植物组培快繁程序
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植物组培快繁程序
（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。
注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，
且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。
植物组培快繁程序
一、供体植株的培养与取材
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
植物组培快繁程序
1、外植体的来源
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。
植物组培快繁程序
植自 株然
环 境 生 长
植物组培快繁程序
温室控制条件下生长植株
植物组培快繁程序
已离体培养植株
植物组培快繁程序
在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
植物组培快繁程序
⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。
⑶控制湿度 给供体植株浇水时应从
根部给水，避免从上部浇水，以免上
部形成易于病原侵染的湿度环境；尽
可能降低温室湿度；取材前尽可能保
持植株干爽。
植物组培快繁程序
温度
1）大多数植物23-32℃，一 般控制在25±2ºC。低于 15C或高于35C，对生长 都是不利的。
培养步骤
初代培养 继代培养 生根培养
植物组培快繁程序
（1）初代培养
目 的：获得无菌材料和无性繁殖系。
无性繁殖系：是指由一个外植体继代增殖，繁殖出 的具有相同遗传物质的植株群体。包括：芽丛、不 定芽、胚状体、原球茎等。
培养基：诱导或分化培养基。
培养基中CTK多，IAA少。
类 型（根据发育方向）：
丛生芽增殖型
植物组培快繁程序
3、外植体的接种
（1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或 解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成 0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。 微茎尖要剥成只含l—2片幼叶的茎尖大小等。在 接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着， 避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并 将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。
植物组培快繁程序
某些多年生植物或特殊材料，必须取 自自然生长的植物，就需要尽可能避免 使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中 的植物。对于培养过程中可能出现内生 菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
植物组培快繁程序
2、供体植株的管理 取自室外的外植体材料，供体植株 的管理十分重要，这与外植体培养时的 污染率密切相关。植株管理中应注意： ⑴避免昆虫危害 许多昆虫如蚜虫、 螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒 介，会引起植物组织的潜在感染。
器官发生型
胚状体发生型
原球茎发生型
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体 外 植
外植体成苗途径
★
根、芽
愈伤组织
芽
根
苗
根
芽
试
胚状体 原球茎 根、芽
管
根、芽
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类型 丛生芽增殖型 器官发生型 胚状体发生型
原球茎型 球茎芽型
块茎型 鳞茎型 孢子型 根茎型 微枝扦插型
方式
事例
腋芽萌发，以芽增殖芽，扩大繁殖系数
甘蔗、香蕉、香石竹、 丝石竹
植物组培快繁程序
生根其它方法
◇延长在增殖培养时间 ◇降低增殖倍率，减少CTK用量 ◇对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中 直接生根 ◇胚状体发育成小苗不经生根阶段，但需 壮苗生根
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（4）培养条件
接种只是完成了离体培养的第一 步，植物离体培养和栽培植物一样， 生长过程中也受到各种环境因素的 影响。培养条件是离体培养能否成 功的关键。在培养基条件适宜的基 础上，影响试管苗生长的主要因素
（4）外植体放入超净工作台内，置 70-75%酒精中5-60 秒，0.1％氯化汞610分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15 分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌时 需进行搅动。
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常用灭菌药剂的使用和效果
灭菌剂
次氯酸钠 次氯酸钙 漂白粉 氯化汞 酒精 过氧化氢 溴水 硝酸银 抗菌素
有光照、温度、湿度、氧气。
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光照
1）光强 ★影响外植体细胞的增殖、
组织和器官的分化。一般 培养室的光照强度要求 1000～5000lx。
★愈伤组织的诱导有的在光照下有促进 作用；光照强，幼苗生长健壮；光照弱， 幼苗生长弱小，容易徒长。
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2）光质
★不同波长的光对细胞的分裂和器官的 分化有影响。
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3、材料取材
⑴材料选择 培养材料应选择有代表性的主要植 物、选择性状优良的种质或特殊的基因 型。 快速繁殖时应在植株生长的最适时 期取材，如花药培养应在花粉发育到单 核期取材。
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
⑵取材 从生长健壮的无病虫害的植株上选取
发育正常的器官和组织。最好采用茎尖 ，后代性状较稳定，携带细菌较少。
具分裂能力的细胞 分裂
愈伤组织 继代
愈伤组织
诱导期 分裂期 分化期
植物组培快繁程序
愈伤组织诱导
◆ 双子叶植物>单子叶植物和裸子植物 ◆ 幼年细胞和组织>成年细胞和组织 ◆ 二倍体细胞>单倍体细胞 ◆ 根据培养目的选取外植体
植物组培快繁程序
愈伤组织诱导
◆ 外植体大小一般为0.5cm的圆柱形或 方形块 ◆ 添加植调剂和天然提取物利于诱导 和维持 ◆ 生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或 白色或浅绿色或绿色，老化的多为黄色 或褐色
使用浓度（%）
9—10 2
饱和浓度 0.1—1 70—75 10—12
1—2ห้องสมุดไป่ตู้1
4—50mg/L
清除的难易 消毒时间 效 果
易 易 易 较难 易 最易 易 较难 中
5—30 5—30 5—30 2—10 0.2—2 5—15 2—10 5—30 30—60
很好 很好 很好 最好
好 好 很好 好 较好
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三、培养
1、培养含义
指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件) 里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
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2、培养方法
(1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材
料的方法。是现在最常用的方法。虽然 该方法设备简单，易行，但养分分布不 均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒 现象发生。 (2)液体培养法
体细胞胚状体发生型Ⅱ
体 外
植
器官
游离单细胞
小孢子
愈伤组织
体苗 胚试 状管
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胚状体形成植株的特征：
1.具两极性 2.胚状体的维管组织与外植体的维管 组织无解剖结构上的联系 3.胚状体的维管组织的分布是独立的 “Y”形 4.数量多，速度快，结构完整，成苗率 高
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原球茎发生型
形成的茎梢节长， 直立向上呈小灌木 丛状
代继
无愈伤组织产生
茎段培养 继代扩繁
试管苗
生根培养
获得较多嫩茎梢
植物组培快繁程序
器官发生型Ⅰ
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器官发生型Ⅱ
体 外 脱分化
植
①
愈伤组织
代初 代继
分化
②
试管苗
芽、芽丛
切割芽丛 继代培养 生根培养 大量芽丛
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愈伤组织培养
已分化细胞
脱分化
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2、表面灭菌
（1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、 口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清 洗干净，操作前再用70%酒精或消毒 剂擦洗双手。
（2）操作期间双手和台面常用70% 酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用 前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启 风机。
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（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊 子）可放入70-75%酒精中，使用时需 火焰灼烧灭菌，冷却后使用。
选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间 。胚胎培养或脱毒在0.5cm以下。材料 太大易污染，材料太小难于成活。
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二、外植体的灭菌与接种
1、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去
掉不需要部分，将准备使用的植物材 料（外植体）在流水中冲洗20-60分 钟，备用。如特别不洁的外植体，可 先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟 ，再用流水冲洗干净。
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
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（3）壮苗和生根培养
◆壮苗 ◆生根培养基：1／2或1／4MS基本培养基； 不加或少加CTK，适量添加NAA；糖浓度11.5%。 ◆培养条件：增加光强，达3000-10000lx。
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◆生根方法与途径
①新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h； ②在含IAA类培养基中培养4－6d； ③移入含活性碳的生根培养基培养。 ④生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按① ⑤其它方法
◆添加植调剂诱导分裂效果好。 ◆合成代谢迅速。
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分裂期
特征： 细胞分裂快，结构 疏松，缺少有组织 的结构，颜色浅而 透明。
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分化期
特征： 形成瘤状结构的外表 和内部分化；出现多 种类型的细胞。
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体细胞胚状体发生型Ⅰ
石龙芮下胚轴 培养产生胚状 体过程
植物组培快繁程序
茎
等
用成熟或未成熟的孢子进行培养
地钱、狼尾蕨等
蕨类具有横向的茎及直立的短根茎，为 肾蕨、裂叶肾蕨、波
组培的最佳外值体
士顿蕨等
带芽的小插条在试管内进行无菌扦插 植物葡组萄培快、繁杨程序树
丛生芽增殖型Ⅰ
顶芽 腋芽
植物组培快繁程序
丛生芽增殖型Ⅱ
顶芽 代初 侧 芽
CTK刺激
带芽的 茎切段
接种培养
微型扦插
通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗 烟草、油菜等
从愈伤组织或直接从子叶、下胚轴和花 甘蔗、胡萝卜、石刁
药培养中产生
柏等
由茎尖或腋芽产生原球茎放入培养基中 发育成小植株
兰花
叶一柄端表出面芽产一生端圆出球根形小突起（球茎芽），观叶海棠
叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分 化出芽和根
花叶芋
鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞 百合、郁金香、贝母
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脱分化因植物种类、器官及生 理状况有大差异： ◆禾谷类植物脱分化较难。 ◆花器脱分化较易；茎叶难。 ◆细嫩组织脱分化较易；成熟组织较难。
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诱导期
◆诱导期长短与植物种类、生理状态有关。 ◆诱导期长短与环境因素有关。
母株生长在弱光下的外植体易于诱导，分裂 频率高。 增加O2和迅速释放CO2利于细胞分裂。
第三章 植物组培快繁程序
植物快速繁殖就 是应用组织培养技术, 快速繁殖名优特新品 物，使其在较短时间 内繁衍较多的植株。 快繁是当前植物细胞 组织培养中应用最广 泛，又最有效的方法 之一。
植物组培快繁程序
主要内容
一、供体植株的培养与取材 二、外植体的灭菌与接种 三、培养 四、驯化移栽 五、组培快繁计划安排与实施
原球茎：缩短的、呈珠粒状 的、由胚性细胞组成的、类 似嫩茎的器官。
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思考题：
1.初代培养时外植体发育途径有几条？ 2.正常的愈伤组织一般为何种颜色？其 诱导有何特点？
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（2）继代培养
目的：扩繁无根苗（生产上边扩繁边生根）。 扩繁方法：以几何级数增加，可切割茎 段，分离芽丛、胚状体、原球茎。 培养基：基本培养基 或分化培养基 实质：增殖培养物。
如：①红光促进杨树愈伤组织的生长， 蓝光阻碍其生长。
②白光促进小花天竺葵愈伤组织 的生长，蓝光则无作用。
植物组培快繁程序
3）光照时间
根据植物生物学特性决定； 光照长短对试管内花的形成是个重要影响因 素，一般给予周期性光照比较好。多数植物 8-10小时黑暗为宜。光周期长短因植物种类 而异。在胡萝卜组织培养中随着日照长度的 增加，而促进生长。
即用不加固化剂的液体培养基培养 植物材料的方法。由于液体中氧气含量 较少，所以通常需要通过搅动或振动培 养液的方法以确保氧气的供给，采用往 复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速 度一般为50～100r/min，这种定期浸没 的方法，既能使培养基均一，又能保证 氧气的供给。
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3、培养步骤
（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。
注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，
且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。
植物组培快繁程序
一、供体植株的培养与取材
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
植物组培快繁程序
1、外植体的来源
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。
植物组培快繁程序
植自 株然
环 境 生 长
植物组培快繁程序
温室控制条件下生长植株
植物组培快繁程序
已离体培养植株
植物组培快繁程序
在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
植物组培快繁程序
⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。
⑶控制湿度 给供体植株浇水时应从
根部给水，避免从上部浇水，以免上
部形成易于病原侵染的湿度环境；尽
可能降低温室湿度；取材前尽可能保
持植株干爽。
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温度
1）大多数植物23-32℃，一 般控制在25±2ºC。低于 15C或高于35C，对生长 都是不利的。
培养步骤
初代培养 继代培养 生根培养
植物组培快繁程序
（1）初代培养
目 的：获得无菌材料和无性繁殖系。
无性繁殖系：是指由一个外植体继代增殖，繁殖出 的具有相同遗传物质的植株群体。包括：芽丛、不 定芽、胚状体、原球茎等。
培养基：诱导或分化培养基。
培养基中CTK多，IAA少。
类 型（根据发育方向）：
丛生芽增殖型
植物组培快繁程序
3、外植体的接种
（1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或 解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成 0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。 微茎尖要剥成只含l—2片幼叶的茎尖大小等。在 接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着， 避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并 将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。
植物组培快繁程序
某些多年生植物或特殊材料，必须取 自自然生长的植物，就需要尽可能避免 使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中 的植物。对于培养过程中可能出现内生 菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
植物组培快繁程序
2、供体植株的管理 取自室外的外植体材料，供体植株 的管理十分重要，这与外植体培养时的 污染率密切相关。植株管理中应注意： ⑴避免昆虫危害 许多昆虫如蚜虫、 螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒 介，会引起植物组织的潜在感染。
器官发生型
胚状体发生型
原球茎发生型
植物组培快繁程序
体 外 植
外植体成苗途径
★
根、芽
愈伤组织
芽
根
苗
根
芽
试
胚状体 原球茎 根、芽
管
根、芽
植物组培快繁程序
类型 丛生芽增殖型 器官发生型 胚状体发生型
原球茎型 球茎芽型
块茎型 鳞茎型 孢子型 根茎型 微枝扦插型
方式
事例
腋芽萌发，以芽增殖芽，扩大繁殖系数
甘蔗、香蕉、香石竹、 丝石竹
植物组培快繁程序
生根其它方法
◇延长在增殖培养时间 ◇降低增殖倍率，减少CTK用量 ◇对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中 直接生根 ◇胚状体发育成小苗不经生根阶段，但需 壮苗生根
植物组培快繁程序
（4）培养条件
接种只是完成了离体培养的第一 步，植物离体培养和栽培植物一样， 生长过程中也受到各种环境因素的 影响。培养条件是离体培养能否成 功的关键。在培养基条件适宜的基 础上，影响试管苗生长的主要因素
（4）外植体放入超净工作台内，置 70-75%酒精中5-60 秒，0.1％氯化汞610分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15 分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌时 需进行搅动。
植物组培快繁程序
常用灭菌药剂的使用和效果
灭菌剂
次氯酸钠 次氯酸钙 漂白粉 氯化汞 酒精 过氧化氢 溴水 硝酸银 抗菌素
有光照、温度、湿度、氧气。
植物组培快繁程序
光照
1）光强 ★影响外植体细胞的增殖、
组织和器官的分化。一般 培养室的光照强度要求 1000～5000lx。
★愈伤组织的诱导有的在光照下有促进 作用；光照强，幼苗生长健壮；光照弱， 幼苗生长弱小，容易徒长。
植物组培快繁程序
2）光质
★不同波长的光对细胞的分裂和器官的 分化有影响。
植物组培快繁程序
3、材料取材
⑴材料选择 培养材料应选择有代表性的主要植 物、选择性状优良的种质或特殊的基因 型。 快速繁殖时应在植株生长的最适时 期取材，如花药培养应在花粉发育到单 核期取材。
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
⑵取材 从生长健壮的无病虫害的植株上选取
发育正常的器官和组织。最好采用茎尖 ，后代性状较稳定，携带细菌较少。
具分裂能力的细胞 分裂
愈伤组织 继代
愈伤组织
诱导期 分裂期 分化期
植物组培快繁程序
愈伤组织诱导
◆ 双子叶植物>单子叶植物和裸子植物 ◆ 幼年细胞和组织>成年细胞和组织 ◆ 二倍体细胞>单倍体细胞 ◆ 根据培养目的选取外植体
植物组培快繁程序
愈伤组织诱导
◆ 外植体大小一般为0.5cm的圆柱形或 方形块 ◆ 添加植调剂和天然提取物利于诱导 和维持 ◆ 生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或 白色或浅绿色或绿色，老化的多为黄色 或褐色
使用浓度（%）
9—10 2
饱和浓度 0.1—1 70—75 10—12
1—2ห้องสมุดไป่ตู้1
4—50mg/L
清除的难易 消毒时间 效 果
易 易 易 较难 易 最易 易 较难 中
5—30 5—30 5—30 2—10 0.2—2 5—15 2—10 5—30 30—60
很好 很好 很好 最好
好 好 很好 好 较好
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三、培养
1、培养含义
指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件) 里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
植物组培快繁程序
2、培养方法
(1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材
料的方法。是现在最常用的方法。虽然 该方法设备简单，易行，但养分分布不 均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒 现象发生。 (2)液体培养法
体细胞胚状体发生型Ⅱ
体 外
植
器官
游离单细胞
小孢子
愈伤组织
体苗 胚试 状管
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胚状体形成植株的特征：
1.具两极性 2.胚状体的维管组织与外植体的维管 组织无解剖结构上的联系 3.胚状体的维管组织的分布是独立的 “Y”形 4.数量多，速度快，结构完整，成苗率 高
植物组培快繁程序
原球茎发生型
形成的茎梢节长， 直立向上呈小灌木 丛状
代继
无愈伤组织产生
茎段培养 继代扩繁
试管苗
生根培养
获得较多嫩茎梢
植物组培快繁程序
器官发生型Ⅰ
植物组培快繁程序
器官发生型Ⅱ
体 外 脱分化
植
①
愈伤组织
代初 代继
分化
②
试管苗
芽、芽丛
切割芽丛 继代培养 生根培养 大量芽丛
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愈伤组织培养
已分化细胞
脱分化
植物组培快繁程序
2、表面灭菌
（1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、 口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清 洗干净，操作前再用70%酒精或消毒 剂擦洗双手。
（2）操作期间双手和台面常用70% 酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用 前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启 风机。
植物组培快繁程序
（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊 子）可放入70-75%酒精中，使用时需 火焰灼烧灭菌，冷却后使用。
选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间 。胚胎培养或脱毒在0.5cm以下。材料 太大易污染，材料太小难于成活。
植物组培快繁程序
二、外植体的灭菌与接种
1、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去
掉不需要部分，将准备使用的植物材 料（外植体）在流水中冲洗20-60分 钟，备用。如特别不洁的外植体，可 先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟 ，再用流水冲洗干净。
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
植物组培快繁程序
（3）壮苗和生根培养
◆壮苗 ◆生根培养基：1／2或1／4MS基本培养基； 不加或少加CTK，适量添加NAA；糖浓度11.5%。 ◆培养条件：增加光强，达3000-10000lx。
植物组培快繁程序
◆生根方法与途径
①新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h； ②在含IAA类培养基中培养4－6d； ③移入含活性碳的生根培养基培养。 ④生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按① ⑤其它方法
◆添加植调剂诱导分裂效果好。 ◆合成代谢迅速。
植物组培快繁程序
分裂期
特征： 细胞分裂快，结构 疏松，缺少有组织 的结构，颜色浅而 透明。
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分化期
特征： 形成瘤状结构的外表 和内部分化；出现多 种类型的细胞。
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体细胞胚状体发生型Ⅰ
石龙芮下胚轴 培养产生胚状 体过程
植物组培快繁程序
茎
等
用成熟或未成熟的孢子进行培养
地钱、狼尾蕨等
蕨类具有横向的茎及直立的短根茎，为 肾蕨、裂叶肾蕨、波
组培的最佳外值体
士顿蕨等
带芽的小插条在试管内进行无菌扦插 植物葡组萄培快、繁杨程序树
丛生芽增殖型Ⅰ
顶芽 腋芽
植物组培快繁程序
丛生芽增殖型Ⅱ
顶芽 代初 侧 芽
CTK刺激
带芽的 茎切段
接种培养
微型扦插
通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗 烟草、油菜等
从愈伤组织或直接从子叶、下胚轴和花 甘蔗、胡萝卜、石刁
药培养中产生
柏等
由茎尖或腋芽产生原球茎放入培养基中 发育成小植株
兰花
叶一柄端表出面芽产一生端圆出球根形小突起（球茎芽），观叶海棠
叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分 化出芽和根
花叶芋
鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞 百合、郁金香、贝母
植物组培快繁程序
脱分化因植物种类、器官及生 理状况有大差异： ◆禾谷类植物脱分化较难。 ◆花器脱分化较易；茎叶难。 ◆细嫩组织脱分化较易；成熟组织较难。
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诱导期
◆诱导期长短与植物种类、生理状态有关。 ◆诱导期长短与环境因素有关。
母株生长在弱光下的外植体易于诱导，分裂 频率高。 增加O2和迅速释放CO2利于细胞分裂。
第三章 植物组培快繁程序
植物快速繁殖就 是应用组织培养技术, 快速繁殖名优特新品 物，使其在较短时间 内繁衍较多的植株。 快繁是当前植物细胞 组织培养中应用最广 泛，又最有效的方法 之一。
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主要内容
一、供体植株的培养与取材 二、外植体的灭菌与接种 三、培养 四、驯化移栽 五、组培快繁计划安排与实施
原球茎：缩短的、呈珠粒状 的、由胚性细胞组成的、类 似嫩茎的器官。
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思考题：
1.初代培养时外植体发育途径有几条？ 2.正常的愈伤组织一般为何种颜色？其 诱导有何特点？
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（2）继代培养
目的：扩繁无根苗（生产上边扩繁边生根）。 扩繁方法：以几何级数增加，可切割茎 段，分离芽丛、胚状体、原球茎。 培养基：基本培养基 或分化培养基 实质：增殖培养物。
如：①红光促进杨树愈伤组织的生长， 蓝光阻碍其生长。
②白光促进小花天竺葵愈伤组织 的生长，蓝光则无作用。
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3）光照时间
根据植物生物学特性决定； 光照长短对试管内花的形成是个重要影响因 素，一般给予周期性光照比较好。多数植物 8-10小时黑暗为宜。光周期长短因植物种类 而异。在胡萝卜组织培养中随着日照长度的 增加，而促进生长。
即用不加固化剂的液体培养基培养 植物材料的方法。由于液体中氧气含量 较少，所以通常需要通过搅动或振动培 养液的方法以确保氧气的供给，采用往 复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速 度一般为50～100r/min，这种定期浸没 的方法，既能使培养基均一，又能保证 氧气的供给。
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3、培养步骤