色谱分析法原理课件

顶替色谱法(置换色谱法)
a
DE
流
DABCD
动 方
向
C
B D+ C
A C+ B
AB
A
顶替剂
b
D
C B
A
顶替色谱法 (置换色谱法)
• 优点:
• （1） 样品量大产率高、被分离样品在分离过程中会自行 浓缩。浓度比洗脱色谱高1—2数量级。柱载高50—100倍
• （2） 可以同时分离样品中的多个组分（与亲和色谱不同） • （3）被分离组分能在相当高的纯度的条件下获得高产率。 • （4）各组分分离界限较清晰，拖尾少，产量和回收率高。 • （5）产品浓度可控 • （6）用小分子顶替剂容易与生物分子分离， • （7）单位柱长固定相利用率高（和用于制备的超载洗脱
V0 =Vm 流动相(非滞留组分)保留值
W1/2 h
保留值
时间/
W
流动相体积
C
A
B
A
两个组分向前 移动的特征
1-1 迎头色谱法
a
ABCD 流
ABC
动 方
向
AB
A
b
A AR AR
ABR
ABR ABR BR
B
a
AB
CD
A
A B
B C
A
b
A
流出体积
1-2置换法(displacement method)
• 又称顶替法，当含三种组分的混合物样品注入色 谱柱后，各组分皆与固定相有强作用力，若使用 一般流动相无法将他们洗脱下来，为此可使用一 种比样品组分与固定相间作用力更强的置换剂 （或称顶替剂）作流动相，当它注入色谱柱后， 可迫使滞留在柱上的各个组分，依其与固定相作 用力的差别而依次洗脱下来，且各谱带皆为各个 组分的纯品。置换法现已在大规模制备色谱中获 广泛应用，在生物大分子纯品制备中取得良好的 效果
和迎头分析法相比） • （8）溶剂使用量少。分离时间和成本减少30%以上。
淋洗色谱法 (冲洗色谱法、洗脱色谱法)
a b
D
流
B
动 方
向
A+B
A
色谱法应用简述
一、色谱法在定量、定性分析与制备、生产中的应用 二．色谱法在理论研究、催化化工、萃取等领域的应用 1．无限稀释活度系数数据的测定及其在工程上的应用 • ①混合溶剂、②高压气液平衡系统 2．溶液理论及热数据的测定 • ①过量偏摩尔参数与过量偏摩尔热容 、②溶解热、生成热、
3. 在分析路径上，发生在两相之间的分配 平衡，由于各个组分在同样两相之间分 配平衡有差异，从而实现各组分的分离
4. 被分离的样品各个组分，在载体的搬运 下离开分析路径，进入检测器被检测出 来
5. 假如在分析路径上样品所受到的力场是 电场力，则各个组分在电场力作用下实 现分离，这就是电泳
ABCDE
D
第三章 色谱法分析原理
a
• 概述：
色谱法的发展历程
A
• 色谱分离分析操作过
B
程
C
• 几种色谱操作法
D
迎头色谱法、顶替色
E
谱法、洗脱色谱法
ABCDE A
色谱分离分析样品组分的过程
1. 样品在载体“搬运”下，通过分析路径
2. 在分析路径上，样品中的各个组分受到 某种“力场” 的作用（力场可能是温 度、压力、电压、光…产生可能引起分 离效应，也可能不引起分离效应）
反应热、③非电解质理论、④高聚物溶液理论 3．维里系数的研究与测定 4．纯物质性质的研究与测定 • ①蒸汽压、②蒸发焓、③沸点、④相变、⑤分子量、⑥分子
结构、⑦熵、粘度、折光系数等
进 样
流 动 相
进 样 口
分 离 柱
检
计
处控
理制
及
流动相
样品
响应
VR
V0
VR’
h1/2 h1/2
进样