细胞凋亡实验技术总结
细胞培养毕业实习报告总结
毕业实习报告总结：细胞培养首先，我要感谢我的导师和实验室的同事们，他们在我的实习期间给予了我无私的帮助和指导。
通过这次实习，我对细胞培养这一领域有了更深入的了解，也积累了宝贵的实践经验。
细胞培养是生物医学和生物技术领域中重要的实验技术，它通过模拟细胞在体内的生长环境，使细胞在体外继续生长和繁殖。
在实习期间，我学习了细胞培养的基本原理和操作技术，包括细胞的复苏、传代、胰蛋白酶消化、细胞计数、铺板等步骤。
我也了解了细胞培养中常用的仪器设备，如二氧化碳培养箱、显微镜、细胞计数仪等。
在实习过程中，我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还参与了一些具体的实验项目。
我参与了一项关于细胞凋亡的研究，通过细胞培养技术，我成功地培养了所需细胞，并进行了凋亡实验。
通过观察细胞形态的变化和流式细胞术的分析，我得出了实验结果，并协助导师进行了数据分析和论文撰写。
这个过程中，我不仅学习了实验设计和数据分析的方法，还提高了自己的实验操作能力。
在实习期间，我也遇到了一些挑战和困难。
例如，细胞培养过程中细胞的生长速度较慢，有时需要耐心等待。
另外，细胞的复苏和传代过程中，也有一些技巧需要掌握。
通过请教导师和同事，我逐渐克服了这些困难，并取得了较好的实验结果。
通过这次实习，我不仅学到了专业知识和技能，还锻炼了自己的团队合作和沟通能力。
在实验室中，我与同事们共同合作，互相学习和帮助。
我们也定期进行实验室会议，分享实验进展和心得体会，这让我感受到了团队合作的重要性。
总之，这次细胞培养实习是一次非常宝贵的学习经历。
我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还参与了一些具体的实验项目，并取得了较好的研究成果。
同时，我也学会了团队合作和沟通的能力。
我相信这次实习对我未来的学术研究和职业发展将产生积极的影响。
细胞凋亡实验
细胞凋亡Caspase3检测实验小结一．原理Caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用，正常细胞中，Caspase-3以32kD的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期，pro-Caspase-3被活化成为具有催化活性的Caspase-3，活化的Caspase-3蛋白，可以激活其他底物蛋白，从而导致凋亡过程。
活化的Caspase-3能够特异性地水解DEVE-X底物。
Ac-DEVE-pNA常用于Caspase-3的检测，细胞凋亡早期产生的Caspase-3可以特异性地水解Ac-DEVE-pNA的肽键，水解后的pNA能够激发发射荧光，根据荧光的强度可以测定Caspase-3，从而反应Caspase-3被活化的程度。
二．试剂配制1.1底物储存液将Ac-DEVE-pNA溶解于DMSO(10mM)1.2底物工作液(2×)50μL底物储存液100μL DTT (1M)400μLEDTA (100mM)10mL Tris Buffer (200mM)调整pH到7.4三．操作方法将经过药物处理的贴壁细胞，用PBS洗两遍，按照6孔板每孔加入100微升裂解液的比例加入Western及IP细胞裂解液裂解液(P0013)，若细胞密度较大可加大裂解液用量。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取20uL 上清用于BCA蛋白定量。
以相同的蛋白上样量，等比例加入Caspase-3底物工作液，室温孵育至少1h，检测混合液405nm波长下的吸光度。
四．STA和CoCl2诱导RGC5细胞凋亡浓度摸索五、流式细胞术检测空白组(不染色) 空白组(单染) 空白组(单染) 空白组(双染) CoCl2+0% FBS CoCl2+2% FBS 凋亡比例：0.65 % 0.29% 3.13 % 16.78% 16.86 % 32.43 %结论：2% FBS+1mM CoCl2处理24h 可以引起RGC5细胞出现较多的凋亡。
细胞凋亡信号通路详细资料与总结
凋亡抑制剂
凋亡促进剂，与 BCL-2 和 BCL-XL 结合 线虫中的凋亡抑制剂，BCL-2 同源物 腺病毒凋亡抑制剂，与 Bax 和 Bak 结合
Bcl-2家族 引自Katja C. Zimmermann等2001
◆当 Caspase8 活化后，它一方面作用 Procaspase3，另一方面使Bid 裂解成 2 个片 段，其中含 BH3 结构域的 C-端片段被运送 到线粒体，与 Bcl-2/Bax 的 BH3 结构域形成 复合物，导致Cyt c释放。Cyt c 与胞质中 Ced4 同源物 Apaf-1（凋亡蛋白酶活化因子 apoptosis protease activating factor）结合并活 Apaf-1，活化的 Apaf-1 再活化Procaspase9， 最后引起细胞凋亡。
解 DNA。 –CAD 为caspase-activated Dnase（脱氧核苷酸酶），存在于胞质中。
细胞色素释 放引起的凋 亡（线粒体 凋亡通路）
死亡受体凋亡通路
fas 又称作 APO-1， TNFR（ 肿瘤坏死因子受体）和 NGF 受体家族。 1993 年人白细胞分型国际会议统一命名为 CD95。 Fas 蛋白（受体）与 Fas 配体组成 Fas 系统，二者的 结合导致靶细胞走向凋亡。
信号转导研究方法
• 免疫共沉淀 • 荧光共振能量转移（FRET） • 荧光漂白恢复 • 荧光相关光谱 • 免疫荧光显微技术 • 电镜显微技术
◆ bcl-2 蛋白，是膜的整合蛋白，主要存在于线粒体外膜、核膜及部分内质 网中。
◆ Bcl-2家族成员都含有1-4个Bcl-2同源结构域（BH1-4），并且通常羧基末 端有一穿膜的结构域 (transmembrane region，TM)。其中BH4是抗凋亡蛋 白所特有的结构域，BH3是与促进凋亡有关的结构域。
细胞凋亡实验报告
细胞凋亡实验报告细胞凋亡实验报告引言：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，它在维持生物体内部平衡和发育过程中起着关键作用。
本次实验旨在通过细胞凋亡实验，探究不同因素对细胞凋亡的影响，从而进一步了解细胞凋亡的机制和调控。
材料与方法：1. 细胞系：使用人类肺癌细胞系A549作为实验对象。
2. 药物：选择化学药物紫杉醇（Paclitaxel）作为细胞凋亡诱导剂。
3. 细胞培养条件：将A549细胞系在含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中培养，保持在37℃、5% CO2的恒温培养箱中。
实验步骤：1. 细胞培养：将A549细胞系接种于培养皿中，培养至细胞密度达到80%左右。
2. 细胞处理：将培养皿中的培养基抽取，加入不同浓度的紫杉醇处理液，分为高、中、低三个浓度组，每组设置相应的对照组。
3. 细胞观察：将处理后的细胞培养皿放回恒温培养箱中，培养24小时后观察细胞形态和数量的变化。
4. 细胞计数：使用显微镜观察细胞数目，并通过计数室内的细胞数目，计算细胞存活率。
5. 细胞凋亡检测：使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用荧光染料标记细胞并进行分析。
结果与讨论：在本次实验中，我们观察到不同浓度的紫杉醇处理后，A549细胞的形态和数量发生了明显变化。
在高浓度组，细胞数量明显减少，细胞形态发生变化，出现细胞收缩和凋亡体的形成。
而在低浓度组，细胞数量减少较少，细胞形态变化不明显。
对照组中，细胞数量和形态均与处理组相似。
通过细胞计数的结果，我们计算出了细胞存活率，并发现随着紫杉醇浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。
这说明紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡，并且凋亡率与药物浓度呈正相关。
进一步使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，我们发现在高浓度组中，细胞凋亡率明显增加，而在低浓度组和对照组中，细胞凋亡率相对较低。
这与细胞存活率的结果相一致，进一步验证了紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡的能力。
细胞凋亡是一种高度调控的细胞死亡过程，它在生物体内部平衡和发育过程中发挥着重要作用。
细胞凋亡的检测方法及实验原理
张荣201028010642037 昆明植物研究所一形态学检测1、光学显微镜和倒置显微镜观察法未染色细胞：凋亡细胞体积变小、变形，膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩，变圆，脱落。
染色细胞：姬姆萨染色，瑞氏染色等。
凋亡细胞染色质浓缩，边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状，形成凋亡小体。
2、荧光显微镜检测法—荧光染料例如，碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
选用536nm激发光，细胞核呈红色荧光3、电子显微镜收集细胞，2.5%戊二醛4°C固定24h，1%四氧化锇后固定，丙酮梯度脱水，经包埋剂浸透后环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察。
凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。
Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体4、激光扫描共焦显微镜技术FITC-AnnexinV+PI双染，观察凋亡过程中细胞膜PS表面的变化，并区分正常细胞（An-PI-），早期凋亡细胞（An+PI-），晚期凋亡细胞及坏死细胞（An+PI+），细胞收集过程中出现的损伤细胞（An-PI+）二、细胞凋亡的生化及分子生物学检测1、DNA断裂检测法如使用琼脂糖凝胶电泳检测，细胞凋亡时，核染色质凝聚，染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂。
凋亡早期可形成50～300kbp的DNA大片段，晚期核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180～200bp整数倍的寡核苷酸片段。
2、膜联蛋白V法磷脂酰丝氨酸（PS）位于正常细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面。
Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与PS高亲和力。
将Annexin-Ⅴ进行荧光素或生物素标记，以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
凋亡实验的结果解读
凋亡实验的结果解读
"凋亡实验"这个术语在生物学和医学领域中并没有一个明确的
定义。
通常情况下，凋亡是指细胞按照程序性死亡的一种形式。
如果你能提供更多上下文或者具体的实验条件和方法，我将更容易帮助你解读实验结果。
在细胞生物学中，凋亡是一种细胞自我毁灭的过程，通常发生在细胞受到损害、寿命到期、或者在发育和组织修复过程中。
实验可能会使用某些指标来检测凋亡，例如：
DNA断裂：凋亡细胞的DNA通常会出现断裂，这可以通过凝胶电泳等技术来观察。
磷脂外翻：在凋亡过程中，磷脂会从细胞内翻转到细胞外，可以通过荧光标记的磷脂来观察。
凋亡相关蛋白：比如凋亡酶千层饼（caspases）、Bcl-2家族等凋亡相关蛋白的表达水平。
在医学研究中，凋亡实验可能会涉及到疾病治疗、药物筛选等方面。
凋亡的增加或减少可能对疾病治疗有重要影响。
要解读凋亡实验的结果，你需要查看实验设计、使用的细胞类型、处理条件以及选择的观察指标。
例如，如果你使用了特定药物，你可
能会观察到药物引起了细胞的凋亡。
这种情况下，你可以评估药物对细胞的治疗效果。
总体而言，解读凋亡实验的结果需要综合考虑实验的多个方面，包括实验设计、技术手段和相关背景知识。
如果你有具体的实验结果或问题，欢迎提供更多信息，我将尽力帮助你解读。
细胞凋亡实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除细胞凋亡实验报告篇一：实验14细胞凋亡的诱导和检测实验14细胞凋亡的诱导和检测20世纪60年代人们注意到细胞存在着两种不同形式的死亡方式：凋亡（apoptosis）和坏死（necrosis）。
细胞坏死指病理情况下细胞的意外死亡，坏死过程细胞膜通透性增高，细胞肿胀，核碎裂，继而溶酶体、细胞膜破坏，细胞内容物溢出，细胞坏死常引起炎症反应。
细胞凋亡apoptosis一词来源于古希腊语，意思是花瓣或树叶凋落，意味着生命走到了尽头，细胞到了一定时期会像树叶那样自然死亡。
凋亡是细胞在一定生理或病理条件下遵守自身程序的主动死亡过程。
凋亡时细胞皱缩，表面微绒毛消失，染色质凝集并呈新月形或块状靠近核膜边缘，继而核裂解，由细胞膜包裹着核碎片或其他细胞器形成小球状凋亡小体凸出于细胞表面，最后凋亡小体脱落被吞噬细胞或邻周细胞吞噬。
凋亡过程中溶酶体及细胞膜保持完整，不引起炎症反应。
细胞凋亡时的生化变化特征是核酸内切酶被激活，染色体DnA被降解，断裂为50～300kb长的DnA片段，再进一步断裂成180～200bp整倍数的寡核苷酸片断，在琼脂糖凝胶电泳上呈现“梯状”电泳图谱(DnALadder)。
细胞凋亡在个体正常发育、紫稳态维持、免疫耐受形成、肿瘤监控和抵御各种外界因素干扰等方面都起着关键性的作用。
1．细胞凋亡的检测方法凋亡细胞具有一些列不同于坏死细胞的形态特征和生化特征，据此可以鉴别细胞的死亡形式。
细胞凋亡的机制十分复杂，一般采用多种方法综合加以判断，同时不同类型细胞的凋亡分析方法有所不同，方法选择依赖于具体的研究体系和研究目的（表？）。
表凋亡的检测方法（引自DL斯佩克特等，20XX）形态学观察方法：利用各种染色法可观察到凋亡细胞的各种形态学特征：（1）DApI时常用的一种与DnA结合的荧光染料。
借助于DApI染色，可以观察细胞核的形态变化。
（2）giemsa染色法可以观察到染色质固缩、趋边、凋亡小体形成等形态。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
细胞凋亡的形态实验报告
一、实验目的本实验旨在观察细胞凋亡的形态学特征，了解细胞凋亡的发生过程，为细胞凋亡的研究提供形态学依据。
二、实验材料1. 细胞培养：小鼠胚胎成纤维细胞（NIH 3T3细胞）；2. 试剂：H2O2（双氧水）、Annexin V-FITC、PI（碘化丙啶）、RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、PBS缓冲液；3. 仪器：倒置显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、超净工作台、CO2培养箱。
三、实验方法1. 细胞培养：将小鼠胚胎成纤维细胞接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的CO2培养箱中培养，待细胞生长至80%左右时，进行实验处理。
2. 实验分组：（1）正常组：不做任何处理，作为对照组；（2）凋亡组：加入0.8mol/L H2O2溶液处理细胞24小时。
3. 细胞染色：（1）Annexin V-FITC/PI双重染色：收集细胞，用PBS缓冲液洗涤2次，加入Annexin V-FITC和PI，室温避光孵育15分钟；（2）H.E染色：收集细胞，用PBS缓冲液洗涤2次，加入H.E染色液，室温避光孵育15分钟。
4. 细胞观察：（1）荧光显微镜观察：用荧光显微镜观察细胞凋亡形态学特征，包括细胞膜起泡、细胞收缩、凋亡小体形成等；（2）流式细胞仪检测：用流式细胞仪检测细胞凋亡率。
5. 数据分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析。
四、实验结果1. 荧光显微镜观察：凋亡组细胞出现细胞膜起泡、细胞收缩、凋亡小体形成等形态特征，与对照组相比，凋亡组细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。
2. 流式细胞仪检测：凋亡组细胞凋亡率显著升高（P<0.05），约为对照组的2倍。
五、实验讨论1. 细胞凋亡是细胞程序性死亡的一种形式，具有形态学特征，如细胞膜起泡、细胞收缩、凋亡小体形成等。
本实验中，凋亡组细胞出现这些形态特征，表明细胞凋亡已发生。
2. Annexin V-FITC/PI双重染色是一种常用的细胞凋亡检测方法，可以检测细胞凋亡率。
细胞凋亡实验报告
一、实验背景细胞凋亡，又称程序性细胞死亡，是一种由基因调控的细胞自主性死亡过程。
细胞凋亡在生物体的发育、免疫、代谢等生理过程中具有重要作用。
近年来，细胞凋亡与多种疾病的发生、发展及治疗密切相关，因此，研究细胞凋亡的机制具有重要意义。
本实验旨在通过检测细胞凋亡相关指标，探讨细胞凋亡在特定细胞类型中的作用。
二、实验材料与试剂1. 细胞：实验用细胞为正常细胞系A和肿瘤细胞系B。
2. 试剂：Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、RNA提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、Trizol试剂、DEPC水、无血清培养基、胎牛血清、胰蛋白酶等。
三、实验方法1. 细胞培养：将正常细胞系A和肿瘤细胞系B分别接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
2. 细胞凋亡检测：将正常细胞系A和肿瘤细胞系B分别分为实验组和对照组。
实验组加入凋亡诱导剂，对照组加入等量无血清培养基。
培养一定时间后，按照Annexin V-FITC/PI双染试剂盒说明书进行细胞凋亡检测。
3. RNA提取：将实验组和对照组细胞收集于离心管中，按照RNA提取试剂盒说明书提取细胞总RNA。
4. PCR检测：将提取的RNA进行逆转录，得到cDNA。
以cDNA为模板，进行凋亡相关基因的PCR扩增。
5. DNA提取：将实验组和对照组细胞收集于离心管中，按照DNA提取试剂盒说明书提取细胞DNA。
6.琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察条带。
四、实验结果1. 细胞凋亡检测：实验组细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05），说明凋亡诱导剂成功诱导细胞凋亡。
2. RNA提取：成功提取实验组和对照组细胞总RNA。
3. PCR检测：实验组凋亡相关基因表达水平显著高于对照组（P<0.05），说明凋亡诱导剂上调凋亡相关基因表达。
4. 琼脂糖凝胶电泳：实验组凋亡相关基因PCR产物条带较对照组明显，说明凋亡相关基因在实验组中表达上调。
细胞凋亡检测方法总结
1、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中(图3)。
Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力特异性结合。
将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。
两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。
碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（FITC+/PI+）；而右下象限为早期凋亡细胞，显现（FITC+/PI-）。
右上象限为独立的核（FITC-/PI+）。
Annexin-V可以再钙离子存在的情况下，和细胞表面外翻的磷脂酰丝氨酸结合，而磷脂酰丝氨酸的外翻是细胞凋亡的早期事件。
PI是一种DNA染料，当细胞凋亡的晚期，细胞的细胞膜通透性增加，PI从而进入细胞核与DNA结合。
所以Annexin-V阴性-PI阴性代表正常细胞Annexin-V阳性-PI阴性代表凋亡早期的细胞Annexin-V阳性-PI阳性代表凋亡晚期的细胞或坏死的细胞Annexin-V阴性-PI阳性一般不存在这一群细胞，如果出现这一团细胞可能是PI标记时间过长，或者操作过于剧烈而伤害到原本正常的细胞。
细胞凋亡总结
26
2 细胞内源信号诱导凋亡途径
●DNA损伤； ●细胞质中Ca2+ 浓度过高； ●极度氧胁迫，产生大量的自由基。
◆正调控信号（促进细胞死亡） 如细胞色素C，凋亡蛋白酶激活因子 Apaf ◆负调控信号 （抑制细胞死亡） 如哺乳动物中的BCL-2和BCL-x蛋白。
细胞内源信号激发 PCD
细胞凋亡的大致过程
15
程序性细胞死亡途径及相关基因
●ced-3、ced-4、ced-9和egl-1 等4个基因构成了线虫执行 死亡的“死亡机器”(death machinery); ●ced-3 和ced-4是细胞杀手; ●ced-9可抵消ced-3和ced-4 的作用，防止细胞被杀死，因 此是存活因子; ●真正的细胞杀手是ced-3而不是ced-4。
雌雄同体的秀丽新小杆线虫
●线虫生命周期短，单个雄虫有1031个体细胞和1000个生殖细胞。 其神经系统有 302 个细胞组成，来自于 407 个前体细胞，这些 前体细胞有105个发生了PCD。 ●Robert Horvitz等通过体细胞突变的方法发现C.elegans细胞中， 有14个基因在凋亡中起作用。
23
受体介导的程序性细胞死亡途径
TRADD (TNFR1 associated death domain) Fas相关死亡结构域蛋白 (Fasassociateddeathdomain, FADD)
动物细胞中蛋白质酶解 级联系统对 PCD的介导
能够被下游caspase切割的靶蛋白
●蛋白激酶 ●切割核纤层蛋白，导致细胞核形成凋亡小体； ●细胞结构蛋白（如骨架蛋白） ●与DNA修复相关的酶类 ●caspase激活的DNase抑制蛋白。
19
哺乳动物细胞中与线虫同源的凋亡基因
荧光显微镜检测细胞凋亡
实验报告五（2015.5.27）荧光显微镜检测细胞凋亡（Hoechst 33258 染色）姓名：王亚斌班级：生物技术12（1）学号：2012332860026实验五：荧光显微镜检测细胞凋亡（Hoechst 33258 染色)一实验目的：1 了解荧光显微镜的构造并且学会使用荧光显微镜；2 通过荧光显微镜学会分析数据图片。
二实验原理：Hoechst 33258，分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88, 水溶解度可达10mg/ml。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258为特异性DNA染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经70%冷乙醇固定的细胞可立即染色。
而活细胞的着色是渐进性的，在10min内可达饱和。
在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
三实验器材：1ml移液枪及枪头，荧光显微镜，培养贴壁细胞，PBS缓冲液，Hoechst 33258 染色液六孔板，培养箱四实验步骤和方法：1：加入适当量Hoechst 33258 染色液，注意必须充分覆盖住待染色样品。
通常六孔板加1ml/孔，96孔板加100μl/孔。
2：放入37°C培养箱中培养30min。
3：小心吸去染色液，用1ml PBS洗涤2-3次。
4 ：置于荧光显微镜下，选用340nm的激发光观察：在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。
五实验结果防己诺林碱浓度为0uM 防己诺林碱浓度为2uM防己诺林碱浓度为2uM防己诺林碱浓度为4uM防己诺林碱浓度为6uM防己诺林碱浓度为8uM防己诺林碱浓度为10uM在上图可以看出，在防己诺林碱浓度为2um/ml的时候出现了染致密的颗粒块状荧光，也就是说在这个浓度下，细胞开始放生了凋亡，而且，在不断提高防己诺林碱浓度的情况下，视野里的凋亡细胞开始变多了，而且凋亡细胞数目要多于活细胞数目。
实验报告细胞凋亡的诱导与调控机制研究
实验报告细胞凋亡的诱导与调控机制研究实验报告：细胞凋亡的诱导与调控机制研究引言在生物学研究领域，细胞凋亡作为一种重要的细胞死亡方式，一直受到广泛关注。
随着科技的进步，科学家们对于细胞凋亡的诱导和调控机制进行了深入研究，以期探索其在疾病治疗、细胞发育和组织变化中的潜在应用。
本实验旨在研究细胞凋亡的诱导与调控机制，以加深对其原理的理解。
材料与方法1. 细胞培养：使用XXX细胞系培养基，将细胞置于37℃、5% CO2的培养箱中。
2. 实验组设定：将细胞平均分为两组，实验组A和对照组B。
实验组A接受特定诱导剂处理，对照组B不进行任何处理。
3. 细胞凋亡检测：利用TUNEL法检测细胞凋亡程度，使用荧光显微镜观察实验组和对照组下凋亡细胞数量的差异。
4. 分子机制研究：采用Western blot和实时荧光定量PCR技术，检测关键凋亡相关蛋白的表达和基因表达水平。
结果与讨论经过实验，我们观察到以下结果：1. 细胞凋亡诱导：实验组A在接受特定诱导剂处理后，在细胞核中产生了明显的TUNEL阳性信号，表明细胞凋亡被成功诱导。
而对照组B则未出现明显的凋亡相关特征。
2. 细胞凋亡调控机制：通过Western blot检测，我们发现在实验组A中，Bax和Caspase-3蛋白的表达水平显著上调，而对照组B中这些蛋白的表达水平无显著变化。
这表明通过诱导剂的作用，Bax和Caspase-3被激活，并参与细胞凋亡的调控。
另外，实时荧光定量PCR结果显示，实验组A中凋亡相关基因的表达水平明显增加，而对照组B未见明显变化。
这进一步印证了凋亡的调控机制中基因表达的变化重要性。
综合结果分析，我们可以得出以下结论：1. 细胞凋亡可以被特定诱导剂成功激活，从而实现对细胞凋亡的处理。
2. 在细胞凋亡的调控机制中，Bax和Caspase-3等蛋白的上调发挥重要作用。
3. 细胞凋亡的调控还涉及到基因表达的改变，特定诱导剂可以引起相关基因的显著上调。
细胞增殖凋亡检验方法汇总
细胞增殖、凋亡-检测方法汇总1.直接计数法面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细该数目•然后对数目逬行比较。
方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。
而具不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚群的情况。
2「H・TdR渗入法OH腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐用同位素中标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素污染问题。
3、Brdu/EdU检测法Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在DNA合成期掺入细胞中。
不同的是J Brdu检测法可利用B「du专性抗体和具他細胞标记物对细'进行双重染色,可判断増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。
这个方法最大的缺点需要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染色弥散、准确性降低等问题。
EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细胞标记示踪筈方IEI的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较BrdU EdU 检测分子大很小检测方式免疫反应化学反应影响其他标记是否DNA变性需要不需要实验时间过夜 2.5小时检测灵敏度一般灵敏4、WITT检测法&CCK8检测法MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解为蓝紫色的水不溶性的甲瓒(Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。
TUNEL检测细胞凋亡实验报告
TUNEL法检测细胞凋亡实验实验原理：细胞凋亡是生物体内细胞在特定的内源和外源信号诱导下,其死亡途径被激活,并在有关基因的调控下发生的程序性死亡过程。
细胞凋亡涉及caspase活化、线粒体跨膜电位下降，位于细胞膜脂内层的磷脂酰丝氨酸转位到蛋白表面，DNA呈规律性断裂等。
基于这些特征，多种检测凋亡的方法也迅速发展起来，常用的方法包括形态学检查，分子生物学方法，免疫电泳和细胞学检查。
TUNEL，为原位末端转移酶标记技术。
其原理是：先增加细胞膜通透性，让rTDT和荧光素生物素标记的dUTP进入细胞内，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶的辅助下将脱氧核糖核苷酸和荧光素等形成的衍生物标记到DNA的3’末端，从而可进行凋亡细胞的检测。
最终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。
实验前准备在开始实验前，确保所用到的试剂都准备到位。
如：0.2% TritonX 100，TUNEL检测试剂盒（包含10× TdT酶浓缩液、荧光素标记的1× dUTP、转化剂POD），DAB试剂盒，3%过氧化氢甲醇，磷酸缓冲液PBS等。
本实验所使用到的仪器和耗材有：芬兰百得公司提供的移液器，赛默飞公司的QSP盒装吸头，湿盒，恒温箱等。
本次TUNEL实验按照以下常规步骤来展开，首先样品处理，封闭内源性过氧化物酶干扰后进行细胞通透化。
滴加TUNEL反应液反应后POD转换，DAB显色后在显微镜下观察并进行结果分析。
样品处理在标有实验组，阳性对照组和阴性对照组的切片上滴加4%不含甲醇的甲醛室温固定10min。
弃去甲醛，用PBS洗两次，每次5min。
封闭用滤纸擦去周围多余的PBS，滴加3%过氧化氢甲醇，室温孵育10min，消除内源性过氧化物酶干扰后，弃去将载玻片用PBS洗2次，每次5min。
细胞通透化去尽PBS后，滴加100μl由PBS配制的0.2% TritonX 100。
于湿盒中室温孵育5min。
样本细胞凋亡实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景细胞凋亡是细胞程序性死亡的过程，是生物体内重要的细胞生物学现象之一。
细胞凋亡在维持生物体内细胞数量的动态平衡、清除异常细胞以及抵御病原体入侵等方面发挥着至关重要的作用。
本研究旨在通过实验方法检测细胞凋亡的发生，探讨细胞凋亡在特定条件下的生物学意义。
二、实验目的1. 探讨细胞凋亡在特定条件下的发生机制。
2. 检测细胞凋亡的发生，并分析其与细胞增殖的关系。
3. 研究细胞凋亡在生物体内的生理和病理作用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细胞培养液、细胞裂解液、Annexin V-FITC/PI染色试剂盒、流式细胞仪等。
2. 实验仪器：细胞培养箱、显微镜、离心机、流式细胞仪等。
四、实验方法1. 细胞培养：将细胞接种于细胞培养瓶中，置于细胞培养箱中培养至对数生长期。
2. 处理细胞：将细胞分为实验组和对照组，实验组给予特定处理，对照组不做处理。
3. 细胞裂解：将细胞用细胞裂解液裂解，收集细胞裂解液。
4. Annexin V-FITC/PI染色：将细胞裂解液与Annexin V-FITC/PI染色试剂盒混合，室温避光孵育。
5. 流式细胞术检测：将染色后的细胞用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
五、实验结果1. 实验组细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05），表明特定处理可以诱导细胞凋亡。
2. Annexin V-FITC染色结果显示，实验组细胞膜上磷脂酰丝氨酸（PS）外翻，表明细胞凋亡早期发生。
3. PI染色结果显示，实验组细胞核DNA降解，形成DNA ladder，表明细胞凋亡晚期发生。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，特定处理可以诱导细胞凋亡，提示细胞凋亡在特定条件下受到严格调控。
2. Annexin V-FITC染色和PI染色结果显示，细胞凋亡过程分为早期和晚期两个阶段。
早期阶段，细胞膜上PS外翻，细胞膜完整；晚期阶段，细胞核DNA降解，细胞膜通透性增加。
3. 细胞凋亡在生物体内具有重要作用。
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和经验总结
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和经验总结//细胞凋亡内容前面也介绍了几篇内容，相信大家对细胞凋亡的基本概念、细胞凋亡不同时期的主要特征及常用检测方法都有了一定程度的了解。
本期，将为大家讲解TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和经验总结。
//一、TUNEL法的实验原理细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。
由此，TUNEL成为了检测DNA 片段化（细胞凋亡）的最常用方法。
（以下是TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光））TUNEL检测：使用10 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟二、TUNEL实验中关键步骤1.充分脱蜡和水化。
脱蜡可以先60ºC 20 min，再用使用二甲苯两次 5-10 min；而水化用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，这些以便后面的结合反应充分、均匀；2.把握好细胞通透的时间。
一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用 10-30 min，几μm 切片用短时间；几十μm 切片用长时间，通过摸索达到既不脱片，有能够使后面的酶和抗体进入胞内。
3.适当延长 TUNEL 反应液的时间。
一般是37ºC 1 h，你也可以根据你的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至 2 h，但要结合你最终的背景着色。
4.DAB 显色条件的选择。
一般 DAB 反应10 min 左右，结合镜下控制背景颜色，最长不超过30 min；promega 公司提供的DAB 液（桃红色），不利于辨认棕褐色，我不太喜欢。
细胞凋亡机制的实验研究与应用
细胞凋亡机制的实验研究与应用细胞凋亡是一个基本的细胞程序，是维持生命的重要机制。
在细胞生长和发育过程中，细胞凋亡是一个非常必要的程序，由于受到内外环境的影响，细胞凋亡机制也会发生一些异常，如细胞凋亡不足、过度凋亡以及失控凋亡等现象，这些异常情况容易引起一系列疾病。
因此，深入研究细胞凋亡机制，探究其调控程度及其应用，对人类健康具有重要意义。
一、细胞凋亡的研究1.1 细胞凋亡的定义及类型细胞凋亡，又称为程序性死亡或细胞自杀，是一种程序性死亡的细胞机制。
主要包括两种方式：一是通过内在因素诱导产生的细胞凋亡，称为有序性凋亡。
二是由于外来刺激导致的失控性凋亡。
1.2 细胞凋亡的机制细胞凋亡是通过一系列酶的激活来实现的。
其中最重要的是半胱氨酸蛋白酶家族（caspases）。
它们能切割细胞内多种蛋白质，从而引发细胞死亡的过程。
在调节细胞凋亡中，Bcl-2家族（包括p53，Bcl-2，Bcl-xL等）扮演重要角色。
1.3 细胞凋亡的检测方法细胞凋亡的检测方法包括：细胞核染色、流式细胞术、电子显微镜和免疫印迹等。
其中细胞核染色法是一种较常用的方法，可以通过观察染色体的形态改变来判断细胞死亡类型。
流式细胞术也在该领域中比较重要，因为它可以通过细胞凋亡针对性地筛选不同类型的细胞。
二、细胞凋亡机制的应用2.1 细胞凋亡在肿瘤治疗中的应用在肿瘤的治疗中，研究细胞凋亡是一个非常重要的领域。
由于肿瘤细胞过于活跃而且数量较多，如果能够引起其凋亡，就可以达到治疗目的。
因此，研究肿瘤细胞凋亡调控的机制，也成为许多科学家关注的重点。
2.2 细胞凋亡在疾病治疗中的影响在疾病治疗中，细胞凋亡也具有非常广泛的应用。
免疫合并疗法的中心思想是通过激活T细胞等躁动的免疫细胞，以使其识别和清除癌细胞，从而达到治疗的目的。
然而，由于这些疾病的复杂性和多变性，它们的研究仍面临许多挑战。
2.3 细胞凋亡在医学研究中的意义细胞凋亡在医学研究中具有广泛的应用价值。
凋亡实验的结果解读 -回复
凋亡实验的结果解读-回复题目：凋亡实验的结果解读引言：凋亡实验是一项旨在研究及解读细胞死亡过程的重要实验。
细胞凋亡是生物体内一种正常的细胞死亡方式，对于维持机体稳态至关重要。
通过对凋亡实验结果的解读，我们可以更深入地了解细胞凋亡的机制、调控及其在生物体内的作用。
本文将以中括号内的内容为主题，以一步一步的方式回答凋亡实验的结果解读。
一、实验设计及方法在进行凋亡实验之前，研究者需要明确实验的目的和设计一个合适的实验方案。
常见的凋亡实验方法包括Annexin V-FITC/PI双标法、TUNEL法、DNA laddering等。
选择适合的实验方法对于结果的解读至关重要。
二、实验结果描述描述实验的准确结果是解读的基础。
在凋亡实验中，可以观察到细胞形态的变化，如细胞体积缩小、细胞核的碎裂等。
此外，通过选择性染色剂标记，可以进一步观察到细胞凋亡过程中的生物学变化。
三、凋亡实验结果解读1. 凋亡率计算：通过实验中某种凋亡指示剂的标记，可以测量凋亡细胞的数量，并结合总细胞数量计算凋亡率。
凋亡率的高低可以反映细胞凋亡的活跃程度。
较高的凋亡率可能提示存在某种刺激物或疾病状态。
2. 凋亡信号通路相关基因的表达：通过检测与细胞凋亡相关的基因表达水平，可以了解凋亡信号通路的激活情况。
例如，凋亡诱导因子Bax和细胞抑制因子Bcl-2的比值，可以反映凋亡的倾向。
Bax/Bcl-2比例增加，可能促进细胞凋亡的进行。
3. Caspase活性分析：Caspase家族蛋白酶是执行凋亡过程中关键的调控因子，参与细胞核酸降解和细胞结构破坏。
通过测量Caspase活性，可以了解细胞凋亡的启动和执行过程。
高活性的Caspase预示着细胞凋亡的发生。
4. 凋亡相关蛋白的修饰：细胞凋亡过程中，常见的蛋白修饰方式包括磷酸化、乙酰化等。
通过检测凋亡相关蛋白的修饰水平，可以了解细胞凋亡信号通路的激活程度和分子机制。
5. 细胞周期调控异常：细胞凋亡与细胞周期密切相关。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细胞凋亡实验技术总结
一形态学检测
1、光学显微镜和倒置显微镜观察法
未染色细胞:凋亡细胞体积变小、变形，膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩，变圆，脱落。
染色细胞:姬姆萨染色，瑞氏染色等。
凋亡细胞染色质浓缩，边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状，形成凋亡小体。
2、荧光显微镜检测法-荧光染料
例如，碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。
选用536nm 激发光，细胞核呈红色荧光。
3、电子显微镜
收集细胞，2.5%戊二醛4°C 固定24h，1%四氧化锇后固定，丙酮梯度脱水，经包埋剂浸透后环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察。
凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。
Ⅱa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。
4、激光扫描共焦显微镜技术
FITC-AnnexinV+PI双染，观察凋亡过程中细胞膜PS表面的变化，并区分正常细胞(An-PI-)，早期凋亡细胞(An+PI-)，晚期凋亡细胞及坏死细胞(An+PI+)，细胞收集过程中出现的损伤细胞(An-PI+)。
二、细胞凋亡的生化及分子生物学检测
1、DNA 断裂检测法
如使用琼脂糖凝胶电泳检测，细胞凋亡时，核染色质凝聚，染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂。
凋亡早期可形成50~300kbp 的DNA 大片段，晚期核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180~200bp 整数倍的寡核苷酸片段。
2、膜联蛋白V 法
磷脂酰丝氨酸(PS)位于正常细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS 可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面。
Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD 的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与PS高亲和力。
将Annexin-Ⅴ进行荧光素或生物素标记，以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
3、细胞凋亡的酶Caspase检测
检测Caspase活力可用免疫杂交技术分析酶原的加工和底物水解的产物，或用人工底物检测酶活力，也可对活化的Caspase做亲和标记。
例如分析底物的水解产物，PARP(多聚ADP-核糖聚合酶)第一个被认识的caspase-3底物，它的相对分子质量为116000，水解后形成相对分子质量为85000 及相对分子质量为25000 的两个片段，用抗相对分子质量为85000 片段的抗体检测细胞是否发生凋亡。
4、线粒体膜势能变化的检测
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱反映了线粒体内膜电负性的增高或降低流式细胞仪检测细胞的荧光强度或荧光显微镜观察，拍照正常细胞中, Rh123 能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质，荧光强度减弱或消失。
而凋亡时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光。