野山杏果肉总有机酸体外抑制脂质过氧化活性研究

野山杏果肉总有机酸体外抑制脂质过氧化活性研究
阿依姑丽·艾合麦提;李珊;英提扎尔·艾孜木江;王妙颖;刘瑞
【摘要】Objective To investigate the activity of anti-lipoperoxidation in vitro of total organic acids from wild apricot (TOAWA).Methods The anti-lipid peroxidation activities in vitro of TOAWA were evaluated by inhibitory effect on polyunsaturated fatcy acid(PUFA) using vitamin C as a reference.Results The in vitro experiment showed that the TOAWA significantly inhibited the effect on PUFA and the lipid peroxidation in mice liver homogenates spontaneously induced by CCl4, H2O2, and Fe2+-vitamin C,and there existed concentration-effect relationships except the effect on PUFA.Conclusion The results showed that the TOAWA presented a strong anti-lipid peroxidation activities in vitro.%目的探讨野山杏果肉总有机酸(TOAWA)体外抑制脂质过氧化活性的作用.方法以维生素C为阳性对照,采用硫代巴比妥酸法,观察不同质量浓度的TOAWA对卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化体系中脂质过氧化活性以及小鼠肝脏自发性脂质过氧化及CCl4、Fe2+-维生素C和H2O2诱导的脂质过氧化活性的抑制作用.结果 TOAWA能够明显抑制PUFA过氧化体系中的脂质过氧化活性,可减轻小鼠肝脏自发性脂质过氧化及CCl4、Fe2+-维生素C和H2O2诱导的肝脏脂质过氧化程度,除了对PUFA过氧化体系中的脂质过氧化抑制作用与剂量无关外,其他抑制脂质过氧化活性均呈明显的剂量依赖性.结论野山杏总有机酸具有较强的抑制体外脂质过氧化活性的作用.【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2017(032)004
【总页数】5页(P426-430)
【关键词】野山杏;总有机酸;脂质过氧化活性
【作者】阿依姑丽·艾合麦提;李珊;英提扎尔·艾孜木江;王妙颖;刘瑞
【作者单位】新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐 830052
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
新疆哈密和伊犁地区分布着丰富的野山杏资源。

野山杏具有防风固沙的作用，加之国家实施的相关政策，野山杏的种植面积呈现扩大的趋势[1]，因此开发利用新疆野山杏特色资源具有十分重要的意义。

研究表明，野山杏含有多种微量金属元素、大量的膳食纤维以及丰富的黄酮和有机酸类成分[2-3]，野山杏果肉总黄酮和膳食纤维具有抗氧化、降血脂以及保护肝脏的作用[4]，其中的膳食纤维能推进小肠运动[2]，杏仁油可降血脂[5]，但对野山杏果肉中的总有机酸相关报道较少。

本实验通过考察野山杏果肉总有机酸对PUFA过氧化体系中脂质过氧化活性、小鼠肝脏自发性脂质过氧化、CCl4、Fe2+-维生素C和H2O2诱导的脂质过氧化活性的抑制作用，研究野山杏果肉总有机酸的体外抑制脂质过氧化活性的作用，为野山杏果肉总有机酸的进一步研究奠定基础，同时为新疆野山杏资源的开发利用提供依据。

1.1 仪器 UV-2550紫外分光光度计(日本岛津公司)；旋转蒸发仪RE-52B(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-Ⅲ循环水多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；DHG-9型电热恒温鼓风干燥箱(上海冠戈实业有限公司)；电子分析天平(上海明桥精密科学
仪器有限公司)；CR14RD离心机(上海天美生化仪器设备工程有限公司)。

1.2 试药野山杏，产自新疆哈密伊吾县苇子峡乡，经新疆农业大学园林学院周桂
林教授鉴定为蔷薇科杏属落叶乔木野山杏(Prunus armeniaca)的果实。

盐酸、硝酸钠、钨酸钠、硫代巴比妥酸(TBA)、三氯醋酸(TCA)、酚酞、氢氧化钠、维生素C、硫酸亚铁、无水乙醇、苯酚、铁氰化钾和磷酸钠均为分析纯。

1.3 动物昆明系小鼠，雌雄各半，体质量20±2 g，购自新疆医科大学实验动物中心，合格证号：SCXK(新)2016-0003。

2.1 野山杏果肉总有机酸的提取称取野山杏果肉干粉，用体积分数为50%的乙醇
以料液比1∶10回流提取，提取温度为90 ℃，提取2次(每次回流2 h)，合并2
次的滤液，减压浓缩回收乙醇，用稀盐酸调节浓缩液的pH值至1～2，析出沉淀，抽滤，将沉淀用蒸馏水洗至中性，60 ℃恒温干燥，即得有机酸粗品。

将有机酸粗
品用体积分数为50%的乙醇复容，再用稀盐酸滴至总有机酸不再析出，离心，弃
去上清液，将其沉淀在60 ℃烘箱中烘干，即得野山杏果肉总有机酸纯化产物，用紫外法测得有机酸提取物中总有机酸的含量为531.18 mg·g-1。

2.2 过不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化体系中抑制脂质过氧化活性的测定按照文献方
法[6]制造脂质过氧化模型，用硫代巴比妥酸法测定野山杏果肉总有机酸抑制脂质
过氧化活性的作用[7]。

每组实验平行做5次。

取8支具塞试管，依次加入质量浓度为40 mg·mL-1的卵黄悬液0.4 mL，其中空白管加蒸馏水0.1 mL，阳性对照管加入质量浓度为1 mg·mL-1的维生素C 0.1 mL，其他6管分别加入质量浓度为0.1，0.5，1.0，2.0，4.0和8.0 mg·mL-1的总有机酸各0.1 mL，再各加入25 mmol·L-1的硫酸亚铁0.4 mL和0.1 mol·L-1
的磷酸钠缓冲溶液3.1 mL(pH值为7.45)，混匀；置于37 ℃恒温水浴中振荡15 min，取出后加入质量浓度为200 mg·mL-1的三氯乙酸溶液1 mL，以3 500 r·min-1离心10 min，吸取上清液2 mL，置于具塞试管中，加入质量浓度为8
mg·mL-1的硫代巴比妥酸溶液1 mL，加塞并放入沸水浴中加热15 min，取出放冷后，用蒸馏水调零，在532 nm波长处测定吸光度值，样品管的吸光度值为A 样，空白管的吸光度值为A。

样品的脂质过氧化抑制率按照公式(1)进行计算。

2.3 野山杏果肉总有机酸抑制小鼠脂质过氧化活性的测定利用硫代巴比妥酸法[8-9]，将实验小鼠禁食12 h，脱臼处死，摘取肝脏，在冰浴下用玻璃匀浆器加生理
盐水制成质量浓度为50 mg·mL-1的肝脏匀浆液，通过以下4种模型分别测定野
山杏果肉总有机酸抑制脂质过氧化的活性。

每组实验平行做5次。

2.3.1 对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的抑制作用实验共分为8组，即空白对照组(蒸馏水组)、阳性对照组(维生素C组)和6种不同质量浓度总有机酸的样品组。

先分别在各试管中加入肝脏匀浆1.0 mL，空白对照组加入蒸馏水0.1 mL，阳性组加入质量浓度为1 mg·mL-1的维生素C 0.1 mL，再在6个样品组中分别加入质量
浓度为0.1，0.5，1.0，2.0，4.0和8.0 mg·mL-1的总有机酸各0.1 mL。

将8个实验组试管在37 ℃水浴锅中振荡反应60 min，取出试管，用流水冷却至室温，
再向各实验组试管中加入质量浓度为200 mg·mL-1的三氯醋酸1 mL和质量浓度为6.7 mg·mL-1的硫代巴比妥酸1 mL，混匀，置于沸水浴中振荡反应15 min，取出，用流水冷却至室温，以3 000 r·min-1离心15 min，取上清液，在532
nm处测定吸光度值，测定丙二醛(MDA)的含量，并按照公式(2)计算抑制率。

MDA抑制率(IR)=(MDA对照组-MDA样品组)/MDA对照组×100%
2.3.2 对CCl4诱导小鼠肝脏脂质过氧化的影响实验分为8组，即空白对照组(肝脏匀浆+CCl4+蒸馏水)、阳性对照组(肝脏匀浆+CCl4+维生素C)和6种不同质量浓
度总有机酸的样品组(肝脏匀浆+CCl4+相应质量浓度的总有机酸)。

先在各管中分
别加入肝脏匀浆1.5 mL，空白对照组加入蒸馏水0.1 mL，阳性对照组加入质量浓度为1 mg·mL-1的维生素C 0.1 mL，再在6个样品组中分别加入质量浓度为0.1，0.5，1.0，2.0，4.0和8.0 mg·mL-1的总有机酸各0.1 mL。

将8个实验组试管在
37 ℃水浴锅中振荡反应15 min，再向各管中加入CCl4 20 μL, 继续温浴反应30 min。

以三氯醋酸沉淀蛋白, 同法测定MDA含量，并计算其抑制率[10-11]。

2.3.3 对Fe2+-维生素C诱导小鼠肝脏脂质过氧化的影响实验分为8组，即空白
对照组、阳性对照组和6种不同质量浓度总有机酸的样品组。

先在各管中分别加
入肝脏匀浆1.5 mL，空白对照组加入蒸馏水0.1 mL，阳性对照组加入质量浓度为1 mg·mL-1的维生素C 0.1 mL，再在6个样品组中分别加入质量浓度为0.1，0.5，1.0，2.0，4.0和8.0 mg·mL-1的总有机酸各0.1 mL，再向各管中加入维生素C
和FeSO4·7H2O(终浓度分别为1和0.1 mmol·L-1), 37 ℃水浴振荡反应60 min。

同法测定MDA的含量，并计算其抑制率[12]。

2.3.4 对H2O2诱导小鼠肝脏脂质过氧化的影响实验分为8组，即空白对照组、
阳性对照组和6种不同质量浓度总有机酸的样品组。

先在各管中分别加入肝脏匀
浆1.5 mL，空白对照组加入蒸馏水0.1 mL，阳性对照组加入质量浓度为1 mg·mL-1的维生素C 0.1 mL，再在6个样品组中分别加入质量浓度为
0.1,0.5,1.0,2.0,4.0和8.0 mg·mL-1的总有机酸各0.1 mL，37 ℃水浴振荡反应
15 min，再向各管中加入H2O2 0.1 mL，继续温浴反应30 min，同法测定MDA 的含量，并计算其抑制率[13]。

3.1 野山杏果肉总有机酸对PUFA过氧化体系中脂质过氧化活性的影响本实验以
维生素C为阳性对照，利用Fe2+诱发卵黄磷脂C2位上的极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)PUFA的过氧化模型，采用硫代巴比妥酸法测定总有机酸在
卵黄脂蛋白脂质过氧化体系中的脂质过氧化抑制率，考察野山杏果肉有机酸的体外抗氧化活性，结果见表1和图1。

结果显示，野山杏果肉不同质量浓度的总有机酸对Fe2+诱发产生的卵黄脂蛋白PUFA过氧化体系中的脂质过氧化活性有不同程度的抑制作用，且没有剂量依赖性，其中质量浓度为8 mg·mL-1时的抑制率最高为96.4%，与维生素C组相当。

3.2 野山杏果肉总有机酸对小鼠脂质过氧化活性的影响总有机酸抗脂质过氧化活
性的测定采用硫代巴比妥酸法，反应生成有色产物丙二醛(MDA)在532 nm处有
吸收峰，以维生素C为阳性对照，通过对小鼠肝脏自发性脂质过氧化活性以及分
别用CCl4、Fe2+-维生素C和H2O2诱导小鼠肝脏脂质过氧化活性的抑制作用，考察野山杏果肉总有机酸抑制脂质过氧化的能力，结果见表1和图1。

由图1可知，野山杏果肉总有机酸的质量浓度为8.0 mg·mL-1时，对小鼠自发脂质过氧化
产物MDA的抑制率与维生素C相当；对CCl4诱导的小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA具有一定抑制作用，其抑制率均低于维生素C；总有机酸的质量浓度为4.0 mg·mL-1时，对Fe2+-维生素C和H2O2诱导的小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA 的抑制率与维生素C相当，质量浓度为8.0 mg·mL-1时，抑制率分别为61.62%
和64.31%，均高于维生素C。

野山杏果肉总有机酸对4种模型诱导产生的小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA的生成有一定的抑制作用，且呈剂量依赖性。

本实验以维生素C为阳性对照，通过测定野山杏果肉总有机酸对PUFA过氧化体
系中脂质过氧化活性以及对4种模型诱导小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA的抑制率，评价其体外抑制脂质过氧化活性的能力。

结果表明，野山杏果肉总有机酸呈现较强的体外抑制脂质过氧化活性的能力，除了对PUFA过氧化体系中脂质过氧化
活性的抑制作用与剂量无关且没有剂量依赖性外，其他抗脂质过氧化活性均随着质量浓度的增加，抗氧化性能不断增强，呈现剂量相关性。

自由基是机体在物质代谢过程中产生的物质，能攻击PUFA形成过氧化脂质，
CCl4、Fe2+-维生素C和H2O2等自由基诱发剂可通过产生各种不同的自由基激
发体内脂质过氧化反应[14-15]，自由基诱导的过氧化脂质与许多疾病和衰老的发
生发展机制有关，抗氧化活性研究与疾病的防治和抗衰老有着极其密切的关系[16]。

新疆分布有大量药食两用的天然产物，具有特殊的抗氧化活性，如新疆葡萄树伤流液多糖[17]和新疆特色植物药唇香草等[18]。

本研究中新疆野山杏果肉总有机酸显
示了较强的体外抗脂质过氧化活性，其抗氧化活性有待进一步研究。

【相关文献】
[1] 张强，李西萍.新疆杏树种质资源及开发利用前景[J].内蒙古农业科技，2005，(4)：38-40.
[2] 姚健，罗俊富，张继.野山杏果肉成分分析及对小鼠小肠蠕动作用的研究[J].中兽医医药杂志，2009，(1):18-20.
[3] 阿依姑丽·艾合麦提，戴小华，包晓玮，等.野山杏果肉不溶性膳食纤维的提取特性研究[J].食品
工业科技，2011,32(11):237-240.
[4] 阿依姑丽·艾合麦提，张华，韩海霞，等.野山杏水不溶性膳食纤维的降血脂和保肝作用的研究[J].时珍国医国药， 2012，23(4)：928-930.
[5] 姚健，侯天德，程昉，等.野山杏杏仁油影响大鼠血脂生物学效应的研究[J].中兽医医药杂志，2009，(2)：19-22.
[6] 张尔贤，方黎，张捷，等.菊花提取物的抗氧化活性研究[J].食品科学，2000，21(7):6-8.
[7] 李欣，薛治浦，朱文学.丹参不同部位总酚酸和总黄酮含量分析及其抗氧化活性研究[J].食品科学，2011，32(3)：108-111.
[8] 田卉，刘彦军.石榴皮醇提物的体外抗脂质过氧化作用[J].石河子大学学报：自然科学版，2007，25(4)：475-477.
[9] 帕尔哈提·柔孜，阿依姑丽·艾合麦提，朱昆，等.玫瑰花瓣总黄酮和总多糖的体外抗氧化活性[J].
食品科学，2013，34(11)：138-141.
[10]郭英，蔡秀成，陈秋丽，等.葡萄籽提取物的体外抗脂质过氧化作用[J].卫生研究，2002，31(1)：28-30.
[11]Koji Hase，Rena Kasimu，Purusotam Basnet, et al.Preventive effect of lithospermate B from Salvia miltiorhiza on experimental hepatitis induced by carbon tetrachloride or D-galactosamine/lipopolysaccharide[J].Planta Med，1997，(63):22-26.
[12]武文洁，吕树祥，宋诗莹.芝麻提取物抗氧化性能研究[J].中国食品添加剂，2004，(1):70-72，66.
[13]段小群，张小芳，卢曦，等.青钱柳多糖体外抗脂质过氧化作用研究[J].中药材，2010，33(10)：1618-1621.
[14]陈瑷，周玫.自由基医学[M].北京：人民军医出版社，1991：27-181.
[15]白令君，王建英，崔乃杰，等.抗坏血酸与铁离子反应的及ESR及UV-VIS研究[J].生物化学与
生物物理学报，1997，29(6)：527-532.
[16]彭长连，陈少薇，林植芳，等.用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力[J].生物化学与
生物物理进展，2000，27(6)：658-661.
[17]吕乐，布热米古丽·买买提，艾尔肯·依不拉音.新疆吐鲁番、喀什葡萄树伤流液多糖分离纯化及
其抗氧化活性比较研究[J].西北药学杂志，2016,31(2):124-130.
[18]丁文欢，文娥，张雪佳，等.维药唇香草的薄层色谱鉴别及其抗氧化活性成分筛选[J].西北药学杂志，2017,32(1):5-9.。