医学免疫学-免疫学实验1
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
避免伤及血管；印片时避免印到肝脏上； • 瑞氏染液与蒸馏水等量，染液完全覆盖印迹，并防止干片； • 显微镜的使用。 1. 用品放入指定地点，注意个人防护。
【实验步骤】
Mouse handling and manual restraint 小鼠固定方法
Intraperitoneal injection 腹腔内注射
2. 实验过程中必须持严肃认真的态度，善待实验动物。 3. 仔细地观察并真实地记录实验结果，科学分析，得出恰当结论。 4. 独自认真完成实验报告，字迹清楚，语言简练，表格清晰，画图应
力求反映实物标本的原状。 – 切实遵守实验室规则。
实验一
Part I 吞噬细胞吞噬功能检测 Part II 免疫血清的制备与应用（一）（二）
1. 免疫血清的制备与应用：免疫注射、心脏采血。
值日
请排好值日生，清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜开关。
医学免疫学实验报告
班 级 2014级× 专业× 班
姓名
学号 实验室号 上课周次 上课时间 带教老师
4 4、7、12、14
周×下午
、、、
实验报告装订成册，以 实验室为单位于指定时 间交到21206（ 21207 、 21208）房间。
下次实验内容
凝集反应 直接凝集反应
ABO血型鉴定 沉淀反应
对流免疫电泳
免疫器官的组织结构观察
The End
Thanks For Your Attention
【实验步骤】
【实验步骤】
【实验结果】
1. 巨噬细胞的吞噬现象：油镜下可见大量巨噬细胞，胞浆 内数量不等的蓝色细菌。淀粉肉汤已经注射2~3天，游走 至肠管外的中性粒细胞因为寿命短多已死亡。
2. 计算：
吞噬百分率＝
吞噬有细菌的吞噬细胞 100个吞噬细胞
×100％
吞噬指数＝ 100个吞噬细胞中所吞噬的细菌总数 100
3. 滴加3～5滴瑞氏染液于印片上，15秒后加等量蒸馏水 ，混匀染色3min（一直保持湿润）。自来水冲洗，滤 纸吸干。
4. 显微镜下观察。 5. 交回实验器材，最后将小鼠，玻片弃掉。
【注意事项】
• 小鼠的抓法，拉颈处死手法，不能伤害动物； • 右侧腹腔注射易伤及肝脏；开腹时正中皮肤剪开，沿腹白线，
兔抗羊红细胞抗体（溶血素）制备方法
日期（天） 第1天
途径
源自文库
皮内
抗原
全血
剂量（mL） 0.5
第3天 皮内 全血 1.0
第5天 皮内 全血 1.5
第7天 皮内 全血 2.0
第12天 第15天
静脉
静脉
20%悬液 20%悬液
1.0
2.0
【实验步骤】
（二）心脏采血
1. 固定家兔，用碘酒、酒精消毒心前区皮肤。 2. 胸骨左缘外侧1-2cm左右、3-4肋间，（胸骨中
清中含有特异性抗体（抗羊红细胞抗体、溶血素）。
优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及 动物的应答能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、 时间间隔、有无佐剂等因素。
B细胞
流程
制备抗原
浆细胞 免疫动物
抗体（Ab、溶血素） ？
采血、分离血清
分装、保存
纯化、鉴定
【实验材料】
免疫学实验
潍坊医学院免疫学教研室
实验室规则
1.穿好隔离衣。
2.保持肃静和秩序，少说、多做、多想。
3.禁止饮食、吸烟，上课时关闭通讯工具。
4.用过的实验材料，放于指定地点，不得随意抛置。
5.注意节约实验试剂，爱护实验器材（显微镜的使用）。
6.易燃物品（如酒精等）不准接近火源。
7.实验结束后，将实验台整理清洁，值日同学打扫好室内
【实验结果】
红细胞 巨噬细胞
单核细胞
淋巴细胞 巨噬细胞吞噬现象（瑞氏染色，10×100）
Part II 免疫血清的制备与应用＊
【原理】
----免疫注射、心脏采血
将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间后，
动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含有特异性
抗体的血清称为免疫血清。
取羊红细胞免疫家兔一只，心脏采血，分离血清，血
卫生并检查水、电等开关是否关好，离开实验室要关好门
窗。
8.认真书写实验报告！
请养成良好的习惯
实验目的和要求
【目的】
1. 掌握免疫学的基本实验方法和操作技术。 2. 通过讨论和实验结果分析，培养科学思维方法，提高独立工作能力。
【要求】
1. 课前做好预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项等， 避免和减少发生错误。
大吞噬细胞：单核、巨噬细胞（长寿） 小吞噬细胞：中性粒细胞（短寿）
【实验材料】
• 动物：小白鼠。 • 试验器材：剪刀、镊子、注射器、解剖板、瑞氏染
液、载玻片、显微镜等。 1. 抗原：白葡菌菌液。
【实验步骤】
1. 取已注射过淀粉肉汤的小白鼠一只，取白葡菌菌液 0.5ml注入其左下腹腔，轻揉腹部。
2. 30min后，将小白鼠拉颈处死，固定，打开腹腔，用 玻片在暴露的肠管上印片，自然晾干。
----家兔皮内注射羊红细胞悬液 ----家兔心脏采血
【目的要求】
• 掌握免疫血清制备的基本原理，熟悉其基本 操作手法。
1. 掌握吞噬细胞吞噬功能检测的基本原理，熟 悉其基本操作手法。
Part I 吞噬细胞吞噬功能检测 【原理】
体内的吞噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，在趋化因 子的作用下可到达炎症部位，对细菌等异物进行吞噬和消化。
• 动物：家兔。 • 实验器材：剪刀、无菌试管、注射器、酒精棉球等。 1. 抗原：绵羊红细胞。
注射
绵羊血红细胞
【实验步骤】
（一）免疫注射 1.备皮：家兔背部剪毛。 2.消毒：碘酒棉球、酒精棉球。 3.抽取0.5～1.0mL绵羊红细胞悬液，在瓶内排出气 体。 •针头斜面向上，刺入皮内后平行进针使针头没入 ，推注0.05 ～ 0.1ml羊红细胞悬液。6～7点注射。
线中段略偏左处），选择心跳最明显处垂直进 针。 3. 注射部位正确时，血液会自动涌入针管。缓慢 抽出所需血量，体重2kg左右的家兔，一般每次 可采血4~5ml 。
注意事项
•取血部位要准确，不要划破家兔心脏，尽量不 令动物死亡； •见到回血再取血； 1.向试管中注射血液时要将针头取下。
实验报告
• 吞噬细胞吞噬功能检测的原理、步骤及镜下观察结果； （瑞氏染色 观察倍数）
【实验步骤】
Mouse handling and manual restraint 小鼠固定方法
Intraperitoneal injection 腹腔内注射
2. 实验过程中必须持严肃认真的态度，善待实验动物。 3. 仔细地观察并真实地记录实验结果，科学分析，得出恰当结论。 4. 独自认真完成实验报告，字迹清楚，语言简练，表格清晰，画图应
力求反映实物标本的原状。 – 切实遵守实验室规则。
实验一
Part I 吞噬细胞吞噬功能检测 Part II 免疫血清的制备与应用（一）（二）
1. 免疫血清的制备与应用：免疫注射、心脏采血。
值日
请排好值日生，清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜开关。
医学免疫学实验报告
班 级 2014级× 专业× 班
姓名
学号 实验室号 上课周次 上课时间 带教老师
4 4、7、12、14
周×下午
、、、
实验报告装订成册，以 实验室为单位于指定时 间交到21206（ 21207 、 21208）房间。
下次实验内容
凝集反应 直接凝集反应
ABO血型鉴定 沉淀反应
对流免疫电泳
免疫器官的组织结构观察
The End
Thanks For Your Attention
【实验步骤】
【实验步骤】
【实验结果】
1. 巨噬细胞的吞噬现象：油镜下可见大量巨噬细胞，胞浆 内数量不等的蓝色细菌。淀粉肉汤已经注射2~3天，游走 至肠管外的中性粒细胞因为寿命短多已死亡。
2. 计算：
吞噬百分率＝
吞噬有细菌的吞噬细胞 100个吞噬细胞
×100％
吞噬指数＝ 100个吞噬细胞中所吞噬的细菌总数 100
3. 滴加3～5滴瑞氏染液于印片上，15秒后加等量蒸馏水 ，混匀染色3min（一直保持湿润）。自来水冲洗，滤 纸吸干。
4. 显微镜下观察。 5. 交回实验器材，最后将小鼠，玻片弃掉。
【注意事项】
• 小鼠的抓法，拉颈处死手法，不能伤害动物； • 右侧腹腔注射易伤及肝脏；开腹时正中皮肤剪开，沿腹白线，
兔抗羊红细胞抗体（溶血素）制备方法
日期（天） 第1天
途径
源自文库
皮内
抗原
全血
剂量（mL） 0.5
第3天 皮内 全血 1.0
第5天 皮内 全血 1.5
第7天 皮内 全血 2.0
第12天 第15天
静脉
静脉
20%悬液 20%悬液
1.0
2.0
【实验步骤】
（二）心脏采血
1. 固定家兔，用碘酒、酒精消毒心前区皮肤。 2. 胸骨左缘外侧1-2cm左右、3-4肋间，（胸骨中
清中含有特异性抗体（抗羊红细胞抗体、溶血素）。
优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及 动物的应答能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、 时间间隔、有无佐剂等因素。
B细胞
流程
制备抗原
浆细胞 免疫动物
抗体（Ab、溶血素） ？
采血、分离血清
分装、保存
纯化、鉴定
【实验材料】
免疫学实验
潍坊医学院免疫学教研室
实验室规则
1.穿好隔离衣。
2.保持肃静和秩序，少说、多做、多想。
3.禁止饮食、吸烟，上课时关闭通讯工具。
4.用过的实验材料，放于指定地点，不得随意抛置。
5.注意节约实验试剂，爱护实验器材（显微镜的使用）。
6.易燃物品（如酒精等）不准接近火源。
7.实验结束后，将实验台整理清洁，值日同学打扫好室内
【实验结果】
红细胞 巨噬细胞
单核细胞
淋巴细胞 巨噬细胞吞噬现象（瑞氏染色，10×100）
Part II 免疫血清的制备与应用＊
【原理】
----免疫注射、心脏采血
将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间后，
动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含有特异性
抗体的血清称为免疫血清。
取羊红细胞免疫家兔一只，心脏采血，分离血清，血
卫生并检查水、电等开关是否关好，离开实验室要关好门
窗。
8.认真书写实验报告！
请养成良好的习惯
实验目的和要求
【目的】
1. 掌握免疫学的基本实验方法和操作技术。 2. 通过讨论和实验结果分析，培养科学思维方法，提高独立工作能力。
【要求】
1. 课前做好预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项等， 避免和减少发生错误。
大吞噬细胞：单核、巨噬细胞（长寿） 小吞噬细胞：中性粒细胞（短寿）
【实验材料】
• 动物：小白鼠。 • 试验器材：剪刀、镊子、注射器、解剖板、瑞氏染
液、载玻片、显微镜等。 1. 抗原：白葡菌菌液。
【实验步骤】
1. 取已注射过淀粉肉汤的小白鼠一只，取白葡菌菌液 0.5ml注入其左下腹腔，轻揉腹部。
2. 30min后，将小白鼠拉颈处死，固定，打开腹腔，用 玻片在暴露的肠管上印片，自然晾干。
----家兔皮内注射羊红细胞悬液 ----家兔心脏采血
【目的要求】
• 掌握免疫血清制备的基本原理，熟悉其基本 操作手法。
1. 掌握吞噬细胞吞噬功能检测的基本原理，熟 悉其基本操作手法。
Part I 吞噬细胞吞噬功能检测 【原理】
体内的吞噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，在趋化因 子的作用下可到达炎症部位，对细菌等异物进行吞噬和消化。
• 动物：家兔。 • 实验器材：剪刀、无菌试管、注射器、酒精棉球等。 1. 抗原：绵羊红细胞。
注射
绵羊血红细胞
【实验步骤】
（一）免疫注射 1.备皮：家兔背部剪毛。 2.消毒：碘酒棉球、酒精棉球。 3.抽取0.5～1.0mL绵羊红细胞悬液，在瓶内排出气 体。 •针头斜面向上，刺入皮内后平行进针使针头没入 ，推注0.05 ～ 0.1ml羊红细胞悬液。6～7点注射。
线中段略偏左处），选择心跳最明显处垂直进 针。 3. 注射部位正确时，血液会自动涌入针管。缓慢 抽出所需血量，体重2kg左右的家兔，一般每次 可采血4~5ml 。
注意事项
•取血部位要准确，不要划破家兔心脏，尽量不 令动物死亡； •见到回血再取血； 1.向试管中注射血液时要将针头取下。
实验报告
• 吞噬细胞吞噬功能检测的原理、步骤及镜下观察结果； （瑞氏染色 观察倍数）