HPLC 法测定甲硫酸新斯的明注射液的含量

HPLC 法测定甲硫酸新斯的明注射液的含量
孙莉
【摘要】Objective To establish a method for determination of neostigmine methylsulfate injection.Methods The column was Agi-lent ZORAX Eclipse XDB C18 column(250 mm ×4.6 mm,5 μm).The mobile phase was 0.05 moL·L -1 monopotassium phosphate solution(pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid)-acetonitrile(90∶10).The flow rate was 1.0 mL·min -
1 ,and the detection wave-length was 215 nm.Results The linear range of neostigmine methylsulfate was 0.10
2 ~1.02 g·L -1 (r =0.999 9).The average re-covery rate was 99.57% and RSD was 0.93%.Conclusions The method is sensitive,accurate and rapid,which can be used to deter-mine the content
of neostigmine methylsulfate injection.%目的：建立 HPLC 法测定甲硫酸新斯的明注射液的含量。

方法用 Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（250 mm
×4．6 mm，5μm），以0．05 moL·L －1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节 pH 为3．0）—乙腈（90∶10）为流动相，流速为1．0 mL·min －1，检测波长为215 nm。

结果甲硫酸新斯的明线性范围为在0．102～1．02 g·L －1（r ＝0．9999）；平均回收率为99．57％，RSD 为0．93％。

结论该方法灵敏，快速，结果准确，可用于甲硫酸新斯的明注射液的质量控制。

【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2015(000)001
【总页数】3页(P55-57)
【关键词】HPLC;甲硫酸新斯的明注射液;含量
【作者】孙莉
【作者单位】安徽省芜湖市食品药品检验所，安徽芜湖 241001
【正文语种】中文
甲硫酸新斯的明是一种抗胆碱酯酶药，常用于重症肌无力、手术后功能性肠胀气及尿潴留等病的治疗，也能发挥改善眼睛调节功能，减轻眼结膜充血的作用。

对于其制剂甲硫酸新斯的明注射液的含量测定，《中国药典》则采用半微量定氮法［1]，该方法取样量，操作繁琐，结果误差大。

经过系统的试验，笔者采用HPLC法测定甲硫酸新斯的明注射液中甲硫酸新斯的明的含量，方法简便、准确、专属性强，获得了满意的结果。

1 仪器与试药
Agilent 1260型高效液相色谱仪;紫外检测器(美国安捷伦公司);梅特勒-托利多
AB265-S电子分析天平(德国梅特勒-托利多公司);UV-3900紫外可见分光光度计(日本日立公司)。

甲硫酸新斯的明对照品(批号:100550-200401，中国药品生物制品检定所);甲硫酸新斯的明注射液4批(上海信谊金朱药业有限公司，批号120412;上海信谊金朱药业有限公司，批号120706;河南润弘制药股份有限公司，批号1208171;河南润弘制药股份有限公司，批号1302011);乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为二次去离子水。

2 方法与结果
2．1 色谱条件及系统适用性试验色谱柱:Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:0．05 moL·L－1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节
pH 为 3．0)—乙腈(90∶10)，流速为 1．0 mL·min－1，检测波长为215 nm，进样量:10 μL，柱温:室温。

理论塔板数按甲硫酸新斯的明峰计算应不小于2 000，甲硫酸新斯的明与相邻杂质峰的分离度应符合要求，2．2项下溶液的色谱图见图1(a～b)。

2．2 溶液的制备
2．2．1 对照品溶液的制备精密称取甲硫酸新斯的明对照品10．20 mg，置20 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2．2．2 供试品溶液的制备取本品，用水稀释制成每1 mL中含甲硫酸新斯的明0．5 mg的溶液，作为供试品溶液。

2．3 线性关系考察精密称取甲硫酸新斯的明对照品51．00 mg，置50 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

精密量取对照品储备液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0 mL 分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按拟定的色谱条件进行检测，记录色谱图，以甲硫酸新斯的明浓度(g·L－1)为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，得回归方程 Y=171．75+18 694X，r=0．999 9。

表明甲硫酸新斯的明在0．102 ～1．02 g·L－1浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2．4 精密度、重复性及稳定性试验分别取同一种对照品溶液(0．51 g·L－1)，在上述色谱条件下，重复测定6次，每次10μL，甲硫酸新斯的明峰面积的RSD为0．049%(n=6)，表明精密度良好。

分别取同一批甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)共6份，在上述色谱条件下进样，记录色谱图，甲硫酸新斯的明含量测定的RSD为0．046%，表明本法重复性好。

分别取同一种对照品溶液(0．51 g·L－1)，在室温下放置，分别于 0、2、4、6、8 h 进样，记录色谱图。

甲硫酸新斯的明峰面积的RSD为0．17%，表明溶液的稳
定性良好。

2．5 回收率试验取已知含量的供试品溶液(120706)2 mL各9份，置10 mL容
量瓶中，分别加入对照品溶液(1．02 g·L－1)0．8、1．0、1．2 mL 各 3份，用
水稀释至刻度，摇匀，按2．1项下色谱条件，分别进样。

记录色谱图与峰面积，本方法的平均回收率为99．57%，RSD为0．95%符合要求。

2．6 专属性试验
2．6．1 酸降解溶液的配制精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)1 mL，置10 mL量瓶中，加5 mol·L－1盐酸溶液100 μL，放置 30 min，加5 mol·L－1氢氧化钠溶液100μL，加水稀释至刻度，摇匀。

2．6．2 碱降解溶液的配制精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)1 mL，置10 mL量瓶中，加5 mol·L－1氢氧化钠溶液100 μL，放置 30 min，加5 mol·L－1盐酸溶液100μL，加水稀释至刻度，摇匀。

2．6．3 光降解溶液的配制将甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)，置太阳光下放置24 h后，即得。

2．6．4 热降解溶液的配制将甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)，置100℃水浴中加热3 h后，即得。

按上述色谱条件进样，记录色谱图(图1 c～f)。

结果显示，本品在强酸和强碱破坏条件下，在保留时间为3．5 min附近降解物峰面积增大明显，杂质个数无明显增加，而在加热和光照条件下，样品降解不明显，在此色谱条件下，主峰的分离度约为8．5，表明该方法专属性良好。

图1 甲硫酸新斯的明高效液相色谱图
2．7 检测限和定量限取对照品溶液(0．102 g·L－1)用水稀释若干倍，在上述色
谱条件下测定，以信噪比S/N=3计算检测限，甲硫酸新斯的明检测限约为1．0 ng。

以信噪比S/N=10估算定量下限，约为4．0 ng。

实配4．0 ng稀溶液，经
检测通过。

2．8 样品含量测定精密量取本品适量，加水稀释制成每1 mL中约含0．5 mg 的溶液，作为供试品溶液。

精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

另取甲硫酸新斯的明对照品，同法操作，按外标法以峰面积计算，即得，结果见表1。

表1 样品含量测定结果批号含量/%HPLC 法定氮法1208171 98．9 103 1302011 97．96 103．9 120412 100．52 104．4 120706 99．82 102．3
3 讨论
笔者采用HPLC法测定甲硫酸新斯的明注射液中甲硫酸新斯的明的含量，能有效地控制该药的质量。

参考文献［2－9]，在检测波长的选择上，笔者将0．25 g·L －1的甲硫酸新斯的明水溶液在400～200 nm波长范围内进行紫外扫描，图谱显示在260 nm和210 nm的波长有最大吸收，但260 nm处的吸光度太低，考虑到210 nm附近是一个宽带吸收，本文选择215 nm作为检测波长。

参照《中国药典》有关物质检查项下，笔者将流动相0．05 moL·L－1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 为 3．0)—乙腈(90∶10)和 0．05 moL·L－1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节 pH为 3．0)—乙腈(90∶10)(含0．001 5 moL·L－1庚烷磺酸钠)进行了比较，发现0．001 5 moL·L－1庚烷磺酸钠对主峰的峰形及塔板无明显改善，故选择了相对简单的前者作为流动相。

从表1数据可以看出，药典采用的半微量定氮法所测得结果相对于液相方法均高出3% ～6%，可见药典方法的误差因素较多，而本文所采用的HPLC法检测甲硫酸新斯的明的含量结果可靠，可用于甲硫酸新斯的明注射液的质量控制。

参考文献:
【相关文献】
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