全身用药的毒性研究

3、剂量设计 低剂量组-无毒剂量（临床用量2-3倍） 中剂量组-高、低剂量几何平均数 高剂量组-毒性剂量
4.给药路径 拟推荐临床用药路径
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5、给药容量
应依据体重增加情况调整给药量，按 等量不一样浓度法配制药品。
6.试验周期
临床试验用药 验用药
动物试
＜ 5天
2
周
＜ 2周
4
周
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第一节 新药急性毒性试验
急性毒性试验
毒性反应类型 定性 出现和消失时间
可能靶器官和死亡原因
致死量 定量 最大给药量
半数致死量
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一、目标和意义
1.了解新药急性毒性强弱 LD50 ED50 治疗指数（ LD50/ED50）
相对毒性 安全系数（ LD5/ ED95）
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四）热原试验
1、目标-判定受试物是否有致热作用 2、动物-家兔 3.方法
3只家兔，侧正常体温，注射药品，每 小时测体温一次，共3次。最高一次温度 减正常体温。如三只家兔中有一只升温超 过0.6℃或三只家兔升温总和超出1.4℃时; 应另取5只家兔复试，方法通上。
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第三节 制剂全身毒性试验
一、静脉注射制剂全身毒性试验
全身毒性试验
血管刺激性试验 体外溶血试验
过敏性试验 热原试验
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一）血管刺激性试验
1、目标-观察静脉注射剂屡次给予后对血管 刺激性情况。
2、动物-家兔（每组最少3只动物） 3、方法-分成两组（阴性对照组、给药组）
给药。给药前禁食6-12小时，给药后 禁食
3-4小时。 全身用药的毒性研究
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（五）近似致死剂量试验
主要用于非啮齿动物誓言。常见
Beagel犬或猴。
1、预计可能致死范围。
2、按50%递增法，设计10-20个剂 量
序列表。
3.在剂量序列表中找出可能致死 剂
量范围。 全身用药的毒性研究
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（六）其它方法
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2.为长久毒性试验和特殊毒性试验 剂量设置提供依据
致突变作用评价为核试验最高剂量
为1/2半数致死量。
生殖毒性试验中，雌性动物最高 量为
急毒中最大耐受量。
长久毒性试验中为急性毒性最大 耐
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受量。
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3、获取新药毒性反应信息
毒性反应症状、靶器官、致 死原因等
在受试药品合理最大容积和最 大
浓度条件下, 单次给予试验动物不 产生
死亡最大给药量试验。
（三）最大耐受量试验
单次给药引发动物出现显著中毒 反
应而未发生死亡剂量。 全身用药的毒性研究
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（四）固定剂量试验
试验不以死亡为观察终点，而以 显著
毒性体征为评价指标。
据资料，用5.50、500和mg/kg
4个国定剂量中一个做初试剂量，单 次
内，设计5-6个剂量组。各剂量组 间距
为1:0.65-0.85,高剂量70%死亡率 以
上，低剂量死亡率30%以下。
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4、给药 两种给药路径
5、观察 观察时间及观察内容
6.结果处理与评价 对数据进行科学全方面
分析，概括出 药品急性毒性总体情况。
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（二）最大给药量试验
1、上下法（阶梯法、序贯法） 2.累积剂量设计法（金字塔法）
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三、急性毒性试验中常见LD50计算方法
1、Bliss法 2、寇氏法 3、改良寇氏法 4.何尔恩法
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第二节 新药长久毒性试验
长久毒性试验
对动物重复屡次连续给药毒性试验。
长久毒性试验目标
1、重复屡次给药情况下，试验动物
2-4周
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二、检测项目
（一）普通观察 外观体征和行为活动, 流涎等腺体分泌、
粪便性状与颜色、毛色、行为、给药局部 反应、食量及体重改变。对死亡动物应进 行系统病理学检验。
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（二）血液学指标
血液学指标
红细胞、网织红细胞计数 血红蛋白 白细胞总数级分类 血小板 凝血时间
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四、资料整理要求
1、首页写明试验题目，试验单位，课题负责 人署名、试验参加人名单，职称，试验开 始即结束时间，试验原始资料保留地点， 申请注册单位等。
2.第二页 试验摘要
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3、内容 试验汇报内容 包含试验方法、目 、供试品（品名、批号、生产单位、规 格、包装情况、性状等等。），试验动物 情况（起源、数量、品系、雌雄、动物证、 试验环境温湿度、饲料起源等），试验方 法，结果，结论，参考文件等。
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三、检测指标时间
（一）检验间隔（给药期间检验间隔）
毒性试验周期 2周 4周
3 个月 6 个月 12 个月
给药期间检查次数 1 1 2 2 3
检查间隔 1周 2周
1 个月 2 个月 3 个月
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（二）恢复性观察 最终一次给药后24小时, 每组活杀部
分动物监测各项指标。留下个别动物, 根 据药品特点和毒性情况, 继续观察2-4周, 以了解毒性反应可逆性和可能出现延 迟性毒性。
三、检测指标时间 1、检验时间 2、恢复性观察
四、资料整理要求 五、结果评价
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分别对家兔耳缘静脉注射给药，连 续5次，末次注射后24小时处死个别动物， 肉眼观察并对组织进行病理学检验；余下 动物14天后进行一样检验。 4、判定方法 5.结果评价
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家兔耳缘静脉血管
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二）体外溶血试验
1、目标-静脉注射剂对红细胞状态影响 2、动物-家兔1只 3.方法
普通情况
毒性大小
有
显著种属差异
特殊情况
显著种属差异 全身用药的毒性研究
无
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二、试验方法
（一）半数致死量（LD50)测定 试验方法 1.试验动物选择 啮齿类动物 动物 非啮齿类动物 动物性别、年纪、数量。
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2、动物随机分组 按性别、体重采取分层随机法
3.剂量设计 预试验得出0-100%死亡剂量范围
1）2%红细胞悬液制备 2）受试物制备-临床使用浓度 3）试验方法
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体外溶血试验加样表
试管号 1 2 3 4 5 6 7
2%红细胞 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
生理盐水 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5
蒸馏水
2.5
受试物 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
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（四）特殊检验
可能引发眼、耳毒性药品, 应增加 眼、耳毒性检验。
有些药品尚需研究对酸碱平衡、水盐 代谢影响。
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（五）系统尸体解剖
1、脏器系数 心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲
状腺、睾丸、子宫、脑等 2.组织学检验
内容为：脑、脊髓、视神经、眼、 垂体、心脏、肝、脾、肺、肾、肾兔升温总和不超出1.4℃而且每 只家兔升温不超出0.6℃。 2）5只家兔升温总和不超出3.5℃而且升
温超出0.6℃家兔不超出1只。 5.结果评价
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二、局部用药全身毒性试验
主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻 剂、吸入剂及直肠、阴道制剂等引发全 身毒性试验。见第十九章。
次，首次注射第14日、21日每组取3只动物
静脉注射，观察过敏反应。
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4、判定方法
豚鼠过敏反应判定标准
反应级数 反应症状
0
无显著反应
1
有轻微抓鼻、颤动或竖毛
2
有几次咳嗽、抓鼻、颤动或竖毛
3
屡次或连续咳嗽、伴有呼吸困难
或痉挛、抽搐等
4 死亡
痉挛、抽搐、大小便失禁、休克
5.结果评价
4.要客观描述大致解剖及病理学检验结果， 提供病理照片材料。
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五、结果评价
1、试验结果数据进行统计学处理。 2、依据试验目标，结合所观察到毒性表现
作出恰当评价。 3、对取得数据进行科学全方面地分析。 4.对于一些项目标试验，可安排在该试验中
同时观察，并提供符合要求试验结果。
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（三）血液生化指标
天门冬氨酸氨基转换酶(AST) 丙氨酸氨酸氨基转换酶(ALT) 碱性磷酸酶(ALP) 血液生化指标 尿酸氮(BUN) 、总蛋白(TP) 白蛋白(Alb) 、血糖(ALU) 总胆红素(T-BIL)、肌酐(Crea) 总胆固醇(T-CHO)
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小结
第一节 新药急性毒性试验 一、目标和意义 二、试验方法
1、半数致死量测定 2、最大给药量试验 3、最大耐受量试验 4、固定剂量试验 5.近似致死量试验 三、急性毒性试验中常见 LD50计算方法 第二节 新药长久毒性试验 一、普通标准
二、检测项目 1、普通观察 2、血液学指标 3、血液生化指标 4、特殊检验 5.系统解剖
出现毒性反应、量效关系、主要靶器
官、损害程度及其可逆性。
2.取得重复给药情况下，试验动物能
耐收剂量范围及完全无毒性反应安全
范围。
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一、普通标准
1.动物选择及分组 啮齿类 非啮齿类
溶剂对照组 高剂量组 给药试验组 中剂量组
低剂量组
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2、试验室条件 应尽可能符合GLP标准。
4、判定方法-溶血、无溶血、红细胞凝聚 5.结果评价-3小时内无溶血，能够注射使用
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三）过敏性试验
1、目标-观察供试物对动物有没有过敏反应
2、动物-雄性豚鼠18只（三组-每组6只）
3.方法 液
溶剂组-生理盐水或葡萄糖注射
1）分组 阳性组-1%新鲜鸡蛋清
给药组-受试物
2）每组分别腹腔注射，隔日一次，共三