HPLC法同时测定生脉散配方颗粒中人参皂苷Rg1和Re的含量

HPLC法同时测定生脉散配方颗粒中人参皂苷Rg1和Re的
含量
张加雄;王凌;苏永林;杨正中;潘雄
【摘要】目的探讨高效液相色谱法(HPLC)同时测定生脉散配方颗粒中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量的可行性.方法运用D101大孔吸附树脂,对生脉散配方颗粒水溶液进行分离、纯化,制备供试品溶液.HPLC条件为:Diamonsil TM C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-0.05％磷酸溶液(20∶80),流速为
1ml/min,检测波长203 nm,进样量10μl.结果人参皂苷Rg1在0.252～2.52 μg 范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为100.45％(RSD=1.01％);人参皂苷Re在0.249～2.49μg范围内线性关系良好(r=0.9995),平均加样回收率为98.77％(RSD=1.22％).结论 HPLC法同时测定生脉散配方颗粒中人参皂苷Rg1和Re的方法简便、准确、重复性好,可用于生脉散配方颗粒的质量控制.%Objective To explore the feasibility of high performance liquid chromatography (HPLC) in the simultaneous determination of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re in Shengmaisan Formula Granule.Methods D101 macroreticular resin was used to separate and purify Shengrnaisan Formula Granule solution to prepare test solution.HPLC conditions were:Diamonsil TM C18 chromatographic column(5 μm,250 mm× 4.6 mm),mobile phase acetonitrile-0.05％ phosphoric acid
solution(20∶80),flow velocity one ml/min,detection wavelength 203 nm and sample size 10 μl.Results The linear relation of gins enoside Rg1 was good within the range of 0.252～2.52 μg (r=0.9998);the average recovery rate was 100.45％ (RSD=1.01％).The linear relation of ginsenoside Re was
good within the range of 0.249～2.49 μg (r=0.9995);the average recovery rate was 98.77％ (RSD=1.22％).Conclusion The simultaneous determination of ginsenoside Rg1 and Re in Shengmaisan Formula Granule by HPLC is simple and highly accurate and repeatable and may be used in the quality control of Shengmaisan Formula Granule.
【期刊名称】《西南国防医药》
【年(卷),期】2017(027)009
【总页数】3页(P916-918)
【关键词】生脉散;高效液相色谱法;人参皂苷Rg1;人参皂苷Re;同时测定
【作者】张加雄;王凌;苏永林;杨正中;潘雄
【作者单位】614100四川夹江,解放军42医院;夹江县食品药品监督管理
局;614100四川夹江,解放军42医院;614100四川夹江,解放军42医院;614100四川夹江,解放军42医院
【正文语种】中文
【中图分类】R917
生脉散配方颗粒是根据中医临床辨证施治的需要，将益气生津、敛阴止汗的基本要方“生脉散”制成的新型配方颗粒。

其性味、归经、功效与“生脉散”汤剂保持一致，是传统经方的新的应用形式。

生脉散由人参、麦冬、五味子组成，人参为方中君药。

人参皂苷Rg1和人参皂苷Re是人参中含量较高的有效成分，以这两种成分为指标对生脉散进行质量控制具有重要意义。

本实验探讨高效液相色谱法（HPLC）同时测定其中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量的可行性，为生脉散配
方颗粒质量控制方法的建立提供实验依据。

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；KQ-500DE超声波清
洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BSA124S-CW型电子分析天平（德国Sartorius公司）；人参皂苷Re、人参皂苷Rg1对照品（批号分别为： 110703-201128、110754-201324），由中国生物制品药品检定所提供；生脉散配方颗粒及其缺人参的阴性样品均为自制；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2.1 色谱条件 Diamonsil TM C18色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），乙腈-0.05%磷酸溶液（20∶80）为流动相，流速 1ml/min，检测波长 203 nm，进样
量10 μl，柱温30℃。

2.2 对照品溶液的制备[1] 精密称取人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品适量，加
甲醇溶解，制成每1 ml各含0.25 mg的混合溶液，即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取生脉散配方颗粒约2 g，精密称定，加30 ml水溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径 1.5 cm，长 15 cm），用 100 ml水洗脱，然
后用20%乙醇50 ml洗脱。

弃去水洗脱液、20%乙醇洗脱液，再用95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液80 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，稀释、定容至10 ml，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 方法学验证试验
2.4.1 专属性取缺人参的阴性对照品2 g，按“2.3”项下方法，制得阴性对照溶液。

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl，依次进样、测定。

供试品色谱图中，在与对照品色谱相应位置上有保留时间相同的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无色谱峰干扰（图1）。

2.4.2 线性范围分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、8、10 ml，加甲醇稀释、定容至10 ml，摇匀；分别精密吸取上述溶液各10 μl，依次注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值（Y）对进样量（X）进行线性回归，得人参皂苷
Rg1回归方程为：Y=213336X-896.72（r=0.9998），线性范围为 0.252～2.52 μg；人参皂苷Re的回归方程为：Y=198759X-1060.3（r=0.9995），线性范围为 0.249～2.49 μg。

2.4.3 精密度精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的色谱峰面积，计算其相对标准偏差（RSD）分别为1.21%和0.83%，表明测定方法的精密度良好。

2.4.4 稳定性于供试品溶液制备后 0、2、4、8、10、12 h，分别精密吸取10 μl 供试品溶液，进样，测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的色谱峰面积，计算其RSD分别为1.35%和1.07%，表明供试品溶液在配制后12 h内稳定。

2.4.5 重复性分别称取6份生脉散配方颗粒，按“2.3”项下方法制备供试液，依次进样，测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的色谱峰面积，计算其RSD分别为
1.27%、1.63%，表明测定方法重复性良好。

2.4.6 加样回收率取同一批生脉散配方颗粒6份，每份约0.5 g，精密称定，分别加入一定量的对照品溶液，按“2.3”项下方法制备供试液，测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的色谱峰面积，计算其含量及回收率，从表1数据可见，测定方法准确度高。

2.5 样品含量测定取3批样品，各2份，按“2.3”项下方法制备供试液，依次进样，测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的色谱峰面积，以外标法计算其含量，结果见表2。

本试验参考了《中国药典》（2015年版一部）生脉胶囊、人参叶的质量控制方法[1]，结合配方颗粒的剂形特点，研究生脉散配方颗粒含量测定方法。

前期对含量测定中的流动相进行了重点考察，比较了乙腈 -水（梯度洗脱）、乙腈 -0.1%磷酸溶液（22∶78）、乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）系统，最终确定以乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）为流动相，在此条件下，阴性对照无干扰，人参皂苷Rg1和人
参皂苷Re色谱峰分离较好。

配方颗粒在提取工艺方面，与传统汤剂基本一致，即以水为溶媒提取，以物理方法固液分离、浓缩、干燥、颗粒成型等工艺生产。

因此，配方颗粒中基本保留了处方中的水溶性成分。

在生脉散配方颗粒供试品溶液的制备过程中，运用D101大孔吸附树脂进行分离、纯化，可除去大部分极性较强的水溶性成分，减少HPLC测定时的干扰。

方法学验证实验结果表明，供试品溶液稳定性好；测定方法专属性强，精密度、重复性良好，准确度高。

因此，运用本实验建立的HPLC法同时测定生脉散配方颗粒中的人参Rg1和Re具有较强的可行性，可用于生脉散配方颗粒的质量控制。

【相关文献】
[1] 国家药典委员会.中国药典（2015年版一部）[S].北京:化学工业出版社,2015:9,795.。