实验2 甲醛滴定法测定氨基酸含量

（二）器具
锥形瓶 碱式滴定管 移液管 洗耳球 天平 容量瓶 试剂瓶 量筒 玻棒与烧杯
四、实验操作流程
1、取3只100ml锥形瓶，按下表加入试剂： 锥形瓶编号
试剂
样品1 2.0
5.0 4
样品2 2.0
5.0 2.0 4
空白 —
7.0 2.0 4
1%甘氨酸溶液或样品（ml）
蒸馏水（ml） 中性甲醛溶液（ml） 0.5%酚酞乙醇溶液（滴）
三、材料、试剂与器具
（一）试剂
1、0.5%酚酞酒精溶液：称0.5g酚酞溶于100ml50%酒精中。 2、0.1mol/L甘氨酸溶液：取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。 3、标准0.1mol/L 氢氧化钠溶液 4、中性甲醛溶液：取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂 约3ml，滴加0.1mol/LNaOH溶液，使溶液呈微粉红色， 临用前中和。
六、注意事项
1、严格按分析化学的操作进行。
2、脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不
稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基 结构，导致滴定结果偏高。
思考题：
为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基 上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？
2、混匀后用标准0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定至微紫(红)色 （pH8.7～9.0），记录每次消耗的标准NaOH体积。
五、实验结果与分析
1、结果计算 每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为： m={（V1-V0)×M标准NaOH×14.008}/2
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）；
V0为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）； M标准NaOH×14.008为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮 量（mg）。 2、根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
生物化学实验
实验2
甲醛滴定法 测定氨基酸含量
一、实验目的
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作方法 二、实验原理 水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直接用碱滴定 氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—
CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出 来，这样就可以用碱滴定N+H3+放出H+，测出氨基氮，从而计 算氨基酸的含量。 若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的 结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白 质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。但可以用来 测定蛋白质的水解程度。