产阿魏酸酯酶菌株的筛选与产酶条件优化
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
DOI:10. 13995 / j. cnki. 11 - 1802 / ts. 026092 引用格式:段晓莉,江波,张涛. 产阿魏酸酯酶菌株的 筛 选 与 产 酶 条 件 优 化 [ J] . 食 品 与 发 酵 工 业,2021,47 (12) :154 - 160. DUAN
目标菌株纯培养物划线于 LB 平板,观察菌落形 态和颜色;并进行 革 兰 氏 染 色 及 菌 株 个 体 形 态 观 察 。 1. 5. 2 生理生化特征
参照《 伯杰氏系统细菌学手册》 [15] 及《 常 见 细 菌 系统鉴定手册》 [16] 进行目标菌株生理生化特征检测。 1. 5. 3 分子生物学鉴定
小麦麸皮:江苏无锡欧尚超市。 1. 1. 2 仪器与设备
Agilent 1200 型高效液相色谱仪,美国 Agilent 公 司;Waters ACQUITY UPLC 液相色谱串联四极杆飞行 时间质谱仪,美国沃特世公司。
第一作者:硕士研究生( 张涛教授为通讯作者,E-mail:zhangtao@ jiangnan. edu. cn) 基金项目:国家食品科学与工程一流学 科 建 设 项 目 ( JUFSTR20180203 ) ;江 南 大 学 食 品 科 学 与 技 术 国 家 重 点 实 验 室 自 由 探 索 资 助 课 题 项 目
自然,121 ℃ 灭菌 20 min。 筛选固体培养基 ( g / L) :NaNO3 2,K2 HPO4 ·3H2 O
1,KCl 0. 5,MgSO4 ·7H2 O 0. 5,FeSO4 ·7H2 O 0. 01,琼 脂 15 ~ 20;pH 值自然,115 ℃ 灭菌 30 min。 0. 22 μm 滤 膜过滤 100 mg / L 阿魏酸乙酯的 N,N-二 甲 基 甲 酰 胺 溶液,添加 10% ( 体积分数) 阿魏酸乙酯溶液至灭菌 培养基中,摇 匀 至 培 养 基 呈 均 匀 的 乳 白 色 溶 液 后 倒 平板。
称取土样 1. 0 g 加入到 10 mL 含玻璃珠的无菌 水,于 30 ℃ ,200 r / min 振荡 30 min,静置 2 min 后取 上清液梯度稀释,并将稀释悬浮液取 100 μL 涂布于 分离培养基,倒置于 30 ℃ 培养箱培养至单菌落长出。 1. 2. 2 菌株筛选
将分离培养基的单菌落挑至筛选培养基,利用 以阿魏酸 乙 酯 为 唯 一 碳 源 的 筛 选 平 板 筛 选。 于 30 ℃ 培养箱倒 置 24 h,观 察 菌 落 周 围 是 否 有 透 明 圈出现。 若有透明圈,则说明该菌株具有阿魏酸酯 酶活性。
阿魏酸酯酶 ( feruloyl esterase,FAE,E. C. 3. 1. 1. 73) ,属于羧酸酯酶亚类,可催化水解阿魏酸与多糖、 纤维素、木质素间的酯键或醚键,生成阿魏酸[5] 。 此 外,在三元有机溶 剂 体 系 中, 阿 魏 酸 酯 酶 还 可 通 过 酯 交换反应生产阿魏酰寡糖或羟基肉桂酸酯等衍 生 物[6] 。 FAE 广 泛 分 布 于 植 物 和 微 生 物 中, 目 前 产 FAE 微生物主要有曲霉属[7] 、青霉属[8] 等丝状真菌, 放线菌[9] 、乳 酸 菌[10] 、 芽 孢 杆 菌[11] 等 细 菌。 不 同 来
将有阿魏酸酯酶活性的菌落划线纯化,将纯培养 物接种至种子培养基,30 ℃ ,200 r / min 培 养 18 h,按 5% 接种量接种至基础发酵产酶培养基培养 7 d,定时 取发酵液检测其是否存在阿魏酸酯酶活性。 1. 3 阿魏酸酯酶活力测定 1. 3. 1 测定方法
粗酶液制备:1 mL 发酵液室温下以 10 000 r / min 离心 10 min,发酵上清液即为粗酶液。
生产与科研应用
其他操作相同。
酶活力单位 定 义: 一 定 温 度 下,1 min 水 解 阿 魏
酸甲酯生成 1 μmol 阿魏酸所需要的酶量为 1 个酶活
力条件 色 谱 条 件 参 照 文 献[14] 的 方 法, 并 加 以 改 进。
Agilent 1200 型高 效 液 相 色 谱 仪;色 谱 柱 为 ZORBAX
菌株 16S rRNA 基 因 测 序 由 天 一 辉 远 生 物 科 技 有限公司 完 成。 将 16S rRNA 序 列 在 NCBI ( National center for Biotechnology Information) 数 据 库 进 行 比 对
2021 年第 47 卷第 12 期( 总第 432 期) 155
Eclipse Plus C18 ( Agilent,4. 6 mm × 150 mm,3. 5 μm) ; 紫外检测器;流动相 A:1% 乙酸溶液,流动相 B:甲
醇;流速 1 mL / min;柱温 30 ℃ ;检测波长 320 nm,梯
度洗脱程序如表 1 所示。
表 1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution program
基础发酵产酶培养基[13] ( g / L) :麦麸 20,NaNO3 2,K2 HPO4 · 3H2 O 1, KCl 0. 5, MgSO4 · 7H2 O 0. 5, FeSO4 ·7H2 O 0. 01;pH 值自然,115 ℃ 灭菌 30 min。
LB 培养基( g / L) : 胰 蛋 白 胨 10, 酵 母 提 取 物 5, NaCl 10;pH 值自然,121 ℃ 灭菌 20 min。 1. 2 菌株筛选 1. 2. 1 菌株分离
时间 / min 0
0. 23 1. 66 4. 97 5. 57 7. 52 7. 60
A 相/% 90 70 50 0 85 90 90
B 相/% 10 30 50 100 15 10 10
1. 4 酶反应产物 LC-MS 鉴定 色谱条件:Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色 谱
产阿魏酸酯酶菌株的筛选与产酶条件优化
段晓莉,江波,张涛∗
( 江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,江苏 无锡,214122)
摘 要 该研究从土壤中分离得到可利用阿魏酸乙酯为唯一碳源且产阿魏酸酯酶的菌株,经过摇瓶发酵和液相 色谱定性定量分析,获得 1 株阿魏酸酯酶活力较高的菌株 SK52. 001,将发酵上清液的酶反应产物 通 过 LC-MS 分 析产物分子质量,确定该上清液中含阿魏酸酯酶。 对目标菌株进行分子生物学鉴定,并结合形态学特征和生理 生化实验确认该菌株为短小芽孢杆菌,并命名为 Bacillus pumilus SK52. 001。 通过对目标菌株进行发酵 制 备 阿 魏 酸酯酶研究发现,在 30 ℃ ,200 r / min,接种量 5% 的条件下,在 45 g / L 麦 麸 为 碳 源,5 g / L 胰 蛋 白 胨 为 氮 源,初 始 pH 值为 6. 0 时,摇瓶培养 26 h 的酶活力可达到 421 U / L,较优化前酶活力 195 U / L 提高 115% 。 当菌株在以 45 g / L 葡萄糖为碳源的发酵培养基中培养 8 h 后,加入麸皮诱导产酶 44 h,发酵液中阿魏酸酯酶活力达到 808 U / L。 关键词 阿魏酸酯酶;筛选;鉴定;短小芽孢杆菌;发酵优化
质谱条件:锥 孔 电 压 30 V;毛 细 管 电 压 3. 5 V; ESI 阴离子电离喷雾源;脱 溶 剂 汽 温 度 400 ℃ ;脱 溶 剂汽流量 700 L / h;离子源温度 100 ℃ ;锥孔汽 流 量 50 L / h;质量扫描范围 20 ~ 2 000 m / z。 1. 5 目标菌株鉴定 1. 5. 1 菌株形态鉴定
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
分析,并采用 MEGA 7. 0 软件绘制系统发育树。 1. 6 发酵产酶条件优化
发酵条件 采 用 以 下 方 式: 挑 取 单 菌 落 至 50 mL LB 培养基于 30 ℃ ,200 r / min 培养 18 h 后,按 5% 接 种量 接 种 至 发 酵 产 酶 培 养 基,30 ℃ ,200 r / min 培 养 26 h,250 mL 锥 形 瓶 装 液 量 为 25 mL,测 定 发 酵 结 束 的菌体生长量及发酵上清液酶活力,每次优化的结果 均用于之后的实验中。 1. 6. 1 碳源种类及浓度
本研究从土壤中分离鉴定得到 1 株产阿魏酸酯 酶的菌株 SK52. 001;确定了最佳碳源及浓度,最佳氮 源和培养基初始 pH 值;明确 FAE 是诱导性酶,为更 多细菌来源的阿魏酸酯酶提供了理论依据和 技 术 支持。
1 材料与方法
1. 1 试验材料 1. 1. 1 材料
土壤:在江苏无锡贡湖湾湿地和长广溪湿地随机 挑选 10 个地点采集土壤下 5 ~ 10 cm 深腐殖质土壤。
柱( 2. 1 mm × 150 mm, 1. 7 μm ) ; Waters ACQUITY PDA 检测器;流动相 A:0. 1% 甲酸,流动相 B:乙腈; 梯度洗脱分离条件:0 ~ 40 min,100% ~ 70% A;40 ~ 45 min,70% ~ 20% A;45 ~ 50 min,20% ~ 0% A; 50 ~ 55 min,0% ~ 100% A; 流 速 0. 3 mL / min; 柱 温 45 ℃ 。
源 FAE 其酶学性质、序列同源性、空间结构有较大差 异,目前对黑曲霉来源的 FAE 研究较深入。 尽 管 真 菌产阿魏酸酯 酶 能 力 强,但 真 菌 来 源 的 FAE 分 离 困 难,发酵酶活力低,耐 热 性 差 等 缺 点 导 致 其 难 以 规 模 化生产[12] ,因此发掘更多细菌来源、酶活力高的阿魏 酸酯酶成为亟需解决的问题并获得国内外学者广泛 关注。
酶反应:1 mL 酶反应体系中含 250 μL 粗酶液和 750 μL 浓 度 为 0. 003 mol / L 阿 魏 酸 甲 酯 ( 溶 解 在 0. 050 mol / L Tris-HCl 缓冲溶液,pH 值 8. 0) 。 酶反应 体系在 50 ℃ 水 浴 锅 反 应 15 min 后 立 即 煮 沸 灭 酶 10 min ,终止酶反应,12 000 r / min 离心 2 min,取上清 液制样。 以加入等量蒸馏水代替粗酶液为空白对照,
Xiaoli,JIANG Bo,ZHANG Tao. Screening of feruloyl esterase-producing strains and optimization of its fermentation conditions [ J] . Food and Fermentation Industries,2021,47(12) :154 - 160.
阿魏 酸 ( ferulic acid, FA ) 广 泛 存 在 于 植 物 细 胞 壁,与 多 糖、 木 质 素 间 以 醚 键 或 酯 键 形 成 网 状 结 构[1] ,以增强细胞机械强度与完整性,同时降低生物 分解率[2] 。 FA 是公认 安 全 的 抗 氧 化 剂,在 欧 洲 国 家 已被列入食品添加剂。 此外,研究表明,FA 具有紫外 吸收、抗菌消炎、防癌降脂等生物活性,在医药、化妆、 造纸等领域有广泛 应 用 前 景[3] 。 目 前,生 产 阿 魏 酸 方法有植物提取法、化学合成法和生物酶法。 植物提 取法通过酸碱水解的方式破坏植物内其他高价值化 学成分,同时副产 物 增 多,产 物 分 离 困 难,因 此 能 耗 大,污染环境。 化学合成法通过有机反应合成 FA,但 反应时间长,环境污染严重。 相比而言,生物酶法则 具有反应条件温和,专一性高,产物得率高,对环境友 好等优点[4] ,这些优点使生物酶法成为生产 FA 的研 究热点。
( SKLF-ZZB-202005) 收稿日期:2020-11-05 ,改回日期:2020 -12 -04
154 2021 Vol. 47 No. 12 ( Total 432)
1. 1. 3 培养基 分离 培 养 基 ( g / L) : 马 铃 薯 200, 蔗 糖 20, 琼 脂
15 ~ 20;pH 值自然,121 ℃ 灭菌 20 min。 种子培养 基 ( g / L) :马 铃 薯 200,蔗 糖 20;pH 值
DOI:10. 13995 / j. cnki. 11 - 1802 / ts. 026092 引用格式:段晓莉,江波,张涛. 产阿魏酸酯酶菌株的 筛 选 与 产 酶 条 件 优 化 [ J] . 食 品 与 发 酵 工 业,2021,47 (12) :154 - 160. DUAN
目标菌株纯培养物划线于 LB 平板,观察菌落形 态和颜色;并进行 革 兰 氏 染 色 及 菌 株 个 体 形 态 观 察 。 1. 5. 2 生理生化特征
参照《 伯杰氏系统细菌学手册》 [15] 及《 常 见 细 菌 系统鉴定手册》 [16] 进行目标菌株生理生化特征检测。 1. 5. 3 分子生物学鉴定
小麦麸皮:江苏无锡欧尚超市。 1. 1. 2 仪器与设备
Agilent 1200 型高效液相色谱仪,美国 Agilent 公 司;Waters ACQUITY UPLC 液相色谱串联四极杆飞行 时间质谱仪,美国沃特世公司。
第一作者:硕士研究生( 张涛教授为通讯作者,E-mail:zhangtao@ jiangnan. edu. cn) 基金项目:国家食品科学与工程一流学 科 建 设 项 目 ( JUFSTR20180203 ) ;江 南 大 学 食 品 科 学 与 技 术 国 家 重 点 实 验 室 自 由 探 索 资 助 课 题 项 目
自然,121 ℃ 灭菌 20 min。 筛选固体培养基 ( g / L) :NaNO3 2,K2 HPO4 ·3H2 O
1,KCl 0. 5,MgSO4 ·7H2 O 0. 5,FeSO4 ·7H2 O 0. 01,琼 脂 15 ~ 20;pH 值自然,115 ℃ 灭菌 30 min。 0. 22 μm 滤 膜过滤 100 mg / L 阿魏酸乙酯的 N,N-二 甲 基 甲 酰 胺 溶液,添加 10% ( 体积分数) 阿魏酸乙酯溶液至灭菌 培养基中,摇 匀 至 培 养 基 呈 均 匀 的 乳 白 色 溶 液 后 倒 平板。
称取土样 1. 0 g 加入到 10 mL 含玻璃珠的无菌 水,于 30 ℃ ,200 r / min 振荡 30 min,静置 2 min 后取 上清液梯度稀释,并将稀释悬浮液取 100 μL 涂布于 分离培养基,倒置于 30 ℃ 培养箱培养至单菌落长出。 1. 2. 2 菌株筛选
将分离培养基的单菌落挑至筛选培养基,利用 以阿魏酸 乙 酯 为 唯 一 碳 源 的 筛 选 平 板 筛 选。 于 30 ℃ 培养箱倒 置 24 h,观 察 菌 落 周 围 是 否 有 透 明 圈出现。 若有透明圈,则说明该菌株具有阿魏酸酯 酶活性。
阿魏酸酯酶 ( feruloyl esterase,FAE,E. C. 3. 1. 1. 73) ,属于羧酸酯酶亚类,可催化水解阿魏酸与多糖、 纤维素、木质素间的酯键或醚键,生成阿魏酸[5] 。 此 外,在三元有机溶 剂 体 系 中, 阿 魏 酸 酯 酶 还 可 通 过 酯 交换反应生产阿魏酰寡糖或羟基肉桂酸酯等衍 生 物[6] 。 FAE 广 泛 分 布 于 植 物 和 微 生 物 中, 目 前 产 FAE 微生物主要有曲霉属[7] 、青霉属[8] 等丝状真菌, 放线菌[9] 、乳 酸 菌[10] 、 芽 孢 杆 菌[11] 等 细 菌。 不 同 来
将有阿魏酸酯酶活性的菌落划线纯化,将纯培养 物接种至种子培养基,30 ℃ ,200 r / min 培 养 18 h,按 5% 接种量接种至基础发酵产酶培养基培养 7 d,定时 取发酵液检测其是否存在阿魏酸酯酶活性。 1. 3 阿魏酸酯酶活力测定 1. 3. 1 测定方法
粗酶液制备:1 mL 发酵液室温下以 10 000 r / min 离心 10 min,发酵上清液即为粗酶液。
生产与科研应用
其他操作相同。
酶活力单位 定 义: 一 定 温 度 下,1 min 水 解 阿 魏
酸甲酯生成 1 μmol 阿魏酸所需要的酶量为 1 个酶活
力条件 色 谱 条 件 参 照 文 献[14] 的 方 法, 并 加 以 改 进。
Agilent 1200 型高 效 液 相 色 谱 仪;色 谱 柱 为 ZORBAX
菌株 16S rRNA 基 因 测 序 由 天 一 辉 远 生 物 科 技 有限公司 完 成。 将 16S rRNA 序 列 在 NCBI ( National center for Biotechnology Information) 数 据 库 进 行 比 对
2021 年第 47 卷第 12 期( 总第 432 期) 155
Eclipse Plus C18 ( Agilent,4. 6 mm × 150 mm,3. 5 μm) ; 紫外检测器;流动相 A:1% 乙酸溶液,流动相 B:甲
醇;流速 1 mL / min;柱温 30 ℃ ;检测波长 320 nm,梯
度洗脱程序如表 1 所示。
表 1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution program
基础发酵产酶培养基[13] ( g / L) :麦麸 20,NaNO3 2,K2 HPO4 · 3H2 O 1, KCl 0. 5, MgSO4 · 7H2 O 0. 5, FeSO4 ·7H2 O 0. 01;pH 值自然,115 ℃ 灭菌 30 min。
LB 培养基( g / L) : 胰 蛋 白 胨 10, 酵 母 提 取 物 5, NaCl 10;pH 值自然,121 ℃ 灭菌 20 min。 1. 2 菌株筛选 1. 2. 1 菌株分离
时间 / min 0
0. 23 1. 66 4. 97 5. 57 7. 52 7. 60
A 相/% 90 70 50 0 85 90 90
B 相/% 10 30 50 100 15 10 10
1. 4 酶反应产物 LC-MS 鉴定 色谱条件:Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色 谱
产阿魏酸酯酶菌株的筛选与产酶条件优化
段晓莉,江波,张涛∗
( 江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,江苏 无锡,214122)
摘 要 该研究从土壤中分离得到可利用阿魏酸乙酯为唯一碳源且产阿魏酸酯酶的菌株,经过摇瓶发酵和液相 色谱定性定量分析,获得 1 株阿魏酸酯酶活力较高的菌株 SK52. 001,将发酵上清液的酶反应产物 通 过 LC-MS 分 析产物分子质量,确定该上清液中含阿魏酸酯酶。 对目标菌株进行分子生物学鉴定,并结合形态学特征和生理 生化实验确认该菌株为短小芽孢杆菌,并命名为 Bacillus pumilus SK52. 001。 通过对目标菌株进行发酵 制 备 阿 魏 酸酯酶研究发现,在 30 ℃ ,200 r / min,接种量 5% 的条件下,在 45 g / L 麦 麸 为 碳 源,5 g / L 胰 蛋 白 胨 为 氮 源,初 始 pH 值为 6. 0 时,摇瓶培养 26 h 的酶活力可达到 421 U / L,较优化前酶活力 195 U / L 提高 115% 。 当菌株在以 45 g / L 葡萄糖为碳源的发酵培养基中培养 8 h 后,加入麸皮诱导产酶 44 h,发酵液中阿魏酸酯酶活力达到 808 U / L。 关键词 阿魏酸酯酶;筛选;鉴定;短小芽孢杆菌;发酵优化
质谱条件:锥 孔 电 压 30 V;毛 细 管 电 压 3. 5 V; ESI 阴离子电离喷雾源;脱 溶 剂 汽 温 度 400 ℃ ;脱 溶 剂汽流量 700 L / h;离子源温度 100 ℃ ;锥孔汽 流 量 50 L / h;质量扫描范围 20 ~ 2 000 m / z。 1. 5 目标菌株鉴定 1. 5. 1 菌株形态鉴定
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
分析,并采用 MEGA 7. 0 软件绘制系统发育树。 1. 6 发酵产酶条件优化
发酵条件 采 用 以 下 方 式: 挑 取 单 菌 落 至 50 mL LB 培养基于 30 ℃ ,200 r / min 培养 18 h 后,按 5% 接 种量 接 种 至 发 酵 产 酶 培 养 基,30 ℃ ,200 r / min 培 养 26 h,250 mL 锥 形 瓶 装 液 量 为 25 mL,测 定 发 酵 结 束 的菌体生长量及发酵上清液酶活力,每次优化的结果 均用于之后的实验中。 1. 6. 1 碳源种类及浓度
本研究从土壤中分离鉴定得到 1 株产阿魏酸酯 酶的菌株 SK52. 001;确定了最佳碳源及浓度,最佳氮 源和培养基初始 pH 值;明确 FAE 是诱导性酶,为更 多细菌来源的阿魏酸酯酶提供了理论依据和 技 术 支持。
1 材料与方法
1. 1 试验材料 1. 1. 1 材料
土壤:在江苏无锡贡湖湾湿地和长广溪湿地随机 挑选 10 个地点采集土壤下 5 ~ 10 cm 深腐殖质土壤。
柱( 2. 1 mm × 150 mm, 1. 7 μm ) ; Waters ACQUITY PDA 检测器;流动相 A:0. 1% 甲酸,流动相 B:乙腈; 梯度洗脱分离条件:0 ~ 40 min,100% ~ 70% A;40 ~ 45 min,70% ~ 20% A;45 ~ 50 min,20% ~ 0% A; 50 ~ 55 min,0% ~ 100% A; 流 速 0. 3 mL / min; 柱 温 45 ℃ 。
源 FAE 其酶学性质、序列同源性、空间结构有较大差 异,目前对黑曲霉来源的 FAE 研究较深入。 尽 管 真 菌产阿魏酸酯 酶 能 力 强,但 真 菌 来 源 的 FAE 分 离 困 难,发酵酶活力低,耐 热 性 差 等 缺 点 导 致 其 难 以 规 模 化生产[12] ,因此发掘更多细菌来源、酶活力高的阿魏 酸酯酶成为亟需解决的问题并获得国内外学者广泛 关注。
酶反应:1 mL 酶反应体系中含 250 μL 粗酶液和 750 μL 浓 度 为 0. 003 mol / L 阿 魏 酸 甲 酯 ( 溶 解 在 0. 050 mol / L Tris-HCl 缓冲溶液,pH 值 8. 0) 。 酶反应 体系在 50 ℃ 水 浴 锅 反 应 15 min 后 立 即 煮 沸 灭 酶 10 min ,终止酶反应,12 000 r / min 离心 2 min,取上清 液制样。 以加入等量蒸馏水代替粗酶液为空白对照,
Xiaoli,JIANG Bo,ZHANG Tao. Screening of feruloyl esterase-producing strains and optimization of its fermentation conditions [ J] . Food and Fermentation Industries,2021,47(12) :154 - 160.
阿魏 酸 ( ferulic acid, FA ) 广 泛 存 在 于 植 物 细 胞 壁,与 多 糖、 木 质 素 间 以 醚 键 或 酯 键 形 成 网 状 结 构[1] ,以增强细胞机械强度与完整性,同时降低生物 分解率[2] 。 FA 是公认 安 全 的 抗 氧 化 剂,在 欧 洲 国 家 已被列入食品添加剂。 此外,研究表明,FA 具有紫外 吸收、抗菌消炎、防癌降脂等生物活性,在医药、化妆、 造纸等领域有广泛 应 用 前 景[3] 。 目 前,生 产 阿 魏 酸 方法有植物提取法、化学合成法和生物酶法。 植物提 取法通过酸碱水解的方式破坏植物内其他高价值化 学成分,同时副产 物 增 多,产 物 分 离 困 难,因 此 能 耗 大,污染环境。 化学合成法通过有机反应合成 FA,但 反应时间长,环境污染严重。 相比而言,生物酶法则 具有反应条件温和,专一性高,产物得率高,对环境友 好等优点[4] ,这些优点使生物酶法成为生产 FA 的研 究热点。
( SKLF-ZZB-202005) 收稿日期:2020-11-05 ,改回日期:2020 -12 -04
154 2021 Vol. 47 No. 12 ( Total 432)
1. 1. 3 培养基 分离 培 养 基 ( g / L) : 马 铃 薯 200, 蔗 糖 20, 琼 脂
15 ~ 20;pH 值自然,121 ℃ 灭菌 20 min。 种子培养 基 ( g / L) :马 铃 薯 200,蔗 糖 20;pH 值