紫背天葵药材质量标准研究

紫背天葵药材质量标准研究
谭雄斯;王景;唐铁鑫
【摘要】Objective To establish the quality control standard of Begonia fimbristipulata Hance. Methods Cyanidin-3-O-glucoside was identified by polyamide TLC. The water content, total ash, acid insoluble ash and water-soluble extract of multiple batches were determined according to the Chinese Pharmacopoeia, and their limits were set. And HPLC was performed to determine the content of cyanidin-3-O-glucoside. Results Clear spots were obseryed in the polyamide TLC with high specificity and good repeatability. The water content, total ash,acid insoluble ash and water-soluble extract for B. fimbristipulata should be less than
14% ,15% ,2.5% and 13% individually. The content of cyanidin-3-O-glucoside in B. fimbristipulata should not be less than 0.5%. Conclusion
The quality control standard established in this study was suitable for evaluate the quality of B. fimbristipulata.%目的建立紫背天葵药材的质量控制
标准.方法用聚酰胺薄层色谱法鉴别矢车菊素-3-O-葡萄糖苷；按照《中国药典》
方法测定多批药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物,确定以上检查
项目的限度；用高效液相色谱法进行药材中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定.结果聚酰胺薄层色谱斑点清晰、专属性强、重现性好；药材水分、总灰分、酸不溶
性灰分分别不得过14％、15％、2.5％,沸水煮浸法水溶性浸出物量不得少于13％；紫背天葵药材含矢车菊素-3-O-葡萄糖苷不得少于0.5％.结论建立的质量标准适用于评价紫背天葵药材的质量.
【期刊名称】《广东药学院学报》
【年(卷),期】2012(028)004
【总页数】4页(P415-418)
【关键词】紫背天葵;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法
【作者】谭雄斯;王景;唐铁鑫
【作者单位】肇庆医学高等专科学校医技药学系,广东肇庆526020;肇庆医学高等专科学校医技药学系,广东肇庆526020;肇庆医学高等专科学校医技药学系,广东肇庆526020
【正文语种】中文
【中图分类】R917
紫背天葵Begonia fimbristipulata Hance[B.cyclophylla Hook.f.]是秋海棠科秋海棠属的多年生无茎草本植物，全草入药，为中国的特有物种，因其叶背紫色，故名紫背天葵，又名红天葵、红叶、红水葵、散血子等，瑶族医药中称为“木姑垂使”[1]。

紫背天葵作为草药收载于《中华本草》，味甘、性凉，具有清热凉血、止咳化痰、戒毒消肿之功能，主治外感高热、中暑、肺热咳嗽、伤风声嘶、痈肿疮毒、跌打肿痛等症[2]。

紫背天葵属于药食同源植物，既可入药，又是1种很好的营养保健品[3]，在广东地区，它作为夏日清凉饮料中的佳品，久已名闻中外[4]。

其主要化学成分包括矢车菊素氯化物(cyanidin chloride)、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside)、矢车菊素-3-O-芸香糖苷(cyanidin-3-O-rutinoside)等花色苷[5]。

由于目前尚无紫背天葵药材的质量标准，很难保证其资
源的质量，故本文对紫背天葵药材进行研究，拟定质量标准草案。

1 仪器与试药
HN1006型超声清洗机(中国华南超声设备厂，频率40 kHZ、功率220 W)；
BP211D分析天平(德国赛多利斯公司)；DHS20-1多功能红外水分测定仪(上海精密科学仪器有限公司)；KO-C型玻璃仪器气流烘干器(上海精宏实验设备有限公司)；SX2-4-10型箱形电阻炉(长沙市远东电炉厂)；聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)；高效液相色谱仪(LC-10AT泵，SPD-10Avp可变波长紫外检测器)、Shim-pack VP-ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)。

矢车菊素3-O-葡萄糖苷对照品(上海永恒生物科技有限公司，质量分数≥98%，规格：10 mg/支，批号：FB-15001)、甲醇、乙腈(色谱纯，天津四友化学品有限公司)。

其他试剂均为分析纯。

紫背天葵原药材分别于2009～2010年采自福建青云山、广东英德石门台、广东
肇庆鼎湖山，每个地方采集2批，共6批，以《中华本草》和《中国植物志》为
依据，经本校唐铁鑫博士鉴定为紫背天葵Begonia fimbristipula Hance的全草。

详见表1。

表1 紫背天葵样品采集信息表Table 1 The sample collecting information of B. fimbristipulata编号采集日期采集地点12009-08-21福建青云山22009-08-21
福建青云山32009-07-19广东英德石门台42009-08-19广东英德石门台52010-08-25广东肇庆鼎湖山62010-08-22广东肇庆鼎湖山
2 方法与结果
2.1 性状特征紫背天葵干燥全草卷缩成不规则团块，无地上茎，基生叶1片，完
整叶呈卵形或阔卵形，长2.5～7 cm，宽2～6 cm，先端渐尖，基部心形，近对称，边缘有不规则重锯齿和短柔毛，紫红色至暗紫色，两边均被疏或密的粗伏毛，脉上被毛较密，掌状脉7～9条，小脉纤细，明显。

叶柄长2～6 cm，被粗毛，薄
纸质。

气特异，味酸，用手搓之刺鼻，水浸液呈玫瑰红色[6-8]。

见图1。

2.2 显微鉴别取紫背天葵干燥全草粉末，用水封片，显微镜下可见红色薄壁组织、叶脉、腺毛、草酸粒晶。

2.3 薄层色谱鉴别取矢车菊素3-O-葡萄糖苷对照品适量，置100 mL容量瓶中，加甲醇适量溶解，定容，得到每1 mL含72 μg的对照品溶液。

分别取3批紫背
天葵药材粉末各0.5 g，分别置3个具塞锥形瓶中，分别加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液为供试品溶液。

按照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一
部附录Ⅵ B)试验规定，分别吸取上述溶液点于聚酰胺薄膜上，点样量5 μL，用乙醇-乙酸-水(体积比3∶1∶6)为展开剂，展开，取出晾干，记录。

日光下检视，供
试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点，见图2。

图1 紫背天葵药材干燥全草Figure 1 The dry grass herbs of B. fimbristipula 123451～3.表1中编号分别为1、3、5的紫背天葵供试品；4.矢车菊素3-O-葡
萄糖苷对照品；5.甲醇阴性对照。

图2 紫背天葵药材薄层鉴别色谱图Figure 2 The TLC chromatogram of B. fimbristipula
2.4 检查和浸出物测定
2.4.1 检查按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H和附录Ⅸ K分别测定6批
紫背天葵药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分。

根据测定结果(见表2)，暂定紫背
天葵药材水分不得过14%，总灰分不得过15%，酸不溶性灰分不得过2.5%。

2.4.2 浸出物测定按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅹ A方法测定6批紫背天葵药材的浸出物。

结果表明醇浸泡法效果较差，沸水煮浸泡法浸出物量多、效果好、重复性较好，故采用沸水煮浸泡法提取浸出物。

根据实验结果(见表2)，以浸出物最低值下限的20%为限，暂定紫背天葵药材水溶性浸出物量不得少于13%，脱酸后经60%(体积分数，下同)乙醇洗脱后不得少于4%。

表2 水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定结果 Table 2 The determination results of water content,total ash,acid insoluble ash and water-soluble extract w/%编号水分总灰分酸不溶性灰分沸水浸物冷水浸物热
醇(体积分数75%乙醇)浸物冷醇(体积分数75%乙醇)浸物脱酸后60%乙醇洗浸物111.112.61.5221.612.513.36.715.39 211.311.71.2618.513.112.66.926.12 310.811.61.3716.211.110.96.255.52 411.010.51.4618.112.511.26.936.22 511.211.91.8822.212.810.97.376.53 611.613.22.0523.413.511.57.216.25 2.5 含量测定
2.5.1 色谱条件与专属性试验
参考文献[9-10]，经试验确定色谱条件：色谱柱为Shim-pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%H3PO4(体积比12∶88)；流速为0.5 mL·min-1；检测波长为530 nm；进样量为5 μL。

分别精密吸取对照品及供试品溶液依上法测定，记录色谱图。

甲醇阴性对照无干扰，理论塔板数按矢车菊素-3-
O-葡萄糖苷峰计，应不低于2 000。

见图3。

图3 对照品(A)、供试品(B)及阴性对照(C)溶液的HPLC色谱图
Figure 3 The HPLC chromatogram of reference substance(A),sample(B)and negative(C)
2.5.2 溶液的制备
2.5.2.1 对照品溶液的制备取矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解，定容，得每1 mL含对照品72 μg的对照品储备液。

分别精密吸取对照品储备液1、3、4、6、8、10 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得到质量浓度分别为7.2、21.6、28.8、4
3.2、57.6、72 μg·mL-1的
系列对照品溶液。

2.5.2.2 供试品溶液的制备取本品0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min。

放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量。

取上述提取液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。

2.5.3 线性关系的考察分别精密吸取“2.5.2.1”项下系列质量浓度的对照品溶液5 μL，依法测定矢车菊素-3-O-葡萄糖苷峰面积。

以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)
为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y =1.6533×103X +1.7824×105(r=0.999 7，n=6)，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在36～360 ng范围内与峰面积线性关系良好。

2.5.4 精密度试验
精密吸取6号供试品溶液5 μL，连续进样6次，依法测定矢车菊素-3-O-葡萄糖
苷峰面积积分值。

结果峰面积RSD为1.13%，表明仪器精密度良好。

2.5.5 稳定性试验
取6号供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h进样，依法测定。

结果矢车菊素-3-O-葡萄糖苷峰面积RSD值为1.36%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.5.6 重复性试验
分别精密称取同一批紫背天葵样品，共6份，按“2.5.2.2”项下方法制备供试品
溶液，依法进样测定。

结果各样品中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质量分数的RSD值
为1.47%(n=6)，表明本方法重复性良好。

2.5.7 加样回收率试验
取已知质量分数(8.029 mg·g-1)的6号紫背天葵药材6份，每份约0.125 g，精密称定。

分别精密加入矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品储备液14 mL，于减压干燥器中挥去溶剂，按“2.5.2.2”项下方法制备供试品溶液。

分别精密吸取5 μL进样，依法测定，计算回收率。

结果见表3。

表3 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷回收率试验结果Table 3 The recovery results of cyanidin-3-O-glucoside(n=6)序号样品量m/g样品中的量m/mg 加入量
m/mg测得量m/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.124
61.0001.0082.00398.720.124 81.0021.0082.051103.530.125
21.0051.0082.035101.9100.72.2640.124 10.9961.0082.038102.250.125
41.0071.0082.022100.660.125 61.0081.0081.99197.5
2.5.8 样品测定
分别取3批紫背天葵，每批平行操作3份，按“2.5.2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的质量分数。

结果3批样品中矢车菊素-3-
O-葡萄糖苷的质量分数分别为8.029、6.235、7.479 mg·g -1，RSD分别为
1.8%、1.3%、1.1%。

根据测定结果拟定紫背天葵药材含矢车菊素3-O-葡萄糖苷
不得低于0.5%。

3 讨论
有关紫背天葵化学成分研究表明[11-13]，紫背天葵全草以矢车菊素氯化物、矢车
菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊-3-O-芸香糖苷等花色苷为主要化学成分[11-12]，其中又以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量最高，且它的活性与紫背天葵的功效最相近，故选用矢车菊-3-O-芸香糖苷作为指标性成分进行定性鉴别和含量测定。

本品主要活性成分为矢车菊素苷，为极性较大的花青素类黄酮化合物，因此适宜采用聚酰胺薄膜进行薄层鉴别。

黄酮苷类成分的聚酰胺薄层展开剂较多采用乙醇、乙酸和水，因此选用这3种溶剂进行试验，结果发现乙醇-乙酸-水(体积比3∶1∶6)
效果最好。

参考文献:
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