ABO血型鉴定不规则抗体筛选

为什么这次试验没有安排玻片法 的反定型？

因为存在于病人或献血者血清中的抗 Ａ及抗Ｂ，个体差异很大，如果效价较 弱，在玻片上不足以凝集大量抗原阳性 的红细胞，造成假阴牲的结果所以采用 玻片法作反定型的结果常不可靠。而用 试管离心法作反定型，则促进抗原抗体 反应，形成肉眼可见的凝块，使结果更 为可靠
谢谢
ＡＢＯ正反定型结果不一致的常 见原因有哪些？


（１）人为因素：①试剂不标准、失效或污染； ③操作中加错样本或试剂、离心速度不足或过 度、细胞与血清比例不当、结果判断错误等。 （２）客观因素：①因某些疾病导致抗原减弱 如：白血病，MDS（骨髓增生异常综合征）患 者血型抗原减弱导致误定血型。②受检者抗体 效价低（如婴幼儿、老年人、大量输液的患者， 血浆蛋白低下等）③某些药物干扰如输注右旋 糖酐后会干扰血型检定。
四 实验步骤.swf

1. 玻片法
（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端 用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清 上，注意勿使滴管与血清相接触。 （3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型标准
二 实验原理

血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在 ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种 抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型 鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清 （含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗 体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者 红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系 统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、 B、AB、O四型。 见下表


A标准血清 B标准血清 2滴 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。 取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块， 管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完全不 凝的试管，血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手 轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为 均匀的悬液;轻微凝集的，必须将液体转到载玻片上镜 检后判定凝集程度。
A 2滴
B
试管法(反定型)

受检者血清 5%的A型红细胞悬液 5%的B型红细胞悬液 1滴 5%的O型红细胞悬液 1滴 立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。 轻轻扣动试管底部，观察结果----同前
Ac 2滴 1滴
Bc 2滴
Oc 2滴
血型判定swf
正定型 抗A 抗B
ABO血型鉴定

不规则抗体筛选

玻片法（正定型）
盐水法

聚凝胺法

试管法（正定型,反 定型）

Байду номын сангаас
抗人球法
ABO血型鉴定实验原理


抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞 膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A 和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗 B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红 细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型 抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥 形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图
A型RBC
反定型
B型RBC O型RBC
结果
+ -
+
+
+
+
+ -
-
O
A B
+
+
-
-
-
AB
五 注意事项



玻片、试管都要标记！！！， A及B标准血清绝对不能相混,不 要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！ 所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。 红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一 侧就不能去接触另一侧。 一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。 离心时间、速度严格要求，以防假阳 性或假阴性结果。 试验用血清和试剂红细胞都应标准化。 要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应 注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录 观察结果。
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
试剂

抗A、抗B试剂血清 5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液 受检者血清 5%的受检者红细胞悬液 (从指尖或耳垂取血一 滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀， 即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75 ％酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细 胞（约0.2~0.5 ml）用生理盐水洗涤3次，然 后加入适量生理盐水调配成5%浓度。)
血清和红细胞悬液


（4）观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集 块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍 显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （5） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集， 判断其血型。
2.试管法(正定型)