食物中还原型维生素C的测定----2, 6-二氯酚靛酚滴定法
生物化学实验：维生素C定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
ʺ目的要求
学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法
ʺ实验原理
还原性Vc + 氧化性染料
氧化性Vc + 还原性染料
粉红色 (中性和碱性)
无色
•Vc放在滴定瓶中 •2,6-二氯酚靛酚放在微量滴定管中 •终点前, 2,6-二氯酚靛酚全部被还原为无色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
•终点时, 剩下有2,6-二氯酚靛酚.呈现粉红色
【取10ml 1%草酸作空白对照 【用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V2
V1 - V2相当于0.1mg抗坏血酸
四、 样品抗坏血酸液的滴定V3
【取滤液10ml(相当于样品Vc的1/10)置100ml锥形瓶中
【 用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V3。
ʺ试剂和器材
一、试剂
•2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 •1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 •标准抗坏血酸溶液（0.1mg/ml）: 准确称取50mg纯抗坏血
酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶 液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用 前配制。
ʺ操作方法
一、提取 •水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸
吸干表面水分
•称取5g蔬菜或水果，剪碎,加入少量(1-3ml) 2%草酸，用研 钵研磨至浆状，倒入至100ml的容量瓶中，往研钵中加入少 量多次2%草酸，把研磨后的样品完全转移，并定容至100ml 容量瓶中（研磨，转移，定容）。
五、2%草酸的滴定V4
食品中维生素C含量的测定实验
实验3 食品中维生素C含量的测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验原理维生素C又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2，6-二氯酚靛酚的钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红色，当其被还原时就变为无色，因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸完全被氧化后，稍多加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
二、试剂和器材偏磷酸醋酸溶液：取15g（用时研细）溶于40mL醋酸及20mL水的混合液中，然后用水稀释至500mL，过滤后储入试剂瓶中。
标准2，6-二氯酚靛酚溶液：取0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于700mL蒸馏水中（用力搅动），加入300mL磷酸缓冲液（预先配制9.078g/L KH2PO4-11.867g/LNa2HPO4·2H2O水溶液，用时以KH2PO4：Na2HPO4·2H2O=4：6的比率将其混合，pH值为6.9-7.0），翌日过滤，滤液储于棕色瓶中，临用时，以抗坏血酸溶液标定。
标准维生素C溶液：以少量偏磷酸醋酸溶液溶解0.1g维生素C于100mL容量瓶中，再以该液稀释至刻度。
2，6-二氯酚靛酚液的标定：在3个100mL锥形瓶中，各置5mL偏磷酸醋酸液，再各加2mL标准维生素C溶液，摇匀。
用上面所制的标准2，6-二氯酚靛酚液滴定，呈玫瑰红色保持30s不褪色为止。
记下所用2，6-二氯酚靛酚溶液体积平均值，再以同样方法做一空白实验，取7mL偏磷酸醋酸液加水若干毫升（相当于以上所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的低定量），仍用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定。
将第一次滴定的量减去空白实验的量，即为标准维生素的反应量，求出1mL 2，6-二氯酚靛酚对应于维生素C的质量（mg）。
研钵、容量瓶、剪刀、锥形瓶、微量滴定管三、实验步骤1、用自来水冲洗果蔬样品，再以蒸馏水清洗，用纱布或吸水纸吸干表面水分，然后称取25g，剪碎，在研钵中研呈浆状。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2, 6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C乂称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2, 6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈 红色。
抗坏血酸具有强还原性, 能使2, 6-二氯酚靛酚还原褪 色，其反应如图：当用2, 6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时， 滴下的2, 6-二氯酚靛酚被还原 成无色；当溶液中的抗坏血酸 全部被氧化成脱氢抗坏血酸 时，滴入的2, 6-一.氯酚靛酚立抗坏血酸 （蓝色） Cl o HO —CH CH 2O H CF 2.6•二氮（•红色）HO —CHO 一CIH —C脫氢抗坏血酸 还原型2,&二氨酚靛蜀（无色）即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1(实验材料：多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器：(1)天平(2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL, 10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸(5)锥形瓶(lOOmL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HC1)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黃色则不能用)(225mg,溶于25ml 4,HC1中，移入50ml容量瓶中，用蒸憎水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml中含抗坏血酸O.omg, o(3)0. 01M 2, 6,二氯酚靛酚准确称0. 25g氧化型2, 6,二氯酚靛酚、0. 21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸镭水中，稀释至1000ml,充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。
食物中还原型维生素C的测定-26-二氯酚靛酚滴定法
准确性和可靠性。
03
根据测定结果，评估食物中维生素C的含量是否符合
营养学标准。
误差分析
01
分析实验过程中可能产生的误差来源，如试剂质量、 操作方法、环境条件等。
02
评估不同误差来源对测定结果的影响程度。
03
提出减小误差的措施，提高测定方法的准
01
实验原理
26-二氯酚靛酚滴定法是一种常用的测定食物中还原型维生素C的方法。
滴定方法
取一定量的食物样品，加入适量的 26-二氯酚靛酚溶液，在一定温度下 保持一段时间，使还原型维生素C完 全还原26-二氯酚靛酚。
然后用标准氢氧化钠溶液滴定过量的 26-二氯酚靛酚，根据消耗的氢氧化钠 量计算出还原型维生素C的含量。
计算公式
根据滴定过程中消耗的氢氧化钠量，结合反应原理中的化学方程式，可以计算出食物中还原 型维生素C的含量。
04
结果分析
数据对比
1
将实验组与对照组的数据进行对比，观察维生素 C含量的差异。
2
将实验组在不同时间点的数据进行对比，分析维 生素C含量的变化趋势。
3
将实验组与标准值进行对比，判断测定结果的准 确性。
结果解读
01
根据滴定法测定的数据，计算食物中还原型维生素C
的含量。
02
分析测定结果与标准值之间的差异，判断测定方法的
数据记录
详细记录实验过程中所获得的所有数据，包括样品处理过程中提取液的体积、滴定操作中滴定的体积 等。
数据处理
根据实验数据计算还原型维生素C的含量。通过对比滴定终点时所需的26-二氯酚靛酚溶液体积与标定 时的体积，计算出提取液中还原型维生素C的浓度。再根据提取液的体积和样品质量，计算出食物中 还原型维生素C的含量。
食物中还原型维生素C的测定-2, 6-二氯酚靛酚滴定法课件
二、原理及步骤
1、实验原理
该染料在酸性溶液中 呈现红色，被还原后 为无色。在没有杂质 干扰时，一定量的食 物溶液还原标准染料 的量与其中的抗坏血酸 成正比。
2、实验步骤
用2, 6-二氯酚靛酚染料滴定标准维生素C溶液 （计算1ml二氯酚靛酚相当于多少mg抗坏血酸）
用2, 6-二氯酚靛酚染料滴定样品，测得其还原 型维生素C的浓度。
食物中还原型维生素C的测定 ----2, 6-二氯酚靛酚滴定法
一、目的
了解营养评价中实验室检查的意义 了解食物中还原型VitC测定方法
营养调查
目的: 了解不同生理状况、生活环境、劳动条件
下各种人群营养是否合理，针对具体情况对个 人（包括各种疾病患者）、家庭和集体按照合 理营养要求，提出改善措施以确保人群健康。
操作步骤
配制抗坏血酸应用液：用移液管取1ml 0.1%抗坏血酸标准液于50ml容 量瓶，加1%草酸至刻度，摇匀，留用。（1mg/50ml）
空白试验：在三角烧瓶中加入10ml 1%草酸，用二氯酚靛酚染料滴定 至粉红色，能保持15秒不褪色为终点。记录结果Cml。（两次）
标定二氯酚靛酚染料：在三角烧瓶中加入5ml抗坏血酸应用液、5ml 1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，能保持15秒不褪 色为终点。记录所用染料Aml (两次)。
5 C样
=
1ml染料
B-C
A: 滴定标准维生素C溶液(5ml)+草酸（5ml，1%）的染料量
C: 滴定空白组为草酸（10ml，1%）的染料量
B: 滴定稀释后的样品（5ml）+草酸（5ml，1%）的染料量
四、注意事项
测定过程要迅速，因还原型维生素C易被氧化，一般 不超过2min;
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验七_维生素C的定量测定-2_6-二氯酚靛酚法
实验七_维生素C的定量测定-2_6-二氯酚靛酚法一、实验目的2. 掌握 2,6-二氯酚靛酚法的实验操作方法。
3. 提高实验操作技能，培养实验习惯。
二、实验原理2,6-二氯酚靛酚法是一种常用于测定维生素 C 的定量分析方法，其原理是利用维生素 C 对氧化剂的还原能力，在酸性条件下，与氧化剂溶液中的氧气直接发生反应，生成2,6-二氯酚靛酚，这是一种带有天蓝色色素的化合物。
其反应方程式为：C6H8O6 + 2C12H6Cl2O2 → C12H5Cl2O2（indophenol）+ 2HCl在测定中，利用紫外-可见光谱（UV-Vis）分析法，通过测量反应产物（2，6-二氯酚靛酚）的吸收光谱进行维生素 C 的浓度计算。
维生素 C 含量的测定范围为 0.1-2.0mg/mL。
三、实验操作A. 试剂和仪器1. 空白维生素 C 溶液：将 0.1 g 维生素 C 溶于 100 mL 的 0.05 M 磷酸缓冲液（pH=2.0），称取 1 mL 溶液，加入 10 mL 的 0.05 M 磷酸缓冲液当作空白维生素 C 溶液。
3. 柠檬酸铁铵溶液：称取 1 g 柠檬酸铁铵，加入 100 mL 的去离子水溶解得到 1% 的柠檬酸铁铵溶液。
4. 改良液：将5.5 g 的硫酸钾加入 100 mL 的 85% 磷酸（V/V），搅拌至溶解，加入 1 g 2,6-二氯酚靛酚，摇匀后吸入液面，加入水至 1 L。
B. 实验步骤1. 分别取 6 个试管，标号：1，2，3 为空白对比组，4，5，6 为实验组。
2. 将实验组试管中加入不同浓度的维生素 C 标准溶液（10 μg/mL，20 μg/mL，30 μg/mL），各加 2 mL，加入 2 mL 的柠檬酸铁铵溶液。
3. 将实验组试管加到热浴肢中，调节温度至37℃。
4. 在 1 分钟内，向实验组试管中加入 0.5 mL 的改良液，同时加入 1 mL 的硫酸（V/V = 4:1）。
5. 摇匀实验组试管，放置于常温下 20 分钟，直至颜色稳定。
食物中还原型维生素C的测定----2, 6-二氯酚靛酚滴定法
三、实验步骤
样品前处理
1. 2. 3. 4.
蔬菜摘、洗、沥干； 小棵整体取样，大棵对称均分取样； 切条、片、块等状； 白萝卜 若样品颜色较深用白陶土脱色
生样 100g
2%草酸 100g 捣碎，匀浆 分别称5g 1% 草酸定容至50ml 过滤取上清 熟样沥干称重 2%草酸 等量
白 萝 卜
生样 100g 加入煮沸的水中 煮5min
标准维生素C 溶液 标定: 2, 6-二氯酚靛 酚染料
标定: 标准维生素C 溶液
3、用标定后的2, 6-二氯酚靛酚染料滴 定样品，测得其还原型维生素C的浓度
（1）操作
2, 6-二氯酚靛酚染液（0.2mg/ml）
无色变为淡红色
15s内不褪色
滴定
匀浆后的样品（5ml） 空白组为草酸（5ml，1%）
（2）样品中原型维生素C浓度
GB 6195—86 水果、蔬菜维生素C含 量测定法 (2,6－二氯酚靛酚滴定法) 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制 品中还原型抗坏血酸的测定（不含二 价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、 亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于
深色样品。
总结
• 优点：
简便快速，不需特殊仪器和试剂
• 缺点
• 非Vit C的专一反应，其它还原性物质对测定也有干扰。
举例含量丰富的食物。
蔬菜：辣椒、油菜、卷心菜、 菜花、芥菜； 水果：猕猴桃、酸枣、柑橘、 柠檬、柚子、草莓、沙棘。
结构与性质
抗坏血酸/维生素C
分子式：C6H8O6 相对分子质量：176 结构：
六个碳原子的α-酮基内酯 酸性多羟化合物
手性C 旋光性
CH OH 2 6 H C5 OH O
4 3 2 1
配制保存试剂时应注意的事项
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验四 维生素C的定量测定----2,6-二氯靛酚滴定法
思考题
1、要测得准确的维生素C值，实验过程 中应注意哪些操作步骤，为什么？ 2、在测定过程中，样品的草酸提取液为 什么不能暴露在光下？ 3、试简述维生素C的生理意义。
实验仪器
新鲜水果（苹果、猕猴桃、甜橙） 吸管 容量瓶（50ml） 滴定装置（酸式滴定管） 锥形瓶（50-100ml） 研钵 漏斗 纱布
实验试剂
标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶 于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为 0.1mg/ml，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
实验四
维生素C的定量测定----2， 6-二氯靛酚滴定法
一、原理
维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2， 6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原 后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品 中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全还 原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为 淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品 液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有 维生素C的量成正比。
实验步骤
1 提取
水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干 表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5 毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容 量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至 刻度，充分混匀后过滤。
实验步骤
2 滴定
1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：
量取标准抗坏血酸溶液1ml和9ml 1%草酸于50ml锥形瓶1 中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶2中作空白 对照，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现， 15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯 酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K）。 取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml（V3），用已标定 的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15 秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，记 录两次滴定所得的结果，求平均值V1。空白滴定方法同前 （V2），
维生素c测定
食品中维生素C 含量的测定——2,6-二氯靛酚滴定法测定还原型抗坏血酸一、目的与要求学会用滴定法测定还原型抗坏血酸。
二、实验原理还原型抗坏血酸能定量地还原染料2,6-二氯靛酚。
该染料在中性或碱性溶液中呈粉红色，滴定时还原型抗坏血酸将染料还原为无色，本身被氧化为脱氢抗坏血酸，终点时过量的染料在溶液中呈粉红色，在没有杂质干扰时，样品提取液所还原的标准染料量与样品中的还原型抗坏血酸量呈正比。
三、试剂材料及仪器（1）2%草酸溶液 溶解20g 草酸于1000mL 水中。
（2）1%草酸溶液（3）抗坏血酸标准溶液 称取20mg 分析纯抗坏血酸溶解于1%草酸溶液中，移入100mL 容量瓶，用1%草酸溶液稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。
使用时用1%草酸溶液稀释10倍。
此标准使用液相当0.2mg/mL 维生素C 。
也可用下法标定：吸取维生素C 使用液20.00mL 于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5mL 、1%淀粉溶液3滴，使用微量滴定管，用0.001mol/mL 碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色，计算公式如下：21088.0mg/mL V V ⨯=）抗坏血酸浓度（ 式中，1V 为消耗0.001mol/mL 碘酸钾标准溶液的量，mL ；2V 为吸取抗坏血酸使用液的量，mL ；0.088为1mL0.001mol/mL 碘酸钾标准溶液相当于0.088mg 抗坏血酸。
(4)2,6-二氯靛酚钠溶液 称取2,6-二氯靛酚钠50mg ，溶解并稀释至250mL ，此液应贮于棕色瓶中并冷藏，用时依下法标定：吸取20.00mL 已知浓度的抗坏血酸标准溶液于锥形瓶中，用2,6-二氯靛酚钠溶液滴定至溶液呈粉红色，15s 不褪色为滴定终点，计算染料溶液对抗坏血酸的滴定度T 。
21V V c T ⨯=式中，c 为抗坏血酸的浓度，mg/mL ；1V 为吸取抗坏血酸的体积，mL ；2V 为消耗染料溶液的体积，mL 。
（5）0.100mol/mL 碘酸钾溶液 精确称取干燥的碘酸钾0.3567g ，用水溶液并定容于100mL 容量瓶，混匀。
食物中还原型维生素C的测定26二氯酚靛酚滴定法
随着人们对健康饮食的关注度不断提高，对食物中维生素C含量的测定需求也日益增长。因此，建立一种准确、 可靠的测定方法对于保障食品安全和满足消费者需求具有重要意义。
维生素C的重要性
抗氧化作用
促进胶原蛋白合成
维生素C是一种强大的抗氧化剂，能 够清除体内的自由基，减少氧化应激 反应，有助于预防慢性疾病和衰老。
食物中还原型维生素c的测定 26二氯酚靛酚滴定法
• 引言 • 2，6-二氯酚靛酚滴定法简介 • 实验材料和设备 • 实验过程 • 结果与讨论 • 结论 • 参考文献
01
引言
目的和背景
目的
维生素C是人体必需的维生素之一，具有抗氧化、增强免疫力等多种生理功能。测定食物中还原型维生素C的含量 对于了解食品的营养价值、指导膳食搭配以及评估食品加工过程中维生素C的损失情况具有重要意义。
根据滴定数据和已知的滴定常数，计算出 食物中还原型维生素C的含量。
注意事项
样品处理时需注意去除杂质和干扰物质，以免影响测定结果的准确性。
滴定时需注意控制滴定速度和终点判断的准确性，避免误差的产生。
2，6-二氯酚靛酚滴定法适用于大多数食物中还原型维生素C的测定，但对于某些特 殊食物或含有大量干扰物质的食物，可能需要采用其他测定方法。
结果报告
将实验结果整理成报告形式，包括实验目的、实验原理、实验步骤、 实验数据和结论等部分。
05
结果与讨论
结果分析
准确度
01
通过对比已知浓度的标准品，测定结果的相对误差在可接受范
围内，表明该方法具有较高的准确度。
精密度
02
对同一份样品进行多次重复测定，测定结果的相对标准偏差较
小，表明该方法具有较高的精密度。
[精品]2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
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[精品]2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C维生素C，也被称为抗坏血酸，是人体所需的一种重要营养物质，具有抗氧化、促进铁吸收等重要作用。
由于人体无法自行合成维生素C，因此需要从食物中摄取。
然而，维生素C很容易被氧化破坏，因此在分析检测过程中需要选择一种敏感、精确、简便的方法对维生素C进行定量分析。
2,6-二氯酚靛酚滴定法是一种广泛应用于维生素C分析的方法之一。
下面将介绍这种方法的原理和操作步骤。
原理：2,6-二氯酚靛酚是一种指示剂，可以在酸性条件下呈现红色，而在还原剂作用下会褪色。
维生素C是一种还原剂，可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原物。
因此，在维生素C存在的条件下，将2,6-二氯酚靛酚逐滴加入已知浓度的维生素C溶液中，当维生素C 耗尽时，2,6-二氯酚靛酚不再被还原，呈现出由红色变为无色的转变。
在此过程中记录2,6-二氯酚靛酚的加入量即可计算维生素C的浓度。
操作步骤：1. 器材准备称取约100mg的2,6-二氯酚靛酚，加入100ml的95%乙醇中，摇匀即可得到表现绿色的溶液。
同时准备0.1mol/L的氢氧化钠溶液、2%的硫酸溶液，以及待测样品。
a. 将待测样品取约2g加入研钵中，加入10ml的2%的硫酸溶液，反复挥发至浓缩，使样品保持在干燥状态。
b. 加入20ml的去离子水，研钵放入热水浴中，加热溶解。
c. 实验设一个平衡水平标志线，定量转移10ml溶液到较大的滴定瓶中，加入几滴2,6-二氯酚靛酚溶液，搅拌均匀。
d. 向滴定瓶中逐滴加入氢氧化钠溶液至溶液呈深黄色，为初始色。
e. 开始滴定，滴定钠氢氧化溶液至溶液呈现红色，即为维生素C耗尽时，记录钠氢氧化溶液的滴定量。
f. 重复操作并求得平均数，计算维生素C浓度。
注意事项：1. 滴定瓶上方要留有足够的空间，以免在滴定时水溅出来。
2. 滴定时要缓慢滴加氢氧化钠溶液，以避免过量反应。
3. 滴定时要注意加入2,6-二氯酚靛酚溶液后，溶液会变为紫色，此时需要加入氢氧化钠溶液搅拌均匀使其还原为黄色，然后再开始滴定。
维生素C的测定——2,6一二氯靛酚滴定法
实验六、维生素C的测定——2，6一二氯靛酚滴定法（1）原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6一二氯靛酚。
该染料在酸性溶液中是粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。
（2）试剂①1%草酸溶液（m/V）②2%草酸溶液（m/V）③抗坏血酸标准溶液准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，置冰箱中保存。
用时取出5ml，置于50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，配成0.02mg／ml 的标准使用液。
标定吸取标准使用液 5ml于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液 0.5ml、1%淀粉溶液 3滴，以 0.001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。
计算 c＝088.021VV式中 c——抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml；V1—一滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，ml；V2—一滴定时所取抗坏血酸的体积，ml；0.088—一1ml 0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/ml④2，6-二氯靛酚溶液称取 2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml 含有 52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。
次日过滤于 250ml棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。
每星期标定一次。
标定取 5ml已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%草酸溶液 5rnl，摇匀，用 2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，在15s不褪色为终点。
计算：T＝21V Vc式中 T—一每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/ml；c—一抗坏血酸的浓度，mg/ml；V1－一抗坏血酸标准溶液的体积，ml；V2——消耗2，6-二氯靛酚的体积，ml。
⑤ 0.000167mol／L碘酸钾标准溶液精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100ml，取出 lml，用水稀释至100ml，此溶液 lml相当于抗坏血酸 0.088mg。
维生素C的测定(2-6-二氯酚靛酚滴定法
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法一、测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO —C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。
在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。
根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀；托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。
2.原料及试剂本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。
(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。
(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1(仪器(1)天平(2)组织捣碎机(3)微量滴定管(5ml)(4)容量瓶(50ml)(5)刻度吸管(5ml，10ml)(6)锥形瓶(100ml)2(试剂(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
水果、蔬菜维生素C含量测定法
水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法）【标准名称】水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法）【标准号】GB 6195-86 【标准文件】GB 6195─86GB 6195—86水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法）（经济作物-瓜果、蔬菜种植与产品）1 适用范围本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于深色样品。
2 测定原理染料2，6-二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。
用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。
3 仪器设备 a.高速组织捣碎机：8000～12000r/min。
b.分析天平。
c.滴定管：25ml、10ml。
d.容量瓶：100ml。
e.锥形瓶：100ml、50ml。
f.吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。
g.烧杯：250ml、50ml。
h.漏斗。
4 试剂（凡未加说明者均为分析纯）4.1 浸提剂 4.1.1 偏磷酸：2％溶液（W/V）* *偏磷酸不稳定，切勿加热。
4.1.2 草酸：2％溶液（W/V）。
4.2 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸**，溶于浸提剂中并稀至100ml。
现配现用。
**一般抗坏血酸纯度为99.5％以上，可不标定。
如试剂发黄，则弃去不用用。
若要检查其纯度，可按附录B方法标定。
4.3 2，6-二氯靛酚（2，6-二氯靛酚吲哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中，然后称取2，6-二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。
实验七-维生素C的定量测定-2-6-二氯酚靛酚法
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8
1、为了测得准确的维生素C浓度，实验过 程中应注意哪些操作步骤？为什么？
（1）在操作过程中某些步骤一定要快，避免Vc的氧化，因 为Vc具有还原性，还要向样品中加入草酸溶液，保护Vc；
(2)对于Vc标准溶液要现用现配，尽量精确，避免Vc氧化， 避免因为标准溶液的误差造成的误差； (3) 整个操作过程 要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超 过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样 品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提 取液稀释度。
OC
C OH
O
C OH
+O
HO C
HO C H
C H 2O H
OC
Cl
N
OH
Cl
2,6-二氯酚靛酚 氧化型(酸性溶液中,呈玫瑰色)
CO CO HO C
O + HO
HO C H
C H 2O H
Cl
NH
OH
Cl
2,6-二氯酚靛酚 还原型(无色)
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4
三、器材仪器和主要试剂
偏磷酸:2%溶液(W/V)* ,
用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸 性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色, 当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则 表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗 坏血酸的含量。
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3
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液 呈淡红色，即为终点。
VC 还原型
脱氢VC 氧化型
3、滴定:
1）样品滴定：取三角烧瓶两只，各加脱色滤液10ml，用2,6-二氯酚靛酚钠(蓝 色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下二份样品滴定所用的染 液毫升数（滴定过程宜迅速，不超过2分钟），取其平均值----VA；
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（V1 － V2）× T
m
× 100
• V1：样品滴定时所用染料量（ml） • V2：空白滴定时所用染料量（ml） • m：滴定时所用样品的量（g）
四、实验结果
• • • 1. 样品Vit C的浓度 2. 烹调前后Vit C的损失率 生熟比=
Vit C 损失率
五、注意事项
还原型和氧化型维生素C有一定的生理作用， 水解为2,3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。 总抗坏血酸包括还原型、氧化型抗坏血酸和2,3-二酮古乐糖酸。
一、目的
• 加深对2，6-二氯酚靛酚滴定法测定果 蔬中维生素C的原理的理解，掌握其操 作要点，熟练基本操作技术。
•
了解烹调加工对维生素C的影响。
二、实验原理
（1）操作
2, 6-二氯酚靛酚染液（0.2mg/ml）
无色变为淡红色 15s内不褪色
滴定
标准维生素C溶液(5ml，C标) 草酸（5ml，1%）
（2）1ml染料相当于还原型维生素C的mg
T=
C标（mg/ml）× V标（ml） V染料（ml）
T = 0.089
步骤一 标准KIO3溶液
步骤二
步骤三
2, 6-二氯酚 靛酚染料 标定: 样品
（2）操作
KIO3（0.000167M）
白色变为淡蓝色 滴定
维生素C标准品溶液（5ml，0.02mg/ml） 草酸（5ml，1%） KI（0.5ml，6%） 淀粉（3滴，1%）(KIO3) ×V(KIO3) ×M(VitC)
W标 （mg/ml）=
n×M =
V(Vit C)
滴 定
步骤一
标准KIO3溶液
步骤二
步骤三
标定:
标准维生素 C溶液
标准维生素C 溶液 标定: 2, 6-二氯酚靛 酚染料
2, 6-二氯酚 靛酚染料 标定: 样品
1、标准KIO3溶液标定标准维生素C溶液
（1）原理
• KIO3 + 3H2C2O4 + 5KI = 3I2 + 3K2C2O4
• j
n(KIO3):n(VC)=1:3 n(VC)=3n(KIO3)
标准维生素C 溶液 标定: 2, 6-二氯酚靛 酚染料
标定: 标准维生素C 溶液
3、用标定后的2, 6-二氯酚靛酚染料滴 定样品，测得其还原型维生素C的浓度
（1）操作
2, 6-二氯酚靛酚染液（0.2mg/ml）
无色变为淡红色
15s内不褪色
滴定
匀浆后的样品（5ml） 空白组为草酸（5ml，1%）
（2）样品中原型维生素C浓度
消耗0.000167M KIO3的ml数 × 0.088
W标 （mg/ml）= 所取维生素C的ml数
步骤一
步骤二
标准维生素C 溶液 标定: 2, 6-二氯酚靛 酚染料
步骤三
标准KIO3溶液
2, 6-二氯酚 靛酚染料 标定: 样品
标定: 标准维生素C 溶液
2、标准维生素C溶液标定2, 6-二氯酚靛酚染料
配制保存试剂时应注意的事项
① 6%KI溶液:现用现配、棕色瓶盛装；
② KIO3溶液：短期、棕色瓶、冷藏；
③ 维生素C标准品粉末：棕色干燥皿内保存； ④ 维生素C标准品溶液：短期、棕色瓶、冷藏； ⑤ 2, 6-二氯酚靛酚溶液：50mg溶解于NaHCO3(0.2g/ml) 热溶液中，冷却后4℃过夜，过滤后用蒸馏水定容 250ml，然后短期、棕色瓶、冷藏； ⑥ 1%的淀粉：先加少量凉水搅拌成糊状，再加沸水溶解， 短期冷藏。
分子式：C6H8O6 相对分子质量：176 结构：
六个碳原子的α-酮基内酯 酸性多羟化合物
手性C 旋光性
CH OH 2 6 H C5 OH O
4 3 2 1
水解性
O
还原性
性质：
还原性 不稳定性
碱性环境、加热或铜铁共存
HO
弱酸性
OH
弱酸性条件下稳定——草酸
测定还原型维生素C 可粗略了解食品中维 生素C浓度
1. 因要计算烹调后原型维生素C的损失率，故要计算烹 调前后食物的生熟比；故要记录食物烹调前后的质量； 2. 测定过程要迅速，因还原型维生素C易被氧化，一般 不超过2min; 3. 样品中可能有其他杂质也能还原2, 6-二氯酚靛酚，但 还原速度比还原型维生素C慢，故滴定时以15s内粉红 色不褪去为止； 4. 样品匀浆稀释定容及脱色时若产生泡沫可用异戊醇除 沫； 5. 白陶土应选择脱色力强且不吸附维生素C的品种，在 实验前一天置于烘箱中105℃ 2h，并立即放入干燥皿 中存放； 6. 样品匀浆稀释液过滤时若存在困难，可离心后再取上 清测定；
• 2，4-二硝基苯肼法
• 原理：样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼 作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。
• HPLC法——目前HPLC应该是比较好的，但是对
操作者的技能以及实验室经济能力有要求。
• 碘量法 • 电位滴定法等
三、实验步骤
样品前处理
1. 2. 3. 4.
蔬菜摘、洗、沥干； 小棵整体取样，大棵对称均分取样； 切条、片、块等状； 白萝卜 若样品颜色较深用白陶土脱色
生样 100g
2%草酸 100g 捣碎，匀浆 分别称5g 1% 草酸定容至50ml 过滤取上清 熟样沥干称重 2%草酸 等量
白 萝 卜
生样 100g 加入煮沸的水中 煮5min
但由于Vit C的氧化速度远比干扰物质的快，故快速滴定可 减少干扰物质的影响。
•
• •
2，6-二氯靛酚滴定液不够稳定，贮存时易缓缓分解，需 经常标定，贮存液不宜超过一周；
色素对测定干扰大； 测定的只是含量较高的还原性维生素C，不是总维生素C。
其他检测方法
• 荧光法
• 原理：样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（ OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉，其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件 下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
食物中还原型维生素C的测定
----2, 6-二氯酚靛酚滴定法 营养学系 李忠霞
理论知识
• 生理作用 • 缺乏和过量 • 需要量 RNI;UL • 食物来源
举例含量丰富的食物。
蔬菜：辣椒、油菜、卷心菜、 菜花、芥菜； 水果：猕猴桃、酸枣、柑橘、 柠檬、柚子、草莓、沙棘。
结构与性质
抗坏血酸/维生素C
GB 6195—86 水果、蔬菜维生素C含 量测定法 (2,6－二氯酚靛酚滴定法) 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制 品中还原型抗坏血酸的测定（不含二 价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、 亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于
深色样品。
总结
• 优点：
简便快速，不需特殊仪器和试剂
• 缺点
• 非Vit C的专一反应，其它还原性物质对测定也有干扰。
—2,6 二氯酚靛酚滴定法
• 染料2，6-二氯酚靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取 决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无 色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色 ，在酸性介质中呈浅红色。 • 用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出 液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达 滴定 终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色。 • 在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。所以可 以由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。