HPLC-ELSD法测定金刚藤软胶囊中薯蓣皂苷元的含量

HPLC-ELSD法测定金刚藤软胶囊中薯蓣皂苷元的含量
代龙
【摘要】目的建立金刚藤软胶囊中薯蓣皂苷元含量的测定方法.方法采用HPLC-ELSD法,色谱柱:C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温为室温;流速:1.0 mL·min-1;ELSD飘移管温度:105℃;载气流速:2.0 mL·min-1.结果薯蓣皂苷元在1.14～6.84μg范围内线性关系良好(r=0.999 7);样品平均回收率为96.6%,RSD为2.1%.结论该方法简便、准确、重现性好,可作为该制剂的含量测定方法.
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2009(024)004
【总页数】2页(P267-268)
【关键词】金刚藤软胶囊;HPLC;ELSD;薯蓣皂苷元;含量测定
【作者】代龙
【作者单位】山东中医药大学,山东,济南,250014
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
金刚藤软胶囊是由金刚藤提取物与大豆油按1∶2.5比例制备而成，是金刚藤胶囊〔WS3-612(Z-123)-2002(Z)〕的改剂型品种，具有清热解毒、消肿散结的作用，临床常用于附件炎和附件炎性包块的治疗。

考虑到其主要成分薯蓣皂苷元的紫外吸收靠近末端(203 nm)，干扰物质较多，不好实现色谱分离，故本实验采用HPLC-ELSD法测定其含量。

经方法学考察，表明该法专属性强，其它成分对薯蓣皂苷元
的测定无干扰，且方法简便、快速、准确、重现性好。

1.1 仪器岛津LC-2010A高效液相色谱仪；Alltech ELSD-2000型蒸发光散射检测器；KQ-250E型超声仪；AL204电子天平。

1.2 试药薯蓣皂苷元对照品(购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号1539-200001)；金刚藤软胶囊由金刚藤提取物与大豆油按1∶
2.5比例制备而成；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2.1 色谱条件色谱柱:C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相:乙腈-水(90∶10)；柱温为室温；流速:1.0 mL·min-1；ELSD飘移管温度:105 ℃；载气流速:2.0 mL·min-1。

2.2 对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇溶解，制成每1 mL含0.25 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取本品，倾出内容物，称取4 g，精密称定；拌合2 g的硅藻土，置索氏提取器中，以石油醚提取2 h；弃去石油醚液，取出药包，挥干石油醚；加甲醇50 mL，超声提取(250 W，50 kHz)30 min，放冷，滤过，以适量甲醇洗涤残渣，滤过，合并甲醇液，水浴蒸干；残渣加50%乙醇20 mL溶解并定量转移至烧瓶中，加浓盐酸2 mL，沸水浴水解2 h；放冷，以三氯甲烷萃取4次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，以氨试液洗涤2次，每次25 mL，三氯甲烷液以水洗涤至近中性，水浴蒸干；残渣加甲醇溶解并定量转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过，即得。

2.4 阴性对照试验按制剂工艺制备不含金刚藤的阴性样品。

取阴性样品4 g，照供试品溶液处理方法制备，按上述色谱条件测定，阴性对照溶液色谱中，在与薯蓣皂苷元峰相同保留时间处，无吸收峰，即阴性对照无干扰，色谱图见图1。

2.5 线性关系考察精密称取薯蓣皂苷元对照品11.40 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度；再分别精密移取0.5，1，1.5，2，2.5和3 mL各置10
mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液；分别吸取上述对照品溶液，进样(20 μL定量环)，测定峰面积，以薯蓣皂苷元微克数的对数值为横坐标，峰面积积分值的对数值为纵坐标，得回归方程：Y=1.200 6X+4.782 3，r=0.999 7。

结果表明薯蓣皂苷元在1.14～6.84 μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验吸取薯蓣皂苷元对照品溶液(0.228 g·L-1)5针，注入液相色谱仪，测定。

峰面积平均值为387 954.6，RSD为1.79%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验取本品(批号20070405)内容物4 g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品液，吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，再分别于1，4，8和24 h测定1次。

结果表明，峰面积在24 h内基本稳定，峰面积平均值为252 989.4，RSD为1.87%。

2.8 重现性试验取本品(批号20070405)5份，精密称定，按2.3项下方法制备供试品液，测定，平均含量为0.097 2 mg·粒-1，RSD为1.98%。

表明本方法的重现性较好。

2.9 加样回收率试验取已知含量的本品内容物(批号20070405，含量为0.097 2 mg·粒-1，每粒内容物0.5 g，折合含量为0.194 4 mg·g-1)5份，每份约2 g，精密称定;分别拌合1 g的硅藻土，置索氏提取器中，以石油醚索氏提取2 h；弃去石油醚液，药包挥干石油醚，精密加入薯蓣皂苷元对照品甲醇液(0.123 g·L -1)各3 mL，以下与供试品制备方法相同。

计算回收率，结果见表1。

2.10 样品含量测定按正文含量测定方法，对3批样品进行测定，结果见表2。

①供试品制备时，酸水解后，三氯甲烷萃取液颜色较深，为保护色谱柱及减少色谱峰干扰，故采用氨试液洗涤除杂。

②软胶囊剂中以大豆油作辅料，需用石油醚或乙醚萃取除油。

在加样回收时，若先加入薯蓣皂苷元则石油醚除油时会损失。

试验确定在挥干石油醚后再加入薯蓣皂苷元对照品溶液，考察其回收率。

而文献[1]报道的是在称量完后马上加入，显然是
不合理的。

③薯蓣皂苷元是金刚藤的指标成分，部颁标准对该药材测定方法选用薄层扫描法
[2]，但其稳定性和重现性较差，且操作烦琐。

也有采用HPLC-UV法检测[1]，经试验干扰较大，基线不稳，结果不甚理想。

ELSD为质量型检测器，灵敏度、稳定性及重现性等均符合含量测定的要求[3]。

该方法可以为薯蓣皂苷元的开发、生产以及金刚藤药材的质量控制提供依据。

【相关文献】
[1] 沈娟，武向峰，朱臻宇，等. RP-HPLC法测定金刚藤软胶囊中薯蓣皂苷元的含量[J].中药新药与临床药理，2005，16(6)：438.
[2] WS3-B-1758-94.中华人民共和国卫生部部颁标准[S].第9册：1994:98.
[3] 谢守兰，李炜，冯敏，等.HPLC-ELSD法测定宫血停颗粒中黄芪甲苷的含量[J].西北药学杂志，2008，23(3)：148-149.。