，因此未来的研究将尝试检测抗磷酸 化的神经丝蛋白底物的抗体。
• 众所周知，有机磷化合物（OPs），包括农 药和工业化学品，会对神经系统产生不利 影响，有机磷农药对神经系统的急性毒性 与酯酶的抑制有关。因此，血液胆碱酯酶 活性被作为暴露和神经毒性的测量指标。 然而，其他有机磷化合物，如增塑剂，润 滑剂等，在一次暴露后可引起迟发性神经 毒性(OPIDN)，这种神经病变被认为与神经 毒性酯酶(NTE)的抑制有关。NTE存在于动 物模型的神经组织和人淋巴细胞中。这就 需要一种生物指标，能够反映由这种或其 他神经毒性所引起的神经损伤和毒性的改 善。
• 维拉帕米在PSP注射的前一天开始，连续 注射四天， 在PSP注射前（0天）和注射后 的第3天，第7天和第21天，采用臂静脉穿 刺采血收集血清，此方案类似前瞻性研究， 每只母鸡担当自身对照。染毒后第0 ，3 ， 7 ，9 ，13 ，15 ，18，21天观察母鸡的临 床症状，至少两人进行独立评估和记录并 取平均值。得分根据Sprague建议的比例进 行评分，其中：0为正常，1为步态改变，2 为难以行走和站立，3为严重共济失调，4 为腿部麻痹，5为腿和翅膀瘫痪。
2.2 自身抗体酶联免疫吸附法 （ELISA）
• 所有五种抗神经蛋白抗体的样本分析在研 究结束后的同一天的同一时间进行，血清 中神经典型和胶质典型蛋白的自身抗体按 照El-Fawal所描述的方法测定。
• 纯化的牛脊索蛋白(NF-L; NF-M; NF-H or GFAP; American Research Products, Belmont, MA) or MBP (Sigma-Aldrich)，溶 解于10mM Tris缓冲液（ph=7.4）中，浓度 为5μg/ml（MBP以外），而MBP浓度为 25μg/ml。平底的Immulon微孔板(Fisher Scientific)涂有100 μl蛋白溶液，4 °C过 夜，之前微孔板用含有0.05%吐温-80的Tris 缓冲液润洗三次。非特异性结合位点在室 温下用溶解在Tris缓冲液中的5%脱脂乳溶 液阻滞30分钟
• 第0天和第3天，血清中检测不到五种神经 蛋白抗体的任何一个，这与体液免疫的初 期激发有四天以上的延迟时间相一致。在 此研究背景下，初期激发表现为神经的退 行性病变和自身抗原暴露于免疫效应物。
• NF抗体的升高与OPIDN引起的轴突病变相 一致。在第21天时，抗NF-L IgG的占优可 能反映了与之相关的其他NF的抗原的丰度， 从低分子量到高分子量，以4：2：1或6：2： 1的比例存在，这种NF-L抗体滴度的优势与 McConnell在一次甲胺磷暴露案例中的观察 相一致。NF-L的抗体滴度与临床症状的严 重程度呈显著相关，显示其与周围神经轴 突，中枢神经白质尤其是脊髓的实体损耗 有关。
• 包括中枢神经系统在内的神经系统抗原， 可以适当的刺激免疫活化，并能够在周围 神经中检测到。这说明，在神经元和髓鞘 变性时，比如由环境化合物引起中枢或周 围神经沉淀析出时，具体到这些结构的特 殊蛋白是存在的，尤以细胞内的骨架蛋白 的抗原为甚。不论这些抗体产生于中枢神 经系统还是周围神经系统，它们都能在血 清中和脑脊液中被检测到。
• McConnell在一次由甲胺磷引起的神经病变 个案研究中报告了神经元细胞骨架蛋（神 经丝蛋白NF）和神经胶质蛋白（神经胶质 原纤维酸性蛋白GFAP，和髓磷脂碱基蛋白 MBP）的自身抗体的存在。甲胺磷和其他 的一些有机磷酸盐类，具有诱发OPIDN的 能力。OPIDN的发展可能与其扰乱神经元 钙稳态有关，其表现是钙依赖蛋白酶活性 被激活。在此研究背景下， 显示OPIDN的 进展可以被钙通道阻滞剂如二氢吡啶类 （硝苯地平，尼莫地平）和苯烷基胺 ，维 拉帕米等缓和。
• 微孔板用分析仪在405nm处读数，用于计算 等值的标准曲线采用商用的兔抗神经抗原的 多克隆抗体 (Encor Biotechnology, Gainesville, FL)制作， 标准曲线8个点的范 围从0至2000ng/mL，检测阈值0.20ng/ml。 • 不同时间点和组间的IgG抗体滴度的差异用 Newman–Keuls方差分析进行比较，p<0.05 则认为差异有显著性，除非额外指明，所有 的数据均以均数+标准差的形式表示。自身抗 体滴度与临床症状得分的相关性用线性回归 法进行分析。
ห้องสมุดไป่ตู้
• 在此次研究中能够检测到抗GFAP抗体， OPIDN是一种中枢-周围神经病变，但是目 前还没有关于有机磷导致的神经胶质毒性 的报道。脑GFAP的下降可能是由于压力诱 导的皮脂类固醇的释放导致，然而，在本 研究中GFAP抗体的检出提示明显的骨架蛋 白的分泌。
• 一些OPIDN诱导剂具有明显的抗胆碱酯酶 活性，能够破坏以星形胶质细胞作为神经 接触界面的血脑屏障。而且Guizzetti报告， 用毒死蜱培养星形胶质细胞，会对其增殖 产生抑制效应。然而，如果这种情况发生 在体内，则可能是很短暂，因为GFAP水平 的增加，表明了星形胶质细胞的增生，这 在以前的OPIDN的研究中曾报告过。抗 GFAP抗体的存在及其随时间的增加，与之 前人暴露于甲胺磷的研究报告相一致。
• 这样的话，免疫系统或许提供了一种手段， 使得神经系统的细胞损伤可以被记录并通 过血清来测量。近年来，人们越来越多的 关注能引起神经变性疾病的环境因子，和 反映其神经毒性的生物标记物。神经免疫 应答可能会提供这样一个纽带。一些研究 已经表明，曾在第一次海湾战争中暴露于 有机磷和氨基甲酸磷脂的退伍军人体内， 发现了细胞免疫和体液免疫的异常，如抗 MBP自身抗体和其他非神经抗原的异常。
• 血清稀释度为1：100，用脱脂乳溶液稀释， 每孔加样100μl，一式三份。微孔板室温培 养2小时，之前用含有0.05%吐温-80的Tris 缓冲液润洗三次。小鼠抗鸡碱性磷酸酶IgG (Jackson Immunoresearch)，以1：3000比 例加样后微孔板培养1小时，之前用含有 0.05%吐温-80的Tris缓冲液润洗三次，并加 入碱性磷酸酶底物 • (p-nitrophenylphosphate，Bio-Rad)。 • 终止反应时，每孔加100μl 0.4N NaOH 来 终止反应。
• 本研究的目的在于评估把血清中的抗神经 蛋白作为反映周围神经毒性的生物标志物 的效用。
• 研究暴露于三基甲苯基磷酸酯（TOTP）的 活性同源物苯基水杨苷磷酸酯（PSP）后 所引起的OPIDN的发展，同时实验性的给 予维拉帕米来评价干预效果作为这一评价 的模型系统。
2.方法
• 2.1 动物与处理方法
• 维拉帕米和其他钙通道阻断剂对免疫调节 的证据尚不明确，例如，根据Swash 和 Ingram的研究，维拉帕米加剧了自身免疫 性疾病患者的肌无力症状，而另一些研究 则表明，维拉帕米对由刺激物引起的B淋巴 细胞活化具有抑制作用并能能通过抑制巨 噬细胞的功能来缓解微粒物所致的氧化损 伤。维拉帕米的免疫抑制活动对于证明上 述自身抗体是否能致病有一定作用，但这 还有待进一步确定。应当指出的是，维拉 帕米对PSP导致的迟发神经病的缓解，不 太可能涉及免疫调节。
3.结果
• OPIDN临床症状和NTE的抑制结果，此前 已被McCain发表，注射PSP的母鸡最早在 给药后的第7天便出现了明显的临床症状， 维拉帕米和PSP共同注射的母鸡在第7天并 没有出现明显的共济失调的症状。在后几 天里OPIDN进展加重，在第15天时，所有 的注射PSP母鸡，不管有没有给予维拉帕 米，都出现了不同程度的OPIDN，那些只 给予PSP的母鸡在整个21天的实验过程所 受到的影响都是最严重的。
• El-Fawal先前的研究表明，钙通道阻断剂硝 苯地平和维拉帕米，具有改善有机磷引起 的神经病变的能力，这可能涉及以下方面： 1.卡配因的活化作用减少，线粒体和突触中 的蛋白质磷酸化作用减弱（Wu 注射TOTP 和维拉帕米）。2.激酶活力减弱 （Choudhary 和 Gill，尼莫地平干预敌敌畏 导致的迟发性神经毒性）。在本研究背景 下，上述研究对于评定维拉帕米在免疫学 上尤其是自身免疫学上的直接作用是仍然 很是重要的。
• 血清GFAP和MBP抗体同样能在第7天和21 天检出，这些能够检出的免疫球蛋白的抗 体滴度，注射PSP的母鸡组要显著高于 PSP-维拉帕米母鸡组(Table 1)。
• 第7天和第21天，抗NF-L和抗MBP抗体水 平与临床症状得分呈显著相关 (Fig. 1A)。 同样，这两种蛋白的抗体滴度互为相关(Fig. 1B)。而抗NF-M, NF-H, GFAP IgG的抗体 滴度与临床指征成边缘相关，但不具有统 计学意义。
• 白来航鸡（>7个月， 1.2-1.8公斤），获得 于Department of Poultry Science, Virginia Polytechnic Institute and State University，笼养，自由饮水和取 食，经过一段时间的适应，母鸡被循环胸 肌内注射PSP（2.5 μg/kg，溶解在DMSO 里），和先前描述的一样，分为维拉帕米 （钙通道拮抗剂，溶解在无菌生理盐水中7 mg/kg）干预组和非干预组。
• 抗MBP抗体的存在可能反映轴突损伤中的 次级神经髓鞘变性。由于轴突的损耗和髓 鞘变性， Bungner氏带常常较明显。抗 MBP抗体的存在与人暴露于甲胺磷和毒死 蜱的报告相一致。在后者的研究中，暴露 于毒死蜱的个体有76%（22/29）经血清脊 髓免疫组化法测定含有抗 髓磷脂（MPB） IgG。 本文所报告的注射PSP的母鸡临床得 分与抗MBP抗体的相关性表明：髓鞘的变 性与功能而缺陷有关，而抗NF-L和抗MBP 抗体滴度之间显著相关进一步支持了轴突 变性和髓鞘变性之间的相关性。
• 在第0天和第3天，没有检出任何神经系统五种自 身抗体中的任何一个，NF抗体在单独注射PSP后 的7天检出(Table 1).。抗NF-L IgG，第21天相比 第7天有显著升高。血清抗NF-L抗体滴度，单独 注射PSP的母鸡与PSP-维拉帕米共同注射的母鸡 相比显著升高。在21天时NF-M 和NF-H的抗体也 出现显著升高。在第7天而不是第21天，单独注 射PSP的母鸡血清中NF-M的抗体滴度比PSP-维 拉帕米共同注射的母鸡血清的抗体滴度显著升高。 而且,在第7天，抗NF-M抗体滴度要显著高于NF-L 抗体滴度，而NF-H并不显著高于NF-L。只有在 21天时，，注射PSP的母鸡组的抗NF-H的抗体滴 度显著高于PSP-维拉帕米母鸡组。
4.讨论
• 本研究阐明了把检测血清神经蛋白抗体作 为反映神经毒性及神经病变改善情况的生 物标记物的效用。这次试验使用的母鸡， 被注射了能够诱导神经病变的有机磷和之 前被曾报告能够减轻神经病变的钙通道阻 滞剂-维拉帕米。只注射PSP的母鸡的神经 细胞骨架蛋白(NF)抗体和髓磷脂碱基蛋白 （MBP）抗体水平显著升高。所有暴露的 母鸡中，NF-L和MBP的抗体滴度与临床指 征呈显著相关。