六味地黄丸对糖尿病牙周炎小鼠成纤维细胞和护骨素的影响

六味地黄丸对糖尿病牙周炎小鼠成纤维细胞和护骨素的影响
目的探讨六味地黄丸对糖尿病牙周炎患者的成纤维细胞和护骨素的影响。

方法选取50只大鼠建立糖尿病牙周炎模型，将其随机分为对照组和观察组，每组25只。

对照组正常喂养，蒸馏水灌胃。

观察组六味地黄丸600 mg/（100 g/d）灌胃。

进行HE染色，在光镜下观察，计算并比较两组小鼠成纤维细胞和护骨素数。

结果与对照组相比，观察组的成纤维细胞和护骨素均明显高于对照组（P ＜0.05）。

小鼠护骨素和时间进行相关分析，结果呈明显正相关(r = 0.885，P < 0.01)，小鼠成纤维细胞和时间进行相关分析，结果呈明显负相关（r = -0.796，P < 0.01）。

结论六味地黄丸能明显改善糖尿病牙周炎患者的成纤维细胞和护骨素情况，为临床治疗糖尿病牙周炎提供科学依据。

[Abstract] Objective To explore the influence of Liuwei Dihuang to rehmannia periodontitis fibroblasts and protect bone meal influence in diabetes patients. Methods Selected 50 rats diabetes periodontitis model establishment, and it would randomly divided into the control group and the observation group, each group of only 25. The normal control group feeding, distilled water irrigation stomach. The observation group bolus of Liuwei Dihuang 600 mg/(100 g/d) fill the stomach. For HE dyed, in light-microscopy, calculation and compared the two groups of mice fibroblasts and protect bone primes. Results Compared with the control, the observation group fibroblasts and protect bone meal were significantly higher than that in control group (P < 0.05). The bone meal and time in mice correlation analysis, the result was obviously positive correlation (r = 0.885, P < 0.01), the mice fibroblasts and time for the correlation analyzed, the result was obvious negative correlation (r =-0.796, P < 0.01). Conclusion Bolus of Liuwei Dihuang can obviously improve the diabetes patients with periodontitis fibroblasts and protect bone meal, clinical treatment for diabetes periodontitis provide the scientific basis.
[Key words] Liuwei Dihuang; Diabetes periodontitis; Fibroblasts; The bone meal; Animal experiments
牙周炎是口腔两大主要疾病之一。

糖尿病（DM）是以慢性高血糖为一种代谢性疾病，严重影响骨代谢与骨重建，是造成骨丧失的主要原因之一[1]。

牙周炎是DM的重要并发症，且发病率高。

DM和牙周炎之间存在双向关系[2-3]。

成纤维细胞（Fb）是牙龈结缔组织的主要构成细胞，也是牙周组织改建的主要修复细胞之一。

护骨素（OPG）是影响骨代谢的重要因子，在牙周炎骨吸收发病过程中起重要作用。

六味地黄丸能增强机体内分泌和免疫功能，抑制软骨细胞死亡，促进骨形成。

近年来，学者发现六味地黄丸能改善糖尿病牙周炎的临床症状[4-5]。

现将六味地黄丸治疗糖尿病牙周炎小鼠成纤维细胞和护骨素的研究报道如下，以进一步探讨其治疗效果。

1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物筛选健康成年小鼠50只（由本院实验动物中心提供），雌雄各半，月龄3～5个月，体重在80～100 g。

1.1.2 试剂药品链脲佐菌素（美国Sigma公司，批号：2007503）；OPG多克隆抗体（武汉博士德生物材料公司）；HE染色剂（武汉博士德生物材料公司）；切片机（日本进口）。

1.1.3 仪器光学显微镜（重庆光学仪器厂）；奥林巴斯数码照相机（日本Olympus）；JENMl200透射电镜（日本JEOL公司）。

1.2 方法
1.2.1 糖尿病动物模型的建立按55 mg/kg腹腔内一次性注射链脲佐菌素，注射1周后检测血糖，血糖＞16.65 mmol/L者定为糖尿病大鼠，以后于用药4、8、12周检测各组大鼠晨空腹血糖。

全麻下用口腔正畸直径0.2 mm结扎钢丝，结扎左上第2磨牙1圈，1周后进行牙周探诊深度（PD）检查，通过牙龈色形质和探诊出血的视觉指标及PD证明牙周炎动物成功与否。

1.2.2 给药1周后，对照组正常喂养，蒸馏水灌胃。

观察组六味地黄丸600 mg/（100 g/d）灌胃。

于4、8、12周分批处死实验动物，切取左上颚骨及上第2磨牙及周围牙龈组织和黏膜，制作石蜡切片，进行HE染色，在光镜下观察第1、2磨牙和第2、3磨牙之间的牙周组织病理改变。

第1、2磨牙和第2、3磨牙之间牙周韧带部位选取6个不同视野（×40），应用Mais图像分析系统3.0，计数不同视野下牙周膜成纤维细胞数，并计算单位下牙周膜成纤维数，同样方法计算单位面积下骨细胞数目。

1.3 统计学处理
采用SPSS 17.0统计学软件，一般资料用均数±标准差（x±s）表示，计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 两组血清OPG的比较
具体见表1。

由表1可以看出，与对照组相比，观察组的OPG明显高于对照组（P < 0.05）。

OPG和时间进行相关分析，结果呈明显正相关（r = 0.885，P < 0.01）。

2.2 两组血清Fb的比较
具体见表2。

由表2可以看出，与对照组相比，观察组的血清OPG明显高
于对照组（P < 0.05）。

Fb和时间进行相关分析，结果呈明显负相关（r = -0.796，P < 0.01）。

3 讨论
牙周健康是WHO列为人类保健水平的一项重要指标，而牙周炎不仅受局部因素的影响，而且还受全身健康状况的影响，尤其是糖尿病。

护骨素时骨组织改建、破骨细胞分化、激活、成熟的关键调节因子，将骨代谢、免疫系统和内分泌系统紧密联系在一起[6]。

成纤维细胞是牙龈结缔组织构成细胞和牙周组织改建的修复细胞[7]。

六味地黄丸由熟地黄、山萸肉、山药、泽泻、牡丹皮及茯苓六味药组成。

其中熟地黄、山萸肉、山药三药相配，为“三补”，起到滋养肝脾肾的作用。

方中泽泻、牡丹皮及茯苓为“三泄”，起到渗湿浊，清虚热作用。

六味合用，三补三泻，其中补药用量重于“泻药”，是以补为主；肝脾肾三阴并补，以滋补肾阴为主[8-9]。

《成方便读》云：“此方大补肝脾肾三脏，真阴不足，精血亏损等证。

” 六味地黄丸作为中药补肾的代表方，从整体上提高人体免疫力，临床研究表明六味地黄丸在治疗牙周炎中有明显改善作用，可弥补西药的局限性。

同时六味地黄丸价廉，可长期使用，对于糖尿病牙周炎患者而言，可减轻糖尿病症状，降低血糖。

本研究结果显示，观察组的成纤维细胞和护骨素均明显高于对照组（P < 0.05）。

小鼠护骨素和时间进行相关分析，结果呈明显正相关（r = 0.885，P < 0.01），小鼠成纤维细胞和时间进行相关分析，结果呈明显负相关（r = -0.796，P < 0.01）。

因此，六味地黄丸能明显改善糖尿病牙周炎患者的成纤维细胞和护骨素情况，为临床治疗糖尿病牙周炎提供科学依据。

[参考文献]
[1] 高振. 六味地黄丸配合牙周基础治疗对肾气虚损型牙周炎临床疗效分析[J]. 时珍围医国药，2008，19（5）：1218-1219.
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