ccna-BCR1002A
双波长薄层扫描法测定参芪癌宁注射液中蟾酥的含量
双波长薄层扫描法测定参芪癌宁注射液中蟾酥的含量
常增荣;孙毅坤
【期刊名称】《中国中药杂志》
【年(卷),期】1991(16)6
【摘要】通过对样品液的提取、净化等处理,采用双波长薄层扫描法测定参芪癌宁注射液中微量蟾酥的含量,结果表明方法准确,重现性好。
【总页数】2页(P350-351)
【关键词】蟾酥;参芪癌宁;薄层扫描;注射液
【作者】常增荣;孙毅坤
【作者单位】北京市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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测序通用引物列表测序通用引物列表载体名称上游引物（5'primer）下游引物（3'primer）P3*FLAG-CMV CMV-30(825-854) CMV-24(1129-1152) pAc5.1/V5-His(_A,_B,_C) pAc5-5 BGH rev pAcG2T pGEX-5 not availablepACT T7EEV T3/EBVrevpACT2 GAL4 ADfor pGAL4-ADrvpACT2 p17110 p12584pACYC184(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBampACYCDuet-1(MCSI) ACYCDuetUP1 Primer DuetDOWN1pACYCDuet-1(MCSII) DuetUp2 T7-Terminator pAdEasy-1 not available not availablepAdTrack-CMV not available not available pAS2-1 GAL4 Bdfor/P24990 pGAL4-BDrv/P31430pB42AD pB42ADF PB42ADRpBABE pBMN_5'pBacPAK8 BAC1 BAC2pBAD pBAD-F pBAD-R pBAD/HisABC pBAD-5'pBBR1MCS T3/M13rev T7/M13forpBD-GAL4 pBD-GAL4-F PBD-GAL4-RpBI121 35S NOSpBIND GAL4-Bdfor T3,EBVrevpBK-CMV M13F/T7 M13R/T3 pBluescriptIIKS(+/-) T3/M13rev T7/M13for（优先用M13F）pBluescriptIISK(+/-) T3/M13rev T7/M13forpBluescriptKS(+/-) T3/M13rev T7/M13forpBluescriptSK(+/-) T3/M13rev T7/M13forpBR322(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBampBR322(EcoRI/HindIII-sites) pBRforEco pBRrevHind pBR325(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBampBR329(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam pBridge(MCSI) GAL4-Bdfor 3'BDpBridge(MCSII) not available not available pBS-T II T3/M13rev T7/M13for pBS（AMP）T7 T3 pBSR T3 T7ter pBudCE4.1(MCSI) CMV-Profor,T7 c-mycrev,EBVrevpBudCE4.1(MCSII) EF-1α Fwd BGHpBudCE4.1/lacZ/CAT CMV-Profor,T7 c-mycrev,EBVrev pBV220 pBV220F PBV220RpCAL-c T7/Tac-Profor T7-TerminatorpCAL-n T7/Tac-Profor T7-Terminator pCAMBIA1301(1300) pCAMBIA1301-5'(ECORI)/M13R pCAMBIA1301-3'(HindIII) pCAMBIA1304 pCAMBIA1301-5'(ECORI) pCAMBIA1301-3'(HindIII) pCAMBIA2300 M13R(-48) M13F(-47)/M13F(-49) pCANTB5E S1 S6pCAT3-enhancer RVP3 此载体无反向引物pCDFDuet-1(MCSI) ACYCDuetUP1 Primer DuetDOWN1pCDFDuet-1(MCSII) DuetUP2 T7TER pcDNA1.1 CMV-Profor,T7 pCDM8-3pcDNA2.1 M13for/T7 M13rev/Tac-ProforpcDNA3 T7/CMV-Profor BGH rev/SP6 pcDNA3.1(+/-) pcDNA3.1F/T7/CMV-Profor BGH rev pcDNA3.1/His(_A,_B,_C) T7/CMV-Profor BGH rev pcDNA3.1/myc-His(_A,_B,_C) T7/CMV-Profor BGH rev/c-mycrev pcDNA3.1/V5-His(_A,_B,_C) T7/CMV-Profor BGH rev/V5rev pcDNA3.1/Hygro(+,-) T7/CMV-Profor BGH rev/V5revpcDNA3.1/Zeo(+.-) T7 BGHrevpcDNA3.3TOPOTA CMV-Profor TKPAreverse pcDNA4/HisMax(_A,_B,_C) Xpressfor BGH revpcDNA4/HisMax-TOPO Xpressfor BGH rev pcDNA4/HisMax-TOPO/lacZ Xpressfor BGH rev pcDNA4/myc-His(_A,_B,_C) T7,CMV-Profor BGH rev,c-mycrev pcDNA4/TO TREfor/CMV-Profor BGH rev pcDNA4/V5-His(_A,_B,_C) CMV-Profor,T7 BGH rev,V5rev pcDNA4-TET/ON/AMP+ CMV-ProforpcDNA5/FRT T7/CMV-Profor BGH rev pcDNA6/myc-His(_A,_B,_C) CMV-Profor,T7 BGH rev,c-mycrev pcDNA6/V5-His(_A,_B,_C) CMV-Profor,T7 BGH rev,V5rev pCEP4 pCEP-F/CMV-Profor EBVrevpCI T7（17BASE）EBVrevpCI-neo T7（17BASE）EBVrev,T3pCMS-EGFP T7 T3pCMS-EGFP T7 EBVrev,T3pCMV-3Tag-4A T3 /PFLAG-CMV-F T7 pCMV5 pCMV5F PCMV5RpCMV6 CMV-Profor pCMV6-3、HGHrevpCMV6-XL4 CMV-Profor/T7 pCMV6-3、HGHrevpCMV-HA PCMV-F,CMV-Profor,TREfor PCMV-R，EBVrev pCMV-MYC(AMP+) PCMV-F PCMV-R, EBVrevpCMVmyc/nuc CMV-Profor BGH rev,c-mycrev pcmv-scriptEXVector T3 T7 pCMV-Sport6 T7/M13for SP6/M13rev pCOLADuet-1(MCSI) ACYCDuetUP1 Primer DuetDOWN1 pCOLADuet-1(MCSII) DuetUP2 T7TER pCR2.1 T7,M13for M13rev pCR2.1-TOPO M13for,T7 M13rev pCR3.1 T7 BGH rev pCR3.1-Uni T7 BGH rev pCR4 T3/M13rev T7/M13for pCR4-Blunt T3/M13rev T7/M13forpCR4-TOPO M13rev,T3 M13for,T7pCR-Blunt M13rev T7,M13forpCR-BluntII M13rev/SP6 T7/M13for pCR-BluntII-TOPO M13rev/SP6 M13for/T7 pCRII M13rev/SP6 T7/M13for pCRII-TOPO M13rev/SP6 M13for/T7pCR-ScriptSK(+) T7/M13for T3/M13revpCR-XL-TOPO M13rev T7,M13forpCS2+(MCSI) SP6 EBVrev,T7?pCS2+(MCSII) T3 pSG5-3pDB_GAL4cam T7PpDB_leu PDBLeu-5 PDBLeu-3pDEST22 DEST22F DEST22RpDEST15 pGEX-5 T7-TerminatorpDEST20 pGEX-5 pFastBac-3pDEST26 TREfor/CMV-Profor T7/M13forpDisplay T7/CMV-Profor c-mycrev pDNR-LIB(MCS_A) M13for,T7 pSG5-3,M13R pDonar M13F M13RpDONR201 PDONR-F PDONR-RpDONR207 PDONR-F PDONR-RpDONR223 M13F M13RpDrive T7/M13rev SP6/M13for pDsRED1-C1 (DsRed1-N-f) DsRed1-C-rpDsRed1-N1 CMV-Profor RFP-Nrev,CMV-R?pDsRed2-N1 (DsRed1-N-f) DsRed1-C-rpDsRed2-C1 (DsRed1-N-f) DsRed1-C-r pDsRED2-C1(KAN+) pDsRED-ex-C1-F pEGFP-N-3’ pDsRed-Express dsRed1_N_primer/CMV-F dsRed1_C_primer/CMV-R pDSRED-monomer-N1(KAN+) dsRed1_N_primerpDSRED-N1(KAN+) pEGFP-N-5’ pDSRED-N-RpEASY-Blunt M13F T7/ M13RpEASY-BluntSimple M13F T7/ M13R（距离插入位点合适，优先安排）pEASY-T1 Simple M13F M13R（距离插入位点合适，优先安排）pEASY-T1 M13F/T7 M13RpEASY-T3 M13F/T7 M13R/SP6pECFP-N(C) PECFP-N-5. PECFP-N-3,pEF/myc/cyto/ER/mito/nuc pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEF1(4,6/myc-His) T7/pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEF1(4,6/V5-His) T7/pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEF1(4;6/His_A;_B;_C) T7/Xpressfor Pcdna3.1R/BGH rev pEF5/FRT/V5-D(-TOPO) T7/pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEGFP M13rev EGFP-NrevpEGFP-1 not available EGFP-Nrev/ PEGFP-N-3′pEGFP-C PEGFP-C-5′ PEGFP-C-3′pEGFP-C1 EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-C2 EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-C3 EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-F EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-N PEGFP-N-5′ PEGFP-N-3′pEGFP-N1 CMV-Profor EGFP-NrevpEGFP-N2 CMV-Profor EGFP-NrevpEGFP-N3 CMV-Profor EGFP-NrevpENTR M13F M13R pET-11(-a,-b,-c,-d) T7 T7-TerminatorpET-12(-a,-b,-c) T7 T7-Terminator pET-14b T7 T7-Terminator pET-15b T7 T7-TerminatorpET-16b T7 T7-TerminatorpET-17b T7 T7-TerminatorpET-17xb T7 T7-TerminatorpET-19b T7 T7-TerminatorpET-20b(+) T7 T7-TerminatorpET-21(-a,-b,-c,-d)(+) T7 T7-Terminator pET-22b(+) T7 T7-TerminatorpET-23(-a,-b,-c,-d)(+) T7 T7-TerminatorpET-24(-a,-b,-c,-d)(+) T7 T7-Terminator pET-25b(+) T7 T7-TerminatorpET-26b(+) T7 T7-TerminatorpET-27b(+) T7 T7-Terminator pET-28a(-b,-c)(+) T7 T7-TerminatorpET-29a(-b,-c)(+) S.tag/T7 T7-TerminatorpET-3(-a,-b,-c,-d) T7 T7-Terminator pET-30_Ek/LIC T7 T7-Terminator pET-30_Xa/LIC T7 T7-T erminator pET-30a(-b,-c)(+) S.tag/T7 T7-Terminator pET-31b(+) not available T7-T erminator pET-32_Ek/LIC TRXfor T7-T erminator pET-32_XA/LIC TRXfor T7-Terminator pET-32a(-b,-c)(+) S.tag/TRXfor T7-Terminator pET-33b(+) T7 T7-Terminator pET-34b(+) S.tag T7-Terminator pET-35b(+) S.tag T7-T erminator pET-36b(+) S.tag T7-Terminator pET-37b(+) S.tag T7-Terminator pET-38b(+) not available T7-Terminator pET-39b(+) S.tag T7-T erminator pET-40b(+) S.tag T7-Terminator pET-41_Ek/LIC GST-Cfor T7-Terminator pET-41a(-b,-c)(+) S.tag/pGEX-5 T7-Terminator pET-42a(-b,-c)(+) S.tag/pGEX-5 T7-Terminator pET-43.1a(-b,-c)(+) S.tag coliDOWN pET-43.1a_EK/LIC S.tag not available pET-44a(-b,-c)(+) S.tag T7-Terminator pET-44a_EK/LIC S.tag not available pET-45b(+) T7 T7-Terminator pET-46_Ek/LIC T7 T7-Terminator pET-5(-a,-b,-c) T7 T7-Terminator pET-52b(+) T7 T7-Terminator pET-7 T7 T7-Terminator pET-9(-a,-b,-c,-d) T7 T7-T erminator pET coco-1 T7 T7-Terminator pETDuet-1(MCSI) pETUP1 DuetDOWN1 pETDuet-1(MCSII) DuetUp2 T7-Terminator pET-T4 T7 T7-Terminator pEYFP-C1 pEGFP-C-5’ pEGFP-C-3' pEYFP-N1 pEGFP-N-5’,CMV-Profor pEGFP-N-3’ pFLAG-ATS N26for pTrcHis-rv；C24rev pFLAG-CTC N26for pTrcHis-rv；C24rev pFLAG1 N26for pTrcHis-rv；C24rev pFLAG-CMV(-2) CMV-30；CMV-Profor CMV-24 pFLAG-CMV1 CMV-30 CMV-24pGAD424 GAL4_ADfor 3'ADpGADGH GAL4_ADfor 3'ADpGADT7 T7/GAL4_ADfor 3'AD pGADT7-Rec T7/GAL4_ADfor 3'AD pGADT-T T7 3,BD pGAD10 GAL4_ADfor 3'AD pGAPZa-A a-FACTOR 3'AOX pGBKT7 T7 3,BDpGBT9 MATCHMAKER5'DNA-BD/GAL4BD MATCHMAKER3'DNA-BDpGEM-1 T7 SP6pGEM-3 T7 SP6 pGEM-3Zf(+)(-) SP6/M13rev T7/M13for pGEM-4 T7 SP6pGEM-4Z T7/M13for SP6/M13rev pGEM-5Zf(+)(-) SP6/M13rev T7/M13for pGEM-7Zf(+)(-) SP6/M13rev T7/M13for pGEM-9Zf(+)(-) T7/M13for SP6/M13rev pGEM-T T7/M13for SP6/M13rev pGEM-T_Easy T7/M13for SP6/M13rev pGene/V5-His_A(_B,_C) pGENE-5 BGH rev,V5rev pGEX-2T pGEX-5 pGEX-3 pGEX-2TK pGEX-5 pGEX-3pGEX-3X pGEX-5 pGEX-3 pGEX-4T-1(-2,-3) pGEX-5 pGEX-3 pGEX-5X-1(-2,-3) pGEX-5 pGEX-3 pGEX-6P-1(-2,-3) pGEX-5 pGEX-3 pGL2 GLP1 GLP2pGL3 RVP3 GLP2(RVP4)(没有特别说明用GLP2)pGL3-Basic(MCSI) RVP3(PGL3+)? GLP2(PGL3-)?pGL3-Basic(MCSII) RVP4, PLXSN-3'?pGL4pGlow(-TOPO) T7 pGlow-3 pGM-T T7 SP6pGWC SP6 T7pHook-2 T7/CMV-Profor not availablepIND/V5-His_A(_B,_C) not available BGH rev,V5rev PinpointTMVector PinpointPrimer SP6pIRES(MCSI) T7 pIRES-3pIRES(MCSII) not available T3,EBVrevpIRES2-EGFP CMV-Profor,pIRES2-EGFP.P5’ IRESrev,pIRES2-EGFP.P3’ pIRES-hrGFP-2a CMV-Profor,T3 pIRES-hrGFP-3 pIRESneo2 T7/CMV-Profor pIRES-3pIVEX(all) T7/pBRrevBam T7-T erminatorpLEXA pLEXA-F pLEXA-RpLNCX pLNCX-F pLNCX-RpLNCX2 CMV-Profor pRevTRE-3 pLVTHM（H1启动子下游）H1primer SP6 pLXSN pLXSN-F pLXSN-RpMALc MalE primer M13F(-47)pMAL-c2E MalE primer M13F(-47)pMAL-C2x Pmal-c2x-F(P5’) Pmal-C2X-R(P3’ )pMALd MalE primer M13F(-47)pMALe MalE primer M13F(-47)pMAL-P4X MalE primer M13F(-47)pMAL-p2X MalE primer M13F(-47)pMET A/B/C AUG1F AUG1RpMD18-T M13R(-48)ECORI M13F(-47)(HINDⅢ)pMD19-T M13F47 M13R48pMD20-T M13F47 M13R48pMOSBlue T7/M13rev M13forpMSCV-puro pLXSNfw pMSCVrev pMT/V5-His_A(_B,_C) Mtfor BGH rev,V5rev pNTAP T3 T7pCTAP pCTAP5'primer T7pOTB7 M13rev/T7 M13for/SP6 pOptiVEC-TOPO TA CMV-F/CMV-Profor EMCVIRES reverse pPC86 PPC86-F PPC86-R pPC97 PBD-GAL4-F PBD-GAL4-RpPIC3.5K 5'AOX 3'AOXpPic9k(A+,Z+) 5’AOX(Ppic9k-f)/a-factor 3’AOX(Ppi c9k-R) pPICZa 5'AOX/PPICZa-F 3'AOX pPROEXHTA M13R(-48) 无反向引物pProEX-HTa(b,c) M13R48/ Tac-Profor pBADrv/pTrcHis-3 pPD129.36 M13F20/M13F pQE30or40or60(AMP+) PQE30-F PQE-30R pRC/CMV2/CAT CMV/T7pRECEIVER CMV-F 此载体无反向引物pRECEIVER-M03 pRECEIVER-M03F pRECEIVER-M03R pREP4 pREP4 forward primer EBV reverse primerpRK5 SP6 pSG5-3pRSET T7/Xpressfor T7ter pRSFDuet-1(MCSI) DuetUP1 DuetDOWN1 pRSFDuet-1(MCSII) DuetUP2 T7TER pSecTac2 T7/CMV-Profor BGH rev/c-mycrevpSG5 pSG5-5,/T7 PSG5-R(SV40)pSHlox1 T7 SP6 pSHUTTLE-CMV PSHUTTLE-CMV-F PSHUTTLE-CMV-R pSI T7 EBVrev pSilencer1.0-U6 T7 T3 pSilencer2.0-U6 T7 M13for pSilencer2.1-U6neo T7 M13for pSilencer3.1-H1hygro M13F(-47) 3.0REV pSilencer4_1-CMVneo pSilener4.1-5' CMV-Profor pSILENCEV2.0-U6 T7 2.0REV pSIneo T7 EBVrev,T3Psit T7 T7T pSK01-T M13F M13RpSK-CMV(KAN+) T7 T3 pSOS Psos5' Psos3'pSP64 SP6 M13revpSP64/65 SP6 此载体无反向引物pSP65 SP6 M13revpSP70 SP6 T7pSP71 SP6 T7pSP72 SP6 T7pSP73 SP6 T7pSport1 SP6/M13F(-47) T7/M13RpSPORT1 SP6/M13for T7/M13revpSPT18 SP6 T7pSTBlue T7/M13rev SP6/M13for pSUPER.Basic T7/M13F M13R pSUPER T7 T3pSURE-T M13F M13R pSURE-Tsimple M13F-47 M13R-48 pSuperCos pBRforEco T7pT3T7 M13rev/T3 M13for/T7pT7-7 T7 not availablepT7Blue? T7 M13F(-47)pT7T3_18U M13rev/T7 M13for/T3 pT7T3D-PAC M13rev/T7 M13for/T3 pTA2 M13F/T7(优先使用M13F）T3/M13R pT-Adv M13rev T7,M13forpTAg T7/M13rev M13for pTARGETTM pTarget.F(在T7前面）/T7 pTarget.R pTG19-T M13F(-47) M13R(-48) pTARGETTM T7/M13F PTARGET-SEQ pThioHisA,B,andC Trx Forward Trx Reverse / M13forpTO-T7 T7 T7TERpTRC99A PTRC99A-F pTrcHis-rvpTrc99a-c PTRC99C-F PTRC99C-RpTRC99a-c PTRC99C-F PTRC99C-RpTrcHisB PTrcHisA-F/Xpressfor PTrcHisA-RpTrcHisA PTrcHisA-F PTrcHisA-RpT-REX-DEST30 TREfor T7 pTriEx1 T7/TriExup TriExdownpTriEx1.1 T7/TriExup TriExdownpTriEx1.1_Hygro T7/TriExup not availablepTriEx1.1_Neo T7/TriExup IRESrevpTriplEX1 TriplEx-LD-5 T7,TriplEx-LD-3pTriplEX2 TriplEx-LD-5；pTR5‘ T7,TriplEx-LD-3pTWIN-1 T7 T7TERpTXB1 T7 MxeInteinrevpTXB2 T7 MxeInteinrevpTXB3 T7 MxeInteinrevpTYB1 T7 InteinrevpTYB2 T7 InteinrevpTYB3 T7 InteinrevpTYB4 T7 InteinrevpTZ_18U T7/M13rev M13forpUB6/V5-His UB-F BGH rev,V5rev pUC13 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC18 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49) pUC18(19)/118(119) M13F(-47) M13R(-48)/PUC19(HINDⅢ) pUC19 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC57 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC8 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC9 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUM-T M13F(-20) M13R(-20)pUCm-T(AMP+) M13F/T7 M13RpUNI/V5-His not available BGH rev,V5revpVAX1T7 T7/CMV-Profor PCDNA3.1R/BGHR pVP22/mycHis VP22-Cfor BGH rev,c-mycrev pVP22/mycHis2 T7/CMV-Profor VP22-Nrev pWE15 pBRrevHind T7pYES2 T7 pYes2.R pYES-DEST52 T7/GAL1-Profor V5rev/CYC1-Terminator pYEX_4T_1 Clontech pYEX_4T-3 pYEX_4T_2 pGEX-5 pYEX_4T-4pYEX_4T_3 pGEX-5 pYEX_4T-4pYEX_4T_4 pGEX-5 pYEX_4T-4 pZeoSV2+/hu-Tyr T7 not available pZERO-1 M13rev/SP6 T7/M13forpZERO-2 M13rev/SP6 M13for/T7pZome-1-C Zome-F Zome-RpZome-1-N Zome-F Zome-R YCp50(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam YEp13(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam YEp24(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam YIp5(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-U6Zs Green U6菌PCDB T7 BGH 天为时代TA载体T7 T3 m13（+）T7？T3？pMSCV-neo pMSCV-5' pMSCV-3'。
联合应用以MRP和bcl-2为靶标的siRNA对鼻咽癌细胞耐药和凋亡的调节
靶基 因的 ｍＲ Ａ及蛋 白的表达 明显减低 ， Ｎ 细胞 的凋亡 率升 高，ｃ Ｉ 均较单 纯化疗组低 ， 有统计 学意义（ ０ ０ ） Ｐ＜ ． ５ ， 两者 间也有统计学差异（ ０ ０ ） 联合 转染两种 ｓ Ｎ Ｐ＜ ． ５ ； ｉ Ａ后细胞的 Ｉ 进 一步显著下降， Ｒ ｃ。 细胞凋 亡率显著升 高， 与 各组相 比均有统计学差异（ ０ ０ ） Ｐ＜ ． １ 。结论 联合以 ＭＲ Ｐ和 ｂｌ ２基 因为靶 标的 ｓ Ｎ 通过 降低靶 基 因蛋 白 ｃ一 ｉ Ａ， Ｒ 表达 ， 产生协同作 用， 明显增加耐 药和 亲本肿瘤细胞 药物敏感性和凋亡率。
２ １ 联 合 应 用 ＭＲ ． Ｐ为靶 标 的 ｓＲ Ａ对 耐 药肿 瘤 细 胞 ｉＮ
生长的影响 Ｍ Ｔ 结 果 显示 ， Ｎ ２和 Ｃ Ｅ ／ Ｄ １ ｒ ＣＥ Ｎ ２ Ｄ Ｐ细 胞分 别转染 以 Ｍ Ｐ和 ｂｌ ２为靶 标 的 ｓ Ｎ Ｒ ｃ一 ｉ Ａ后 ， Ｒ 细 胞的 Ｉ ｃ。 分别 为 １３ ｇ ｍ ，．４ｉ ｏ Ｌ和 ２ ８ ｇ ． ３ ／ ｌ１７ ｍ ｌ ｘ ／ ．２ ／
胡海 燕 张梅 霞
南 方 医 科 大 学珠 江 医 院血 液 科 （ 州 ５ ０ ８ ） 广 １２ ２
【 要】 目的 研 究联合转 染以 Ｍ Ｐ ｂｌ ２为靶 标的 ｓ Ｎ 摘 Ｒ 和 ｃ一 ｉ Ａ后 ， Ｒ 鼻咽癌细胞株 Ｃ Ｅ 和耐药细胞 Ｃ Ｅ／ Ｎ２ Ｎ ２
Ｄ Ｐ的 药物 敏 感 性 和 凋 亡 率 的 改 变 。方 法 Ｄ 以 ＭＲ Ｐ和 ｂｌ ２为 靶 标 的 ｓ Ｎ 均 为 １０ Ｉ ｏ Ｌ 分 别 或 联 合 转 ｃ一 ｉ Ａ（ Ｒ ０ ｍ ｌ ） ， ／ Ｌ
白念珠菌对氟康唑耐药机制的研究
㊃论著㊃白念珠菌对氟康唑耐药机制的研究封小川1,2 元航1 郑莹莹1,3 白江苗1 张欠欠1(1.延安大学医学院,延安716000;2.延安市人民医院,延安716000;3.延安大学附属医院,延安716000)ʌ摘要ɔ 目的 通过研究白念珠菌对氟康唑耐药相关基因E R G 11㊁C D R 1㊁C D R 2和MD R 1的表达水平及其与耐药的关系,旨在对本地区以白念珠菌感染为主的侵袭性念珠菌病的防治提供依据㊂方法 选取延安地区两家三甲医院临床确诊的对氟康唑耐药及敏感的白念珠菌各10株,扩增其靶酶编码基因E R G 11,分析突变位点;使用荧光染料罗丹明6G 分析耐药组与敏感组菌株的外排情况;采用荧光定量P C R 检测白念珠菌外排泵编码基因的表达水平㊂结果 E R G 11扩增测序结果显示,耐药菌株C 3号虽发生了碱基位点突变,但并未引起编码氨基酸的改变,耐药菌株C 7号及敏感菌株C 12号发生了碱基位点的突变,引起编码氨基酸的改变;荧光染料罗丹明6G 检测白念珠菌外排实验结果显示,耐药菌和敏感菌无论加入葡萄糖与否外排均存在显著差异,且耐药组加入葡萄糖较未加入葡萄糖外排量明显增加,差异有统计学意义(P <0.01);R T -P C R 检测外排泵基因结果显示,C D R 1与C D R 2外排泵基因表达水平在耐药菌与敏感菌之间差异有统计学意义(P <0.05)㊂结论 研究基因表达及外排泵功能检测结果均表明,本地区白念珠菌对氟康唑的耐药机制主要与外排泵基因过度表达相关,未发现靶酶编码基因有意义的突变㊂ʌ关键词ɔ 氟康唑;耐药机制;E R G 11;C D R 1;C D R 2ʌ中图分类号ɔ R 379.4 ʌ文献标志码ɔ A ʌ文章编号ɔ 1673-3827(2023)18-0481-06S t u d y on t h e m e c h a n i s m o f f l u c o n a z o l e r e s i s t a n c e i n C a n d i d a a l b i c a n s F E N G X i a o c h u a n 1,2,Y U A N H a n g 1,Z H E N G Y i n g y i n g 1,3,B A I J i a n g m i a o 1,Z HA N G Q i a n qi a n 1(1.M e d i c a l C o l l e g e o f Y a n a n U n i v e r s i t y ,Y a n a n 716000,C h i n a ;2.Y a n a n P e o p l e s H o s p i t a l ,Y a n a n 716000,C h i n a ;3.Y a n a n U n i v e r s i t y A f f i l i a t e d H o s pi t a l ,Y a n a n 716000,C h i n a )ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T o s t u d y t h e e x p r e s s i o n l e v e l s of f l u c o n a z o l e r e s i s t a n tg e n e s E R G 11,C D R 1,C D R 2,a n d MD R 1i n C a n d i d a a l b i c a n s a n d th ei r r e l a t i o n s h i p w i t h d r u g re s i s t a n c e ,a n d t o p r o v i d e a b a s i sf o r t h e p r e v e n t i o n a n d t r e a t m e n t o f i n v a -s i v e c a n d i d i a s i s m a i n l y c a u s e d b y C a n d i d a a l b i c a n s i n f e c t i o n i n t h i s r e gi o n .M e t h o d s T e n f l u c o n a z o l e r e s i s t a n t s t r a i n s a n d 10f l u c o n a z o l e s e n s i t i v e s t r a i n s w e r e s e l e c t e d f r o m e a c h h o s p i t a l i n t w o t e r t i a r y a n d f i r s t -c l a s s h o s p i t a l s i n Y a n 'a n a r e a .A m -p l i f y i n g t h e t a r g e t e n z y m e c o d i n g g e n e E R G 11,a n a l y z i n g t h e m u t a t i o n s i t e s ,f l u o r e s c e n t d y e u s i n g rh o d a m i n e 6G w e r e u s e d t o a n a l y z e t h e e f f l u x o f s t r a i n s f r o m d r u g r e s i s t a n t a n d s e n s i t i v e g r o u p s .T h e n ,f l u o r e s c e n c e qu a n t i t a t i v e P C R w a s u s e d t o d e -t e c t t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f t h e g e n e e n c o d i n g t h e e f f l u x p u m p o f C a n d i d a a l b i c a n s .R e s u l t s E R G 11a m p l i f i c a t i o n a n d s e -q u e n c i n g r e s u l t s s h o w e d t h a t a l t h o u g h t h e r e s i s t a n t s t r a i n C 3h a d a b a s e s i t e m u t a t i o n ,i t d i d n o t c a u s e c h a n g e s i n t h e c o d i n ga m i n o a c i d .T h e r e s i s t a n t s t r a i n C 7a n d t h e s e n s i t i v e s t r a i n C 12h a d ab a s e s i t e m u t a t i o n ,c a u s i n g c h a n g e s i n t h e c od i n g am i -n o a c i d ;f l u o r e s c e n t d ye r h o d a m i n e 6G w a s u s e d t o d e t e c t t h e ef f l u x o f C a n d i d a a l b i c a n s .T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e e f f l u x o f r e s i s t a n t i s o l a t e a n d s e n s i t i v e i s o l a t e w e r e s ig n i f i c a n t l y d i f f e r e n t wh e t h e r g l u c o s e w a s a d d e d o r n o t ,a n d t h e e f f l u x o f d r u gr e s i s t a n t i s o l a t e w i t h g l u c o s e w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t w i t h o u t g l u c o s e ,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i gn i f i -c a n t (P <0.05);t h e R T -P C R d e t e c t i o n o f e f f l u x p u m p g e n e s s h o w e d a s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f C D R 1a n d C D R 2e f f l u x p u m p g e n e s b e t w e e n d r u g-r e s i s t a n t a n d s e n s i t i v e i s o l a t e (P <0.05).C o n c l u s i o n T h e r e -s u l t s o f g e n e e x p r e s s i o n a n d e f f l u x p u m p f u n c t i o n t e s t i n g i n t h i s s t u d yi n d i c a t e t h a t t h e r e s i s t a n c e m e c h a n i s m o f C a n d i d a a l -b i c a n s t o f l u c o n a z o l e i n t h i s r e g i o n w a s m a i n l y r e l a t e d t o o v e r e x p r e s s i o n o f e f f l u x p u m p g e n e s ,a n d n o s i g n i f i c a n t m u t a t i o n s w e r e f o u n d i n t h e t a r g e t e n z y m e c o d i n g ge n e s .基金项目:陕西省重点研发计划项目(2021S F -230);榆林市科技项目(C X Y -2020-064);延安大学校产学研项目(C X Y 202121)作者简介:封小川,女(汉族),硕士,主治医师.E -m a i l :x i a o c h u a n 880112@163.c o m 通信作者:张欠欠,E -m a i l :z h a n g q i a n yd @163.c o m ㊃184㊃ 中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M yc o l ,D e c e m b e r 2023,V o l 18,N o .6ʌK e y w o r d sɔf l u c o n a z o l e;d r u g r e s i s t a n c e m e c h a n i s m s;E R G11;C D R1;C D R2[C h i n J M y c o l,2023,18(6):481-486]近年来,世界范围内以白念珠菌感染为主的侵袭性念珠菌病呈上升趋势,全球S E N T R Y抗真菌监测显示,在欧洲,白念珠菌引起的感染占念珠菌属的52.5%㊁亚太地区为46.0%㊁拉丁美洲为43.9%㊁美国和加拿大为42.7%[1],我国流行病学调查显示[2-3],白念珠菌引起的感染占念珠菌属的65%,个别地区甚至大于70%,在免疫功能低下者和植入医疗设备的健康人中白念珠菌的感染率居首位,感染病死率高达68.9%[4],美国每年也会因置入导管引发的白念珠菌感染造成约10万人死亡[5]㊂美国感染病学会(I D S A)指出氟康唑是既往非粒细胞缺乏念珠菌血症患者初始治疗及I C U中高危患者侵袭性念珠菌感染预防的首选药物[6],在发展中国家,三唑类药物(如氟康唑等)是治疗侵袭性念珠菌感染尤其是白念珠菌感染的主要药物[7]㊂但随着氟康唑在临床上的长期广泛应用,致使白念珠菌对氟康唑的耐药性不断增强,据美国疾控中心(C D C)统计,在感染念珠菌患者的血液样本中,约有7%对氟康唑耐药[8]㊂全球S E N T R Y监测显示[9],白念珠菌对氟康唑的耐药率为11.9%,我国白念珠菌对氟康唑的耐药率小于6%,剂量依赖性敏感(S D D)率为4.35%[10],这势必给临床治疗白念珠菌引发的疾病过程中带来严峻考验㊂文献报道显示[11-13],白念珠菌对氟康唑耐药机制主要是靶酶编码基因E R G11的突变和外排泵编码基因过表达,但由于不同地区白念珠菌的感染及其耐药不同,其耐药机制亦不尽相同,因此,本文通过研究白念珠菌对氟康唑耐药相关基因E R G11㊁C D R1㊁C D R2和MD R1的表达水平及其与耐药的关系,探究延安地区白念珠菌对氟康唑的耐药机制,对管理目前有限的抗真菌药物,以及为患者提供精准治疗服务至关重要㊂1材料和方法1.1材料菌株收集延安市两家三甲医院送检并经鉴定为白念珠菌且对氟康唑耐药和敏感的菌株各10株,耐药菌株编号C1-C10,敏感菌株编号C11-C20㊂标准质控菌株:白念珠菌A T C C90028㊂纳入标准:①经质谱鉴定为白念珠菌;②根据美国临床实验室标准化研究所(C L S I)判断标准[14],敏感(S):M I Cɤ8μg/m L,耐药(R):M I Cȡ64μg/m L,药敏结果复核为白念珠菌对氟康唑耐药及敏感菌株;③所有操作均符合实验室操作标准㊂主要试剂和仪器 Y e a s t O n e p l a t e真菌药敏板试剂盒(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)(批号:280543)㊁T a q D N A聚合酶(北京百奥莱博科技有限公司)(批号:J N0015)㊁逆转录试剂盒(广州赛国生物科技有限公司)(批号:70060000)㊁罗丹明6G(西亚化学试剂商店)(批号:20211115)㊁V I T E K M S全自动快速质谱微生物检测系统(法国梅里埃公司)㊁A B I7300型全自动荧光定量P C R 仪(美国A B I公司)㊁C y t o m i c s500流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司)㊁N a n o d r o p O n e超微量分光光度计(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)㊁T a n o n3500型凝胶成像分析系统(上海天能有限公司)㊂1.2方法E R G11基因扩增并测序白念珠菌D N A的提取:菌株培养㊁离心后,提取出白念珠菌D N A,与5μL样品混合均匀后进行电泳约55m i n,应用电脑成像系统进行凝胶相片拍摄㊂以G e n B a n k公布的白念珠菌标准菌株E R G11基因序列数据为准, P C R引物设计:E R G11F:5 -A T G G C T A T T-G T T G A A A C T G T C A T T G-3 (第1~25位)㊁E R G11 R:5 -T T A A A A C A T A C A A G T T T C T C T T T T T-T C C-3 (第1560-1587位)㊂罗丹明6G在试验菌株中外排情况的测定①实验菌株经离心㊁预冷,重悬于P B S使葡萄糖耗尽,加入罗丹明6G后将试管放于冰面上,然后在菌液中加入P B S混合均匀㊁离心,用流式细胞仪进行分析记录,此时菌株的荧光强度设为外排前的起始荧光强度;②洗3次预冷P B S,将多余的罗丹明6G去除后分为两管,一管50μL菌液加入1m L P B S,另一管50μL菌液加入1m L P B S,离心加入P B S混合均匀,运用流式细胞仪分析,将未用罗丹明6G处理的菌株细胞的荧光强度作为自身荧光对照;③将摄取罗丹明6G之后的细胞荧光强度作为基底,分别减去加与不加葡萄糖外排之后的细胞㊃284㊃中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r2023,V o l18,N o.6荧光强度,进行数据分析㊂白念珠菌外排泵基因表达的检测 白念珠菌外排泵基因引物序列见表1㊂表1 白念珠菌外排泵基因引物T a b .1 G e n e p r i m e r s o f C a n d i d a a l b i c a n s e f f l u x p u m p 序列名称片段片段大小18S r R N AF :5'-T CG G G G G T A T C A G T A -T T C A G T T G T C -3'83b pR :5'-T C C T T G G T A A A T G C T T T -C G C A G T A G -3'C D R 1F :5'-TG A C T C C T G C T A C C G T G T -T G -3'194b pR :5'-A C C T G G A C C A C T T G G A A -C A T -3'C D R 2F :5'-C C TG G A A G C A C A G T T G T C -C A -3'161b pR :5'-T C C C C C T T T T G C A T A G C A -C C -3'MD R 1F :5'-G G G T G C T G T T T G T G G T C C -T A -3'196b pR :5'-A C C G G T G A T G G C T C T C A A -T C -3'A C T 1F :5'-TG G A C G G T G A A G A A G T T G -C T -3'184b pR :5'-T T G G A T T G G G C T T C A T C A -C C A -3'P MA 1F :5'-A C CG T T G C C G A A T T T G C T T -C -3'194b pR :5'-G C A A T A C C A A C G G C A T C A -C C -3'白念珠菌总R N A 的提取 采用T r i z o l 法提取白念珠菌总R N A ,R T -P C R 扩增外排泵基因严格按照试剂盒说明书进行操作㊂P C R 反应条件:94ħ预变性3m i n ,94ħ变性10s ,55ħ退火20s ,72ħ延伸30s ,40个循环㊂收集荧光阈值(c yc l e t h r e s h o ld ,C t ),将核糖体基因18S r R N A 设定为内参基因,用相对定量әC t 表示(әC t =C t 目的基因-C t 18S )并进行分析,其中әC t 值越小,相对基因表达量越高,反之则越低,见图1及图2㊂1.3 统计学分析采用S P S S 25.0统计软件分析,计量资料均用 x ʃs 表示,采用t 检验,检验水准α=0.05,P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 E R G 11基因的检测结果实验菌株E R G 11基因P C R扩增的产物经纯图1 实验菌株R T -P C R 溶解曲线 图2 实验菌株R T -P C R 扩增曲线F i g.1 R T -P C R d i s s o l u t i o n c u r v e o f e x p e r i m e n t a l s t r a i n F i g.2 R T -P C R a m p l i f i c a t i o n c u r v e o f e x p e r i m e n t a l s t r a i n s 化并测序,测序结果与G e n B a n k 中的标准序列X 13296进行比对分析,发现氟康唑耐药的C 3号菌株第414位碱基发生了突变GңA ,但并未引起第118位氨基酸甘氨酸(G l y )密码子的改变;氟康唑耐药的C 7号菌株及对氟康唑敏感的C 12号菌株的第518位碱基发生了突变CңG ,引起第173位氨基酸密码子改变,致脯氨酸(P r o )变为精氨酸(A r g),见图3~6及表2㊂表2 白念珠菌E R G 11基因突变及对应氨基酸改变T a b .2 M u t a t i o n o f E R G 11g e n e a n d c o r r e s p o n d i n g am i n o a c i d c h a n ge s i n C a n d i d a a l b i c a n s 菌株编号碱基突变位点氨基酸变化C 3G 414A G 118G C 7C 518G P 173R C 12C 518GP 173R注:C 12为敏感菌株,C 3和C 7为耐药菌株㊂2.2 罗丹明6G 的外排情况结果显示,敏感株在摄取罗丹明6G 后,未加葡萄糖几乎不发生外排,加葡萄糖后略有外排,但二者比较差异无统计学意义(P >0.05);耐药株在摄取罗丹明6G 后,无论加葡萄糖与否均发生外㊃384㊃ 中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M yc o l ,D e c e m b e r 2023,V o l 18,N o .6图3白念珠菌E R G11基因扩增D N A凝胶电泳图图4耐药组白念珠菌C3碱基峰值图图5耐药组白念珠菌C7碱基峰值图图6敏感组白念珠菌C12碱基峰值图F i g.3 A m p l i f i e d D N A g e l e l e c t r o p h o r e s i s o f C a n d i d a a l b i c a n s E R G11g e n e F i g.4 C3b a s e p e a k o f C a n d i d a a l b i c a n s i n d r u g r e s i s t a n c e g r o u p F i g.5 C7b a s e p e a k o f C a n d i d a a l b i c a n s i n d r u g r e s i s t a n c e g r o u p F i g.6 C12b a s e p e a k o f C a n d i d a a l b i c a n s i n s e n s i t i v e g r o u p排,加葡萄糖较未加葡萄糖的外排量增加,二者比较差异具有统计学意义(P<0.01);将耐药组株对罗丹明6G的外排与敏感组菌株对罗丹明6G的外排量进行分析,耐药组罗丹明6G的外排量明显高于敏感组,差异具有统计学意义(P<0.01),见表3和图7㊂表3白念珠菌耐药组与敏感组罗丹明6G外排实验结果比较T a b.3 C o m p a r i s o n o f r h o d a m i n e6G e f f l u x t e s t r e s u l t s b e t w e e nd r u g-re s i s t a n t g r o u p a n d s e n s i t i v e g r o u p of C a n d i d a a l b i c a n s分组耐药组(n=10)敏感组(n=10)t P未加葡萄糖外排能力5.47ʃ0.530.45ʃ0.2327.621<0.01加入葡萄糖后外排能力7.77ʃ0.80.44ʃ0.2527.526<0.01 t-11.6020.44P<0.01>0.052.3 R T-P C R测定外排泵基因表达水平统计学分析显示,耐药组和敏感组肌动蛋白相关基因A C T1和质膜H+-A T P酶编码基因P MA1的表达水平相比较,差异无统计学意义(P >0.05);耐药组C D R1和C D R2外排泵基因表达量较敏感组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01),图7敏感和耐药白念珠菌罗丹明6G外排实验结果F i g.7 R e s u l t s o f r h o d a m i n e6G e f f l u x t e s t o f s e n s i t i v e a n d d r u g-r e s i s t a n t C a n d i d a a l b i c a n s见表4和图8㊂表4白念珠菌主动外排泵基因在敏感组与耐药组相对表达水平的比较(әC t值)T a b.4 C o m p a r i s o n o f r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f a c t i v e e f f l u x p u m p g e n e o f C a n d i d a a l b i c a n s b e t w e e n s e n s i t i v e g r o u p a n d d r u g r e s i s t a n t g r o u p外排基因耐药组(n=10)敏感组(n=10)t PC D R16.42ʃ0.905.00ʃ0.863.589<0.01 C D R27.75ʃ1.116.30ʃ1.033.040<0.01 MD R19.74ʃ0.719.05ʃ1.141.616>0.05 A C T18.15ʃ0.318.16ʃ0.42-0.030>0.05 P MA18.04ʃ0.118.07ʃ0.14-0.612>0.05㊃484㊃中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r2023,V o l18,N o.6图8敏感和耐药白念珠菌外排泵基因的表达量F i g.8 E x p r e s s i o n o f e f f l u x p u m p g e n e i n s e n s i t i v e a n d d r u g-r e s i s t-a n t C a n d i d a a l b i c a n s3讨论全世界每年由念珠菌引起的深部器官感染病例40万以上,病死率超过45%[15],尤其白念珠菌的发病率㊁致死率明显上升㊂唑类药物中的氟康唑是临床早期经验治疗白念珠菌感染尤其作为高危人群预防白念珠菌感染的首选药物,使其在人体内长期处于亚治疗水平,引起耐药性增加[16],白念珠菌耐药是目前临床治疗其感染失败的一个重要原因,研究报道,E R G11基因错义突变可使氟康唑抗真菌的作用靶点去甲基化酶C Y P51的血红素表面结合位点发生变化,从而使氟康唑无法与白念珠菌有效结合而致耐药[17],而且白念珠菌细胞膜上的外排泵活力增强也是白念珠菌对氟康唑耐药的主要机制之一[18]㊂本研究中靶酶编码基因E R G11的目的基因扩增测序中虽然引起氨基酸的改变,即耐氟康唑的C7号菌株及对氟康唑敏感的C12号菌株的第518位碱基发生了突变,引起第173位氨基酸密码子改变,致P r o变为A r g,但耐药及敏感菌株中均存在,虽为错义突变,但该突变没有发生在E R G11点突变的105-165㊁266-287㊁405-488氨基酸之间的3个 热点 区域[19],也不是既往文献报道的Y123F㊁K143R㊁F449V和G464S等多个与白念珠菌对氟康唑耐药有关的突变位点[20],推测这个位点的突变在白念珠菌对氟康唑耐药机制中为无意义突变,但此也不能表明该机制在本地区白念珠菌耐药性的产生中无作用,可能与样本量较少有关,尚需扩大样本量进行进一步研究㊂罗丹明6G作为白念珠菌细胞膜上活性流出系统的底物,具有无毒㊁易检测㊁易吸收入射光的能量等优点,准确测量白念珠菌中罗丹明6G的积累浓度值有利于选择抗性菌株中C D R1㊁C D R2㊁MD R1等基因的过度表达㊂研究结果显示,加入荧光染料罗丹明6G后,耐药组罗丹明6G的外排量明显高于敏感组,说明白念珠菌对氟康唑耐药为主动外排系统所致㊂为排除实验环境(如菌株的生长环境和R N A的抽提等)对外排泵基因的检测结果的影响,耐药组和敏感组加入肌动蛋白相关基因A C T1和质膜H+-A T P酶编码基因P MA1,比较其表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),说明实验环境对外排泵基因的检测结果没有影响㊂耐药组C D R1和C D R2外排泵基因表达量较敏感组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01),由此可知影响本地区白念珠菌对氟康唑耐药机制中最为重要的是其药物外排泵基因C D R1㊁C D R2过度表达,并且耐药组耐药基因C D R1㊁C D R2相对表达量均显著高于敏感株组,与文献报道结果相似[21-22]㊂分析原因主要是,C D R1的表达受顺式作用调控元件的控制,包括一个B E E(基础表达元件)㊁一个D R E(药物敏感元件)㊁两个S R E(甾醇调控元件)和一个N R E(负调控元件),而C D R2的表达仅受D R E的控制,在这些不同的元件中,只有D R E参与必需的C D R1和C D R2的高表达和对氟康唑外排的上调相反,MD R1基因不具有D R E元件,并且MD R1启动子也不直接与氟康唑反应[21]㊂综上所述,本地区白念珠菌的耐药机制主要与外排泵基因过度表达相关,未发现靶酶编码基因有意义的突变,由于白念珠菌对氟康唑耐药现象的产生并非由于单一机制的调控,且临床很多患者存在滥用抗真菌药物的现象,导致白念珠菌对氟康唑的耐药性不断提高,而新型抗真菌药开发缓慢,改善白念珠菌对氟康唑的耐药问题迫在眉睫,因此,我们急需进一步探索白念珠菌致病机制和耐药机制,寻找新的药物治疗靶点,探索新的治疗体系,提高患者的生存率㊂参考文献[1]P F A L L E R M A,D I E K E MA D J,T U R N I D G E J D,e t a l.T w e n t y y e a r s o f t h e S E N T R Y a n t i f u n g a l s u r v e i l l a n c e p r o-g r a m:R e s u l t s f o r C a n d i d a s p e c i e s f r o m1997-2016[J].O p e n F o r u m I n f e c t D i s,2019,6(S u p p l1):S79-S94. [2]何小羊,任秋霞,杨英.2008~2017年我国深部真菌病原谱及流行特征国内文献系统分析[J].中国真菌学杂志,2018,13(4):229-234.㊃584㊃中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r2023,V o l18,N o.6[3]田洹.2015~2017年某医院念珠菌感染及其耐药性分析[J].中国真菌学杂志,2019,14(1):37-41.[4]杨丰帅,周厚吾.白念珠菌致病机制及治疗研究进展[J].现代医药卫生,2013,29(22):3411-3414.[5]N O B I L E C J,J O H N S O N A D.C a n d i d a a l b i c a n s b i o f i l m sa n d h u m a n d i s e a s e[J].A n n u R e v M i c r ob i o l,2015,69(1):71-92.[6]P A P P A S P G,K A U F F MA N C A,A N D S D R,e t a l.E x e c u-t i v e s u mm a r y:c l i n i c a l p r a c t i c e g u i d e l i n e f o r t h e m a n a g e-m e n t o f c a n d i d i a s i s:2016u p d a t e b y t h e I n f e c t i o u s D i s e a s e sS o c i e t y o f A m e r i c a[J].C l i n I n f e c t D i s,2016,62(4): 409-417.[7]G E R S T E I N A C,B E R MA N J.C a n d i d a a l b i c a n s g e n e t i cb ac k g r o u nd i n f l ue n c e s m e a n a n d h e t e r o g e n e i t y of d r ug r e-s p o n s e s a n d g e n o m e s t a b i l i t y d u r i n g e v o l u t i o n i n f l u c o n a z o l e[J].M s p h e r e,2020,5(3):e00480-20.[8]A T R I WA L T,A Z E E M K,HU S A I N F M,e t a l.M e c h a n i s t i cu n d e r s t a n d i n g o f C a n d i d a a l b i c a n s b i o f i l m f o r m a t i o n a n da p p r o a c h e s f o r i t s i n h ib i t i o n[J].F r o n t M ic r o b i o l,2021,12:932.D O I:10.3389/f m i c b.2021.638609.[9]B H A T T A C HA I J E E P.E p i d e m i o l o g y a n d a n t i f u n g a l s u s c e p-t i b i l i t y o f C a n d i d a s p e c i e s i n a t e r t i a r y c a r e h o s p i t a l,K o l k-a t a,I n d i a[J].C u r r M e d M y c o l,2016,2(2):20-27.[10] F U L L E R J,D I N G L E T C,B U L L A,e t a l.S p e c i e s d i s t r i b u-t i o n a n d a n t i f u n g a l s u s c e p t i b i l i t y o f i n v a s i v e C a n d i d a i s o-l a t e s f r o m C a n a d i a n h o s p i t a l s:r e s u l t s o f t h e C A NWA R D2011-2016s t u d y[J].J A n t i m i c r o b C h e m o t h e r,2019,74(4): S48-S54.[11] P R A S A D R,N A I R R,B A N E R J E E A.E m e r g i n g m e c h a-n i s m s o f d r u g r e s i s t a n c e i n C a n d i d a a l b i c a n s[J].P r o g M o lS u b c e l l B i o l,2019,58:135-153.D O I:10.1007/978-3-030-13035-0_6.[12]MA U R Y A I K,T H O T A C K,V E RMA S D,e t a l.W i t h-d r a w a l:R a t i o n a l l y de s i g n e d t r a n s m e m b r a n e p e p t i d e m i m i c so f t h e m u l t i d r u g t r a n s p o r t e r p r o t e i n C d r1a c t a s a n t a g o n i s t st o s e l e c t i v e l y b l o c k d r u g e f f l u x a n d c h e m o s e n s i t i z e a z o l e-r e-s i s t a n t c l i n i c a l i s o l a t e s o f C a n d i d a a l b i c a n s[J].J B i o lC h e m,2020,295(10):3393.[13]杨欣,孙欣.白念珠菌的致病和耐药机制研究进展[J].中国现代应用药学,2021,38(8):1021-1024.[14] C l i n i c a l a n d l a b o r a t o r y s t a n d a r d s i n s t i t u t e.P e r f o r m a n c es t a n d a r d s f o r a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g:t w e n t y-f i f t h i n f o r m a t i o n a l s u p p l e m e n t(M100-S25)[S].W a y n e,P A19087U S A,2015.[15]黄广华,朱利平.中国的念珠菌研究[J].菌物学报,2020,39(11):2001-2002.[16]S O B E L J D,S O B E L R.C u r r e n t t r e a t m e n t o p t i o n s f o r v u l-v o v a g i n a l c a n d i d i a s i s c a u s e d b y a z o l e-r e s i s t a n t C a n d i d a s p e-c i e s[J].E x p e r t o p i n i o n o n p h a r m a c o t h e r a p y,2018,19(9):971-977.[17]纪凌云,周爱萍,马俊,等.白念珠菌唑类药物耐药机制研究进展[J].中国感染与化疗杂志,2019,19(2):218-223. [18]杨偲睿,任彪,彭显,等.药物联用逆转白念珠菌唑类耐药机制的研究进展[J].国际口腔医学杂志,2022,49(5): 511-520.[19] B E R K OW E L,L O C K HA R T S R.F l u c o n a z o l e r e s i s t a n c e i nC a n d i d a s p e c i e s:a c u r r e n t p e r s p e c t i v e[J].I n f e c tD r u g R e-s i s t,2017,10:237-245.D O I:10.2147/I D R.S118892. [20]孙峰,张静,张永娟,等.侵袭性白假丝酵母感染E R G3基因突变及表达[J].中华医院感染学杂志,2020,30(14): 2090-2094.[21] MA E N C HA N T R A R A T H C,K HUM D E E P,S AMO S O R N-S U K S,e t a l.I n v e s t i g a t i o n o f f l u c o n a z o l e s u s c e p t i b i l i t y t oC a n d i d a a l b i c a n s b y MA LD I-T O F M S a n d r e a l-t i m e P C Rf o r C D R1,C D R2,MD R1a n d E R G11[J].B M C M i c r o b i o l-o g y,2022,22(1):153-153.[22]王雪青,胡敏,孙宛,等.白假丝酵母相关基因表达对耐药性及氧化应激的影响[J].中华医院感染学杂志,2020,30(9): 1297-1300.[收稿日期]2023-05-06[本文编辑]卫凤莲㊃684㊃中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r2023,V o l18,N o.6。
乳腺癌细胞株整理
乳腺癌细胞株整理以下是乳腺癌细胞株的汇总整理：名称：600MPE来源：浸润性导管癌形态培养基：DMEM基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：37℃，5% CO2特征：上皮细胞样，来源于恶性胸腔积液，表达表皮生长因子（EGF）、致癌基因her2/neu（超表达）、her3+、her4+、p53+名称：AU565来源：腺癌细胞形态培养基：RPMI-1640基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：37℃，5% CO2特征：乳腺/乳房来源于转移部位，ER(-)、PR(-)、HER2(+)、TP53+WT名称：Bcap-37来源：腺癌细胞形态培养基：RPMI-1640基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：空气（95%）、CO2（5%），温度：37℃特征：浸润性导管癌，贴壁生长，表达WNT3和WNT78，TNF alpha抑制该细胞生长，雌激素受体阴性，但表达5＇外显子缺失的雌激素mRNA名称：BT-474来源：导管癌细胞形态培养基：未提及特征：浸润性导管癌名称：BT-483来源：导管癌细胞形态培养基：RPMI-1640基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：37℃，5% CO2特征：乳腺/乳房来源于导管，上皮细胞样，ER(+)、PR(+)、TP53-名称：BT-549来源：导管癌细胞形态培养基：RPMI-1640和0.023IU/ml胰岛素（90%）、胎牛血清（10%）或高糖DMEM+20%优质胎牛血清气相：空气（95%）、CO2（5%），温度：37℃特征：乳腺/乳房来源于上皮细胞名称：CAMA1来源：腺癌细胞形态培养基：未提及名称：HBL100来源：导管癌形态培养基：DMEM基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：37℃，5% CO2名称：HCC1007来源：导管癌形态培养基：DMEM基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：37℃，5% CO2名称：HCC1143来源：原发性导管癌形态培养基：DMEM基础培养基（90%）、胎牛血清（10%）气相：37℃，5% CO2特征：XXX分期IIA，3级，胸腔积液来源，上皮细胞特征，包括桥粒、微绒毛、紧密连接和间隙连接。
我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物
我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物
佚名
【期刊名称】《中国医药生物技术》
【年(卷),期】2011(6)4
【摘要】军事医学科学院蛋白质组学国家重点实验室张学敏课题组与解放军总医院韦立新课题组联合攻关，在乳腺癌内分泌治疗的耐药机制研究中取得重大成果，发现炎症调控分子CUEDC2在乳腺癌细胞中过量表达导致了乳腺癌患者对内分泌治疗产生耐药，并深入揭示了CUEDC2诱发耐药的全新分子机制，对于指导临床治疗具有重要意义。
周涛、潘欣和邰艳红作为共同第一作者的研究论文5月16日在国际权威学术期刊《自然医学》在线发表并将于近期正式刊出。
【总页数】1页(P290-290)
【关键词】乳腺癌患者;耐药机制;新标志物;科学家;国家重点实验室;军事医学科学院;内分泌治疗;解放军总医院
【正文语种】中文
【中图分类】R737.9
【相关文献】
1.英美科学家称脐血有助于预测过敏/科学家发现导致孕妇疟疾高发的原因/乳腺癌每年递增3%专家称手术不必"一刀切"/股骨头坏死治疗在我国取得重大突破/我国研制的抗艾中药进入Ⅱ期试验/肝细胞移植手术获得成功 [J],
2.科学家发现导致乳腺癌的绝大多数相关基因突变 [J], 张坛
3.科学家发现导致乳腺癌细胞扩散基因 [J], 无
4.科学家发现导致乳腺癌扩散基因 [J],
5.耐药机制是乳腺癌治疗一个亟待解决的难题我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物 [J],
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qPCR内参
qPCR内参植物样品类型稳定性好SAND(At2g28390)TIP41（At4g34270）未知功能基因（At4g26410）SAND(At2g28390)F-box（At5g15710）YLS8(At5g08290)组织器官APT1,EF1α,UBQ5发育时期，组织器官EF1α,UBQ5逆境18s rRNA,25s rRNA发育时期，品种，逆境（紫外伤害）18s rRNA,S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因GAPDH 热激蛋白hsp90基因未知功能基因（TC139056）生物胁迫（免疫病）18s rRNA，EF1α盐胁迫EF1α，CYP冷害胁迫EF1α,Ribosomal protein L 2Dan-J蛋白基因肿瘤蛋白基因CYP,GAPDH,TUA发育时期，组织器官CAC,TIP41发育时期组织器官和逆境胁迫（干旱，盐，高温，低温）、激素UBC18,ACT7组织器官和发育时期UBQ4，UBQ10环境胁迫SamDC 发育时期ACT2/7,TUA 组织器官，光周期，品种EF1b,CYP2ABC转运因子基因F-box家族基因胰岛素降解酶基因CDPK蛋白激酶基因棉花发育时期，组织器官Histone 3,UBQ,UBQ1组织器官GAPDH 品种间25s rRNA葡萄发育时期GAPDH,ACT,SAND,EF1αAt4g34270At4g33380发育时期发育时期，组织器官，营养缺乏（硫、磷碳源），非生物胁迫（激素，冷害，甘露醇，盐）逆境胁迫拟南芥大麦组织器官，高温胁迫水稻马铃薯番茄杨树发育时期，组织器官，逆境胁迫（创伤，激素，锈病）短柄草大豆甘蔗样品间UBQ11,TUA形成层At4g34270籼粳稻品种间eEF-1a，ACT1马铃薯生物胁迫（免疫病）和逆境胁迫（盐，干旱）EF1α物种名称可选内参植物基因（EF-1α）多聚泛素酶基因（UBQ）、肌动蛋白基因（ACT）、α微管蛋白基因、β微管蛋白基拟南芥T1、EF1α、e1F4α、TUB2、TUB6、TUB9、UBQ5、UBQ10、UBQ11;水稻CT11、TUB、25s rRNA、UBC、UBQ5、UBQ10、EF1α、e1F4α；籼粳稻a、Eif-4a、UBC、GAPDH、UBQ-5、TBL、ACT1;短柄草EF1α、GAPDH、SamDC、TUA6、UBC18、UBQ4、UBQ1；大豆TUA、TUB、ELF1α、UBC2、ELF1b、CYP2、G6PD、UBQ10；棉花、Histone3、UBQ7、Actin2、CYP、UBQ1、UBQ2；马铃薯s Rrna、EF1α、TUB、CYP、Ribosomal protein L 2、甘蔗ACT、TUB、GAPDH、25s rRNA；杨树A、ACT2、UBQ7、EF1b、TUB、ACT11、E1F4b、CYP、At4g33380大麦酸脱羧酶基因、GAPDH、热激蛋白hsp90基因、TC139056 番茄J蛋白基因、肿瘤蛋白基因、TUA、CYP、GAPDH葡萄浆果α、GAPDH、MDH、PP2A、SAND、TIP41、TUA、TUB、UBC、UBQ-L40、UBQ10杨树表达明显表达不明显PP2A 18s Rrna TUA18s Rrna TUAUBC）、α微管蛋白基因、β微管蛋白基因；。
肿瘤干细胞生物标志物在宫颈癌进展及治疗中的作用研究进展
肿瘤干细胞生物标志物在宫颈癌进展及治疗中的作用研究进展李珂;王倩青
【期刊名称】《新乡医学院学报》
【年(卷),期】2024(41)2
【摘要】肿瘤干细胞(CSCs)是启动癌症的一个细胞亚群,其与化学治疗耐药和癌症复发有关。
宫颈癌是威胁全球女性健康的主要恶性肿瘤之一。
随着宫颈癌筛查的普及,部分早期宫颈癌及癌前病变得到发现和治疗,但中晚期宫颈癌的治疗及预后并未得到明显改善,治疗方式仍以手术和放化疗为主。
因此,针对宫颈癌CSCs的有效靶向策略对于监测宫颈癌治疗进展和评估新型治疗方法的重要性日益凸显。
本文就宫颈癌CSCs生物标志物在宫颈癌进展中的作用及其作为治疗靶点的潜力作一简要综述。
【总页数】4页(P197-200)
【作者】李珂;王倩青
【作者单位】新乡医学院第四临床学院;新乡市中心医院妇科妇瘤科
【正文语种】中文
【中图分类】R711.74
【相关文献】
1.肿瘤干细胞潜在标志物 DCLK1 在消化道恶性肿瘤中的研究进展
2.子宫颈癌生物学行为及相关肿瘤标志物的临床研究进展
3.间充质干细胞在恶性肿瘤生物学中作
用的研究进展4.卵巢癌肿瘤干细胞及其标志物在卵巢癌诊疗中作用的研究进展5.肝细胞癌中干细胞的生物标志物和靶向治疗研究进展
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白英甾体总生物碱抑制小鼠肝癌细胞H22移植瘤生长药效学研究
白英甾体总生物碱抑制小鼠肝癌细胞H22移植瘤生长药效学研究卜璟;王建农;臧雅丽;顾士萍【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2013(24)7【摘要】目的探讨白英抗肿瘤有效部位对小鼠肝癌细胞H22移植肿瘤生长有无抑制作用及作用强度。
方法采用在ICR小鼠腹腔内接种小鼠H22肝癌细胞细胞株制作肿瘤模型,给予阳性对照药环磷酰胺和白英总甾体生物碱有效部位干预后,测量肿瘤体积和肿瘤重量,计算肿瘤生长抑制率,应用SPSS统计软件,比较组间抗肿瘤药效强度。
结果白英甾体总生物碱24mg/kg对小鼠肝癌细胞H22移植肿瘤有明显的抑制作用,T/C(%)为66.24%,抑瘤率为50.14%;白英甾体总生物碱48mg/kg、12mg/kg对小鼠肝癌细胞H22移植移植肿瘤无抑制作用,T/C(%)分别为104.55%、95.58%,抑瘤率分别为-4.97%、0.97%;而相同条件下,阳性对照药环磷酰胺T/C(%)为14.09%;抑瘤率分别为87.93%。
结论白英甾体总生物碱是白英抗肿瘤的有效部位。
【总页数】3页(P1593-1595)【关键词】白英;抗肿瘤;甾体生物碱;甾体皂苷【作者】卜璟;王建农;臧雅丽;顾士萍【作者单位】中国中医科学院西苑医院实验研究中心【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.全蝎生物酶制剂对小鼠H22肝癌、S180肉瘤移植瘤的抑制生长作用 [J], 陈国光;马琴2.黄精多糖联合低剂量顺铂对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制及其抗氧化损伤作用 [J], 李超彦;周媛媛;王福青3.三氧化二砷抑制小鼠H22肝癌移植瘤血管生长的实验研究 [J], 唐印华;王玺;博挽澜;刘铁夫4.抗癌活性肽对小鼠肝癌H22移植瘤生长的抑制作用 [J], 苏依拉其木格;王朝阳;托娅;苏秀兰5.土家药东方蠊对荷H22小鼠肝癌皮下移植瘤生长的抑制作用 [J], 唐东昕;杨柱;龙奉玺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【初中生物】中科院专家研发出新一代慢性髓细胞白血病抑制剂
【初中生物】中科院专家研发出新一代慢性髓细胞白血病抑制剂
中科院合肥物质科学研究院强磁场科学中心专家研发出新一代针对慢性髓细胞白血病(CML)的BCR-ABL激酶抑制剂CHMFL-ABL-053，可有效阻滞肿瘤细胞生长。
该研究成果日前在线发表在美国化学会药物化学核心期刊《药物化学期刊》上。
慢性髓细胞白血病是一种影响血液及骨髓的恶性肿瘤，它的特点是产生大量不成熟白细胞，这些白细胞在骨髓里聚集，抑制骨髓正常造血；并且能够通过血液在全身扩散，导致病人出现贫血、易出血、感染等。
目前在临床上以ABL激酶为靶标治疗慢性髓细胞白血病的有几种靶向药物，但是这些药物在抑制ABL激酶的同时，还会影响其他激酶，容易引起不同副作用。
强磁场中心刘静研究员课题组和刘青松研究员课题组合作，基于激酶ABL的结构研发出新一代BCR-ABL抑制剂CHMFL-ABL-053，去除了对其他激酶的影响，提高了药物对ABL 激酶的选择性和活性。
CHMFL-ABL-053能够有效抑制慢性髓细胞白血病癌细胞的增殖，并且在小鼠肿瘤实验中有效阻滞了肿瘤生长。
据了解，该研究成果已经申请中国发明专利，并提出PCT(专利合作协定)国际申请，且正在与相关药业联合进行国家一类创新药物开发。
该项研究获得中组部青年千人计划、中科院百人计划、自然科学青年基金等支持。
感谢您的阅读，祝您生活愉快。
徕卡免疫组化平台在非小细胞肺癌间变性淋巴瘤激酶检测中的价值
1998Chin J Lab D iagn，Decem ber，2020, Vol 24，No. 12文章编号：1007 —4287(2020)12—1998 —04徕卡免疫组化平台在非小细胞肺癌间变性淋巴瘤激酶检测中的价值丘佳明s顾玉兰2，蒋廷旺3，魏炜、林小星1，陈志军(常熟市第二人民医院1.病理科；2.肿瘤科;3.科技处；4.呼吸内科，江苏常熟215500)肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤，发病率 和死亡率均位列所有恶性肿瘤的第一位[1]。
肺癌总 数的80 %-85 %是非小细胞肺癌（N S C L C)，间变性 淋巴瘤激酶（A L K)阳性N S C L C是肺癌的一种重要 分子亚型，占全部N S C L C的3%-7%[2]。
近几年针 对于A L K阳性N S C L C的诊疗研究取得了较大突破.克唑替尼（Cri z o t i n i b)、阿来替尼（Alectinib)、塞 瑞替尼（Centinib)等A L K酪氨酸激酶抑制剂研发成功，可明显提高A L K阳性N S C L C患者的客观缓 解率，延长生存期。
因此，精准检测A L K基因状态，对筛选A L K酪氨酸激酶抑制剂的适用患者有决定性的临床意义。
目前，国家药品监督管理局（CFDA)已经批准4 个检测方法可以应用于A L K检测，包括检测ALK 融合蛋白的免疫组织化学（I H C);检测D N A水平 上A L K基因易位的荧光原位杂交（F I S H);检测 A L K融合m R N A的即时荧光定量聚合酶链反应(R T-PC R);检测A L K易位D N A序列或融合mR- N A序列的二代测序（NGS)。
其中F I S H被认为是 A L K阳性N S C L C诊断的金标准「3],R T-P C R和 N G S也均具有较高的灵敏性、特异性和符合率，但 是这3项检测对样本、技术水平和实验室要求较高，收费昂贵且试剂成本高，大部分中小型病理实验室尚未开展。
一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体与应用[发明专利]
![一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体与应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/359fa267b207e87101f69e3143323968011cf4b1.png)
专利名称：一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体与应用专利类型：发明专利
发明人：李春生,李玉静,张静,张二敬,刘鹏茹,刘静静,李紫然,周一鸣
申请号：CN202110705928.X
申请日：20210624
公开号：CN113402608B
公开日：
20220222
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及食品安全技术领域，尤其涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体与应用。
本发明所述杂交瘤细胞株为抗猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的杂交瘤细胞株skTnT‑2E8，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年3月12日，保藏编号为CCTCCNO:C202158。
采用本发明的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体为IgG2a亚型，效价能达到1:4.1×105，亲和力常数Ka＝5.14×106L/mol。
为特异性的检测猪骨骼肌肌钙蛋白T提供了依据。
申请人：河北省科学院生物研究所
地址：050081 河北省石家庄市桥西区友谊南大街46号
国籍：CN
代理机构：北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙)
代理人：王灿
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长链非编码RNA在肺癌诊治中的应用[发明专利]
![长链非编码RNA在肺癌诊治中的应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3f7967f36bd97f192379e95c.png)
专利名称：长链非编码RNA在肺癌诊治中的应用
专利类型：发明专利
发明人：李磊,李晓平,李明江,张亮,廉洁,杨波,杨盼,张卫东申请号：CN202010827134.6
申请日：20200817
公开号：CN111850130A
公开日：
20201030
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了长链非编码RNA在肺癌诊治中的应用，所述长链非编码RNA是
RP11‑720L2.4。
本发明的研究表明RP11‑720L2.4在肺癌组织和在癌旁组织中的表达存在显著差异，且改变RP11‑720L2.4可以调控肺癌细胞增殖，故RP11‑720L2.4可作为肺癌诊治标志物应用于临床。
申请人：天津市第一中心医院
地址：300192 天津市南开区复康路24号
国籍：CN
代理机构：天津创信方达专利代理事务所(普通合伙)
代理人：李京京
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依赖点机化学的荧光检测方法在病原微生物的免疫检测中的应用
依赖点机化学的荧光检测方法在病原微生物的免疫检测中的应用张玺;张奇;白芳;白钢【期刊名称】《南开大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(047)002【摘要】介绍了一种新型抗体的荧光标记检测技术在病原微生物的检测中的应用.首先,以热致死的致病性大肠埃希氏菌免疫Bal B/C小鼠,收集高效价抗体并精制,然后利用6-叠氮-己酸琥珀酰亚胺酯上的琥珀酰亚胺基团将其标记于IgG游离的氨基,获得叠氮化的IgG(N3-IgG),随后通过铜离子催化4-乙炔基-N-乙基-1,8-萘酰亚胺中的炔基与N3-IgG的N3基团进行点击化学反应,使抗体具备可被观察的荧光.依据N3与炔基反应的荧光信号强度,计算N3基团标记效率,结果表明每分子IgG平均可标记6分子的N3基团.与商品化的荧光标记试剂NHS-FITC标记的抗体的比较结果表明,建立的依赖于点击化学反应的荧光抗体技术的检测灵敏度和特异性与现有的常用方法相当.最后,采用N3-IgG进行对应的致病性大肠埃希氏菌的荧光抗体染色分析,结果表明,该方法可有效用于病原微生物的检测.建立了一种新的病原微生物免疫荧光抗体分析方法,丰富了免疫学检测体系和荧光抗体检测手段.【总页数】6页(P40-45)【作者】张玺;张奇;白芳;白钢【作者单位】南开大学药学院,天津300071;南开大学药学院,天津300071;南开大学药学院,天津300071;南开大学药学院,天津300071【正文语种】中文【中图分类】Q-331【相关文献】1.量子点荧光纳米材料的化学合成及其在潜手印显现中的应用 [J], 高杨晨;王猛;张晓梅;杨明飞;伊魁宇;冯杨;李涛;张宁2.荧光量子点的水相合成及其在化学和生物分析中的应用 [J], 李众;祝欣;董朝青;黄香宜;陈虹锦;任吉存3.碳量子点荧光技术在化学实验教学中的应用 [J], 王坤杰;高翔;李红霞;李明亮;张德懿;崔锦峰4.量子点荧光探针技术在有机磷农药分析中应用进展 [J], 归国风;马伟伟;马金明;周娅;王庆海5.量子点标记荧光分析技术在痕量小分子有机污染物检测中的应用 [J], 曲海波;赵苏春;王志刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用
免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用
赵秀兰;张诗武;刘增辉;王欣;古强;孙保存
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2004(020)004
【摘要】组织芯片是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本，并按次序排列在一个新的石蜡块上，制作成HE切片，然后按研究的需要进行免疫组化及原位杂交等研究。
组织芯片技术最重要的特点是：一次可以同时对多个组织块检测研究而对原来的组织材料破坏很小。
此外，利用组织芯片仪还可以进行组织切片的精确定位和多种类型的分子生物学分析。
【总页数】2页(P483-484)
【作者】赵秀兰;张诗武;刘增辉;王欣;古强;孙保存
【作者单位】天津医科大学病理学教研室 300070;天津医科大学病理学教研室300070;天津医科大学病理学教研室 300070;天津医科大学病理学教研室 300070;天津医科大学病理学教研室 300070;天津医科大学病理学教研室 300070
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.CD34与D2-40双重免疫组织化学染色技术在鉴别血管与淋巴管中的应用 [J], 盖文君;姚宏
2.弹力纤维染色与免疫组织化学双重染色技术在先天性心脏病肺动脉高压研究中的
应用 [J], 沈萍;郭林林;徐卓明
3.醋酸氨银染色法网状纤维染色与免疫组织化学双重染色技术 [J], 张晓波;姚海涛;卢凤美;孟庆媛
4.骨髓标本中免疫组织化学及DNA原位末端标记双重染色技术的应用 [J], 李晓;浦权
5.免疫组织化学和天狼猩红双重染色技术在病理诊断中的应用 [J], 刘亚敏;张诗武;魏焕萍
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ISDN/ analog
Packetswitched service
• Must provide access to multiple users and control the network costs
Connection Selection Considerations
• Availability
• Bandwidth • Cost • Ease of management • Application traffic
• Quality of service and reliability
• Access control
9.6k
56/64 kbps 128 kbps
E1/T1
E3/T3
Theoretical Maximum WAN Speeds
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Central Site Considerations
Central site, headquarters, enterprise
Modem
ISDN/ analog
Packet-switched service
Telecommuter site, small office/home office (SOHO), mobile (remote telecommuters)
Remote site, remote office/ branch office (ROBO)
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Packet-Switched Connections
SyncSynchronous serial
CSU/DSU
CSU/DSU
• VCs are established
• Packet-switched networks generally share bandwidth, but the cost is cheaper than a leased line
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Asynchronous Circuit-Switched Connections
EIA/TIA232
Modem
Telephone company network
Modem
EIA/TIA232
Modem
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Dedicated Serial Connections
EIA/TIA-232, EIA/TIA-449, V.35, X.21, EIA-530
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X.25 and Frame Relay Encapsulations
Frame Relay, X.25
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WAN Connection Types
Synchronous serial
Dedicated
Asynchronous serial, ISDN
Circuit-switched
Telephone company
Synchronous serial
Service provider
• Remote access networks connect sites • Connection requirements vary depending on user requirements and cost
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Typical WAN Protocols
PPP, HDLC, SLIP Dedicated
PPP, SLIP Circuit-switched
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Company Sites
Central site, headquarters, enterprise
Windows 95 PC
PPP Encapsulation
Multiple protocol encapsulations using NCPs in PPP TCP/IP IPX Appletalk
PPP encapsulation
Link setup and control using LCP in PPP
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Chapter 2: Selecting Cisco Products for Remote Connections
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Objectives
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Dedicated Connections
• Links are continuously available
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Remote Access Overview
Telephone company
X.25, Frame Relay, ATM
Packet-switched
Service provider
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0
1
2 Hours/Day
3+
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WAN Connection Speed Comparison
Leased line, Frame Relay
ISDN—PRI
X.25, ISDN—BRI Asynchronous Dialup
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Circuit-Switched ISDN Connections
BRI
NT1
PRI
CSU/DSU
Switch
ISDN service provider
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WAN Connection Summary
Connection Type Applications
Leased lines Frame Relay ISDN Asynchronous dialup X.25 High control, full bandwidth, high-cost enterprise networks, and last-mile access Medium control, shared bandwidth, medium-cost enterprise backbones; branch sites Low control, shared bandwidth, more bandwidth than dialup Low control, shared bandwidth, variable costeffective for limited use connections, high reliability Low control, shared bandwidth, variable costeffective for limited use connections like DDR