柑橘叶片多酚提取工艺优化
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南方园艺 ，（）： Ｓouthern Horticulture 2019 30 1 １４-１８
南方园艺
第卷 nfyy3000@1633.0com
柑橘叶片多酚提取工艺优化
丁萍1，刘冰浩1，2，牛英1，唐艳1，邓光宙1，余扣花1 （1.广西柑橘生物学重点实验室/广西特色作物研究院，广西桂林541004；
： A bstractቤተ መጻሕፍቲ ባይዱTo provide technical support for the identification and evaluation of disease resistance of citrus
germplasm resources, the polyphenol content was measured by Folin -Ciocalte method with the extraction rate of polyphenols from citrus leaves. The effects of ethanol volume fraction, liquid-to-liquid ratio, extraction temperature and extraction time on the yield of polyphenols were evaluated by orthogonal test. The results showed that the optimal extraction process parameters of citrus leaves were 50:1 liquid-to-liquid ratio, 30% ethanol concentration, 40° C extraction temperature and 30 min extraction time. The process is low in cost and easy to operate. This process can be used for the determination of polyphenols in citrus leaves. Key words: citrus; leaves; polyphenols; extraction; optimization
2. 湖南农业大学园艺园林学院，湖南长沙410128）
摘要：为开展柑橘种质资源抗病性鉴定和评价提供技术支持，采用Folin-Ciocalte 法测定柑橘叶片多酚含量，以柑橘 叶片多酚提取含量为指标，利用正交试验法分析乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间对提取工艺的影响。结果表明，柑 橘叶片多酚的最佳提取工艺参数为液料比50∶1，乙醇浓度30%，提取温度40 ℃，提取时间30 min。该工艺成本低、易操 作，可用于柑橘叶片多酚的测定。
第1期
丁萍等：柑橘叶片多酚提取条件优化
·15·
用40%甲醇溶液在55℃水浴条件下浸提30 min，柑橘胚 中，剩余部分用30%乙醇洗涤残渣2次，5000 xg离心 性愈伤组织总多酚的得率最高。目前有关柑橘叶片多 20 min，上清液全部并入200 mL容量瓶，30％乙醇溶 酚提取工艺的研究尚未见报道。为此，笔者以柑橘叶片 液定容即得样品待测液。每个样品3个重复。 为试验材料，研究了乙醇浓度、浸提时间、浸提温度、 液料比对柑橘叶片总多酚提取含量的影响，为开展后 续柑橘种质资源抗病性鉴定和评价提供技术支持。
关键词：柑橘；叶片；多酚；提取；优化
中图分类号：S666
文献标识码：A
文章编号： （ ） 1674－5868－ ２０１9 ０1－００１４－０５
Optimization of Polyphenol Extraction Conditions in Citrus Leaves
DING Ping1, LIU Bing－hao1,2 ,NIU Ying1, ＴＡＮＧ Yan, DENG Guang-zhou1,YU Kou-hua1
收稿日期：2018-10-28 基金项目：广西自然科学青年基金（2013GXNSFBA0）；广西科技重大专项项目（桂科AA17204026）；广西重点研发计划项目（桂 科 ）。 AB18221042 作者简介：丁萍(1983-)，女，硕士，助理研究员,主要从事果树生物学研究工作。E-mail:dingping1234@。 通讯作者：刘冰浩（1982-），男，硕士，助理研究员，主要从事果树品种资源与遗传育种等研究。
； (1.Guangxi Key Laboratory of Citrus Biology, Guangxi academy of specialty crops, Guilin 541004, China 2.
Horticulture and Landscape College, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, Hunan,China)
1 材料与方法
1.1 试验材料、试剂与仪器
试验材料为岑溪酸橘和桂金柑1号春梢成熟叶
片，于2015年5月25日在广西特色作物研究院试验果
园选择树势中庸、健康的各5个单株，于树冠中部东、
西、南、北四个方向各采集10张叶片，即每个品种采集
图1 没食子酸标准曲线
叶片200张。叶片经清洗、干燥后粉碎过60目筛备用。
酚类物质是一类广泛存在于植物体内的具有生 在果实中多酚的营养功能测定，其多酚提取对象也多 物活性的天然产物，在果树抗病性和愈伤组织褐化中 是果实。对于种质资源抗逆性的研究和评价，果实样 发挥重要作用[1-3]。黄宗安认为锥栗对栗疫病的抗病性 品采集具有季节性，而枝、叶则没有季节性限制，因此 测定中，叶片、树皮的多酚类物质含量可作为衡量抗 有必要开展柑橘枝、叶多酚提取工艺试验。段艳欣等[5] 病性的指标，在抗病品种选育中应筛选树皮、叶片的 研究了甲醇水溶液浓度和浸提时间、品种/基因型、培 多酚含量都高的植株[4]。有关柑橘多酚的研究多集中 养时间对柑橘胚性愈伤组织总多酚含量的影响，发现
南方园艺
第卷 nfyy3000@1633.0com
柑橘叶片多酚提取工艺优化
丁萍1，刘冰浩1，2，牛英1，唐艳1，邓光宙1，余扣花1 （1.广西柑橘生物学重点实验室/广西特色作物研究院，广西桂林541004；
： A bstractቤተ መጻሕፍቲ ባይዱTo provide technical support for the identification and evaluation of disease resistance of citrus
germplasm resources, the polyphenol content was measured by Folin -Ciocalte method with the extraction rate of polyphenols from citrus leaves. The effects of ethanol volume fraction, liquid-to-liquid ratio, extraction temperature and extraction time on the yield of polyphenols were evaluated by orthogonal test. The results showed that the optimal extraction process parameters of citrus leaves were 50:1 liquid-to-liquid ratio, 30% ethanol concentration, 40° C extraction temperature and 30 min extraction time. The process is low in cost and easy to operate. This process can be used for the determination of polyphenols in citrus leaves. Key words: citrus; leaves; polyphenols; extraction; optimization
2. 湖南农业大学园艺园林学院，湖南长沙410128）
摘要：为开展柑橘种质资源抗病性鉴定和评价提供技术支持，采用Folin-Ciocalte 法测定柑橘叶片多酚含量，以柑橘 叶片多酚提取含量为指标，利用正交试验法分析乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间对提取工艺的影响。结果表明，柑 橘叶片多酚的最佳提取工艺参数为液料比50∶1，乙醇浓度30%，提取温度40 ℃，提取时间30 min。该工艺成本低、易操 作，可用于柑橘叶片多酚的测定。
第1期
丁萍等：柑橘叶片多酚提取条件优化
·15·
用40%甲醇溶液在55℃水浴条件下浸提30 min，柑橘胚 中，剩余部分用30%乙醇洗涤残渣2次，5000 xg离心 性愈伤组织总多酚的得率最高。目前有关柑橘叶片多 20 min，上清液全部并入200 mL容量瓶，30％乙醇溶 酚提取工艺的研究尚未见报道。为此，笔者以柑橘叶片 液定容即得样品待测液。每个样品3个重复。 为试验材料，研究了乙醇浓度、浸提时间、浸提温度、 液料比对柑橘叶片总多酚提取含量的影响，为开展后 续柑橘种质资源抗病性鉴定和评价提供技术支持。
关键词：柑橘；叶片；多酚；提取；优化
中图分类号：S666
文献标识码：A
文章编号： （ ） 1674－5868－ ２０１9 ０1－００１４－０５
Optimization of Polyphenol Extraction Conditions in Citrus Leaves
DING Ping1, LIU Bing－hao1,2 ,NIU Ying1, ＴＡＮＧ Yan, DENG Guang-zhou1,YU Kou-hua1
收稿日期：2018-10-28 基金项目：广西自然科学青年基金（2013GXNSFBA0）；广西科技重大专项项目（桂科AA17204026）；广西重点研发计划项目（桂 科 ）。 AB18221042 作者简介：丁萍(1983-)，女，硕士，助理研究员,主要从事果树生物学研究工作。E-mail:dingping1234@。 通讯作者：刘冰浩（1982-），男，硕士，助理研究员，主要从事果树品种资源与遗传育种等研究。
； (1.Guangxi Key Laboratory of Citrus Biology, Guangxi academy of specialty crops, Guilin 541004, China 2.
Horticulture and Landscape College, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, Hunan,China)
1 材料与方法
1.1 试验材料、试剂与仪器
试验材料为岑溪酸橘和桂金柑1号春梢成熟叶
片，于2015年5月25日在广西特色作物研究院试验果
园选择树势中庸、健康的各5个单株，于树冠中部东、
西、南、北四个方向各采集10张叶片，即每个品种采集
图1 没食子酸标准曲线
叶片200张。叶片经清洗、干燥后粉碎过60目筛备用。
酚类物质是一类广泛存在于植物体内的具有生 在果实中多酚的营养功能测定，其多酚提取对象也多 物活性的天然产物，在果树抗病性和愈伤组织褐化中 是果实。对于种质资源抗逆性的研究和评价，果实样 发挥重要作用[1-3]。黄宗安认为锥栗对栗疫病的抗病性 品采集具有季节性，而枝、叶则没有季节性限制，因此 测定中，叶片、树皮的多酚类物质含量可作为衡量抗 有必要开展柑橘枝、叶多酚提取工艺试验。段艳欣等[5] 病性的指标，在抗病品种选育中应筛选树皮、叶片的 研究了甲醇水溶液浓度和浸提时间、品种/基因型、培 多酚含量都高的植株[4]。有关柑橘多酚的研究多集中 养时间对柑橘胚性愈伤组织总多酚含量的影响，发现