纸层析法分离氨基酸16页PPT

主要试剂：
（1）展开剂 正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。 （2）氨基酸标准溶液 2 g·L-1水溶液。 （3）茚三酮 1 g·L-1乙醇溶液。 （4）氨基酸混合试液 将（2）配制的三种氨基酸等量混合。
实验操作：
1.在层析缸中装入展开剂，其高度约1.5~2.0cm；
2.准备滤纸：戴上手套，取层析滤纸一张，在纸的另一端距 边缘3.0cm处用铅笔画一直线，在此直线上每隔2cm作一记 号，为点样位置（即原点）；
3.点样：用毛细血管依次将异亮氨酸，谷氨酸，赖氨酸和混 合样品分别滴在四个位置，点样干后再点一次； 注意事项：每个点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm；
实验步骤 ——点 样
3.0cm
1234
异 亮赖 谷混 氨氨 氨合 酸酸 酸液 3.0cm
各点 φ≈2mm
实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题
赖氨酸
原点到层析斑点中 心的距离 原点到溶剂前沿的 距离
标准aaRf 混合aaRf
Байду номын сангаас
纸层析结果
异亮氨酸
谷氨酸
思考题： 1.纸层析法属于吸附层析还是分配层析，为什么？ 2.此三种氨基酸还能用什么层析方法进行分离，为什么？
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
纸层析法分离氨基酸
Rf：0~1， Rf值相差越大，分离效果越好。 本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、 赖氨酸和谷氨酸。
无色物质的纸色谱可用光谱法（紫外光照射）或 显色法鉴定，氨基酸纸色谱图谱常用茚三酮或吲哚 醌作为显色剂，本实验采用茚三酮作为显色剂。
显色机理：
O
O
C C
C
O + H2O
C
OH
C C OH （1）
O
O
O
R CH COOH + NH2
O
C
OH
C
C
OH
O
（2）
C
H
C
+ RCHO + NH3 + CO2
C
OH
O
O
C
H
C
+ NH3 +
C
OH
O
O
C
H
O
C
C
C
NC
O
C
O
O C
C C O
O + 2H 2O
(3)
仪器试剂：
主要仪器：
（1）玻璃层析筒 120mm×250mm(φ×h)。 （2）层析纸条 100mm×220mm 。 （3）毛细管 直径1mm左右。 （4）喷雾器 。 （5）直尺，铅笔，电吹风，一次性手套。
4.展层：将滤纸直立于层析缸中（点样的一端在下，展开 剂的液面需低于点样线1cm，滤纸勿与缸壁接触），盖好 层析缸盖，进行展层，待溶剂上升15~20cm时，取出滤纸， 用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干；
5.显色：用喷雾器均匀喷上水合茚三酮乙醇溶液，然后用 电吹风吹干，即可显出各层析斑点。
实验处理：
Thank you