雷帕霉素对TNBS诱导小鼠炎症性肠病的治疗作用及机制研究
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签名：＿＿＿＿＿ 日 期： 年 月 日
学位论文使用授权的声明
本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定， 学校有权 保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅 和借阅。 学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库， 可以 采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。 保密论文在解密后适用本声明。
雷帕霉素对 TNBS 诱导小鼠炎症性肠病的治疗 作用及机制研究 The mechanism and effect of Rapamycin On Trinitrobenzene Sulfonic Acid-Induced inflammatory bowel disease in Mice
姓 学 院 专 名： 张伯彬
论文作者签名：＿＿＿＿＿
论文导师签名：＿＿＿＿＿ 日 期： 年 月 日
广东药学院硕士研究生学位论文
目录
摘 要.................................................................................................................... I Abstract ................................................................................................................... III 第一章 序言 ............................................................................................................. 1 第二章 雷帕霉素对炎症性肠病的治疗效果 ........................................................... 4 2.1 前言 ............................................................................................................. 4 2.2 实验材料 ..................................................................................................... 4 2.2.1 主要实验材料 .................................................................................... 4 2.2.2 主要试剂............................................................................................ 4 2.2.3 主要仪器设备 .................................................................................... 4 2.2.4 主要溶液配制 .................................................................................... 5 2.3 实验方法 ..................................................................................................... 5 2.3.1 TNBS 诱导的 IBD 模型建立 .............................................................. 5 2.3.2 RAPA 给药治疗 IBD .......................................................................... 5 2.3.3 肠组织 H&E 染色 .............................................................................. 5 2.3.4 结肠炎严重程度评估 ........................................................................ 7 2.4 实验结果 ..................................................................................................... 8 2.4.1 体重变化结果 .................................................................................... 8 2.4.2 TNBS 肠炎 DAI 评分 ......................................................................... 9 2.4.3 组织学观察与病理评分 .................................................................... 9 2.5 讨论 ........................................................................................................... 11 第三章 雷帕霉素诱导的调节性 T 细胞的在治疗中的作用 ................................. 13 3.1 前言 ........................................................................................................... 13 3.2 实验材料 ................................................................................................... 13 3.2.1 主要实验材料 .................................................................................. 13 3.2.2 主要试剂.......................................................................................... 13 3.2.3 主要仪器设备 .................................................................................. 14 3.2.4 主要溶液配制 .................................................................................. 15 3.3 实验方法 ................................................................................................... 16
广东药学院 硕士研究生学位论文
题目： 雷帕霉素对 TNBS 诱导小鼠 炎症性肠病的治疗作用及机 制研究
姓 学 院 专
名： 号： 系： 业：
张伯彬 2110943012 基础学院 病原生物学 古宏标（教授）
导师姓名：
二○一二年五月
分类号：___________ UDC: ___________
密级: __________
号： 2110943012 系： 业： 基础学院 病原生物学 免疫学 古宏标 教授
研究方向： 导师姓名：
论文提交日期：_2012 年 4 月 论文答辩日期：_2012 年 5 月 学位授予单位：_广东药学院
二○一二年五月
广东药学院学位论文原创性声明
本人郑重声明： 本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下 进行研究工作所取得的成果。 除文中已特别加以标注和致谢的地方外， 不 包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。 对本研究做出贡献的 其它个人和集体， 均已在文中明确说明和致谢。 本人充分意识到本声明的 法律结果完全由本人承担。
26423主要仪器设备27424主要溶液配制2843实验方法29431腹腔巨噬细胞的分离29432rapa体内诱导aam29433rapa体外诱导aam29434流式细胞术检测aam细胞30435体外培养巨噬细胞rna的提取30436pcr检测各种细胞因子表达3044实验结果31441雷帕霉素体内诱导aam的生成31442雷帕霉素体外诱导aam的生成3345讨论34第五章替代活化巨噬细胞aam在ibd治疗中的作用3551前言3552实验材料35521主要实验材料35广东药学院硕士研究生学位论文iii522主要试剂
I
广东药学院硕士研究生学位论文
3.3.1 模型建立.......................................................................................... 16 3.3.2 流式细胞术检测 Treg、Th1、Th2 和 Th17 细胞 ........................... 16 3.3.3 PCR 检测各种细胞因子表达 ........................................................... 17 3.4 实验结果 ................................................................................................... 19 3.4.1 RAPA 对小鼠 Treg、Th1、Th2 和 Th17 细胞群数量的影响 .......... 19 3.4.2 RAPA 对细胞因子基因表达谱的影响 ............................................. 23 3.5 讨论 ........................................................................................................... 24 第四章 雷帕霉素诱导替代活化巨噬细胞(AAM)的研究...................................... 26 4.1 前言 ........................................................................................................... 26 4.2 实验材料 ................................................................................................... 26 4.2.1 主要实验材料 .................................................................................. 26 4.2.2 主要试剂.......................................................................................... 26 4.2.3 主要仪器设备 ................................................................................... 27 4.2.4 主要溶液配制 .................................................................................. 28 4.3 实验方法 ................................................................................................... 29 4.3.1 腹腔巨噬细胞的分离 ...................................................................... 29 4.3.2 RAPA 体内诱导 AAM ...................................................................... 29 4.3.3 RAPA 体外诱导 AAM ...................................................................... 29 4.3.4 流式细胞术检测 AAM 细胞 ........................................................... 30 4.3.5 体外培养巨噬细胞 RNA 的提取 ..................................................... 30 4.3.6 PCR 检测各种细胞因子表达 ........................................................... 30 4.4 实验结果 ................................................................................................... 31 4.4.1 雷帕霉素体内诱导 AAM 的生成 .................................................... 31 4.4.2 雷帕霉素体外诱导 AAM 的生成 .................................................... 33 4.5 讨论 ........................................................................................................... 34 第五章 替代活化巨噬细胞（AAM）在 IBD 治疗中的作用................................ 35 5.1 前言 ........................................................................................................... 35 5.2 实验材料 ................................................................................................... 35 5.2.1 主要实验材料 .................................................................................. 35
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雷帕霉素对 TNBS 诱导小鼠炎症性肠病的治疗 作用及机制研究 The mechanism and effect of Rapamycin On Trinitrobenzene Sulfonic Acid-Induced inflammatory bowel disease in Mice
姓 学 院 专 名： 张伯彬
论文作者签名：＿＿＿＿＿
论文导师签名：＿＿＿＿＿ 日 期： 年 月 日
广东药学院硕士研究生学位论文
目录
摘 要.................................................................................................................... I Abstract ................................................................................................................... III 第一章 序言 ............................................................................................................. 1 第二章 雷帕霉素对炎症性肠病的治疗效果 ........................................................... 4 2.1 前言 ............................................................................................................. 4 2.2 实验材料 ..................................................................................................... 4 2.2.1 主要实验材料 .................................................................................... 4 2.2.2 主要试剂............................................................................................ 4 2.2.3 主要仪器设备 .................................................................................... 4 2.2.4 主要溶液配制 .................................................................................... 5 2.3 实验方法 ..................................................................................................... 5 2.3.1 TNBS 诱导的 IBD 模型建立 .............................................................. 5 2.3.2 RAPA 给药治疗 IBD .......................................................................... 5 2.3.3 肠组织 H&E 染色 .............................................................................. 5 2.3.4 结肠炎严重程度评估 ........................................................................ 7 2.4 实验结果 ..................................................................................................... 8 2.4.1 体重变化结果 .................................................................................... 8 2.4.2 TNBS 肠炎 DAI 评分 ......................................................................... 9 2.4.3 组织学观察与病理评分 .................................................................... 9 2.5 讨论 ........................................................................................................... 11 第三章 雷帕霉素诱导的调节性 T 细胞的在治疗中的作用 ................................. 13 3.1 前言 ........................................................................................................... 13 3.2 实验材料 ................................................................................................... 13 3.2.1 主要实验材料 .................................................................................. 13 3.2.2 主要试剂.......................................................................................... 13 3.2.3 主要仪器设备 .................................................................................. 14 3.2.4 主要溶液配制 .................................................................................. 15 3.3 实验方法 ................................................................................................... 16
广东药学院 硕士研究生学位论文
题目： 雷帕霉素对 TNBS 诱导小鼠 炎症性肠病的治疗作用及机 制研究
姓 学 院 专
名： 号： 系： 业：
张伯彬 2110943012 基础学院 病原生物学 古宏标（教授）
导师姓名：
二○一二年五月
分类号：___________ UDC: ___________
密级: __________
号： 2110943012 系： 业： 基础学院 病原生物学 免疫学 古宏标 教授
研究方向： 导师姓名：
论文提交日期：_2012 年 4 月 论文答辩日期：_2012 年 5 月 学位授予单位：_广东药学院
二○一二年五月
广东药学院学位论文原创性声明
本人郑重声明： 本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下 进行研究工作所取得的成果。 除文中已特别加以标注和致谢的地方外， 不 包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。 对本研究做出贡献的 其它个人和集体， 均已在文中明确说明和致谢。 本人充分意识到本声明的 法律结果完全由本人承担。
26423主要仪器设备27424主要溶液配制2843实验方法29431腹腔巨噬细胞的分离29432rapa体内诱导aam29433rapa体外诱导aam29434流式细胞术检测aam细胞30435体外培养巨噬细胞rna的提取30436pcr检测各种细胞因子表达3044实验结果31441雷帕霉素体内诱导aam的生成31442雷帕霉素体外诱导aam的生成3345讨论34第五章替代活化巨噬细胞aam在ibd治疗中的作用3551前言3552实验材料35521主要实验材料35广东药学院硕士研究生学位论文iii522主要试剂
I
广东药学院硕士研究生学位论文
3.3.1 模型建立.......................................................................................... 16 3.3.2 流式细胞术检测 Treg、Th1、Th2 和 Th17 细胞 ........................... 16 3.3.3 PCR 检测各种细胞因子表达 ........................................................... 17 3.4 实验结果 ................................................................................................... 19 3.4.1 RAPA 对小鼠 Treg、Th1、Th2 和 Th17 细胞群数量的影响 .......... 19 3.4.2 RAPA 对细胞因子基因表达谱的影响 ............................................. 23 3.5 讨论 ........................................................................................................... 24 第四章 雷帕霉素诱导替代活化巨噬细胞(AAM)的研究...................................... 26 4.1 前言 ........................................................................................................... 26 4.2 实验材料 ................................................................................................... 26 4.2.1 主要实验材料 .................................................................................. 26 4.2.2 主要试剂.......................................................................................... 26 4.2.3 主要仪器设备 ................................................................................... 27 4.2.4 主要溶液配制 .................................................................................. 28 4.3 实验方法 ................................................................................................... 29 4.3.1 腹腔巨噬细胞的分离 ...................................................................... 29 4.3.2 RAPA 体内诱导 AAM ...................................................................... 29 4.3.3 RAPA 体外诱导 AAM ...................................................................... 29 4.3.4 流式细胞术检测 AAM 细胞 ........................................................... 30 4.3.5 体外培养巨噬细胞 RNA 的提取 ..................................................... 30 4.3.6 PCR 检测各种细胞因子表达 ........................................................... 30 4.4 实验结果 ................................................................................................... 31 4.4.1 雷帕霉素体内诱导 AAM 的生成 .................................................... 31 4.4.2 雷帕霉素体外诱导 AAM 的生成 .................................................... 33 4.5 讨论 ........................................................................................................... 34 第五章 替代活化巨噬细胞（AAM）在 IBD 治疗中的作用................................ 35 5.1 前言 ........................................................................................................... 35 5.2 实验材料 ................................................................................................... 35 5.2.1 主要实验材料 .................................................................................. 35