微生物平板划线试验课件PPT
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端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。 夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。
的半固体琼脂培一养基接。 种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 一（、4）相分关离基划础线理接再论种－细次－菌细菌通的培过养 火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
分
鉴别培养基 用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物，与培养 基中的特殊化学物质发生特定的化 学反应，产生明显的特征变化
2、常见培养基
基础培养基
肉浸液培养基：一般细菌都能在此培养基内生长 营养琼脂培养基：一般细菌培养使用 蛋白胨水培养基：靛基质实验
2、常见培养基
加富培养基
血琼脂培养基：可作为肺炎球菌、链球菌、葡萄球 菌、嗜血杆菌等的分离培养，还可用 于某些菌落的溶血作用
②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。
将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。
（1）菌液：金黄色葡萄球菌和普通大肠杆菌菌液各一管。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属
微生物平板划线试验
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀 释的目的。
4、平板划线接种法
图2-5 四区划线
4、平板划线接种法
4、平板划线接种法
（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放， 送进37℃温箱培养。
（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表 面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表 面结构、透明度、颜色等性状。
培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择 培养基、鉴别培养基。
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物
固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
理
状
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
态
半固体培养基
不 同 划 分
液体培养基
2、液体培养基接种方法
图2-2 液体培养基接种法
3、穿刺接种法
常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁 培养基等的接种，前者用于测定细菌的动力，后二 者则用于观察细菌的生化反应。
3、穿刺接种法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基接种法，握持菌种管及待接种 的半固体琼脂培养基。 （3）右手持接种针，灭菌冷却后，以针挑取菌 苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，刺 达近管底部，但不必及于管底，然后循原路 退出。 （4）接种完毕，接种针重新灭菌后放至试管架 上，塞好试管塞，37℃培养18～24小时后取 出观察细菌的生长情况。
之用
二、细菌的接种方法
将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是 其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在 琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半 固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法 可相应的分为四种。
三、金黄色葡萄球菌和普通大肠杆菌 平板划线接种实验
1、实验内容 2、实验目的 3、实验用品 4、实验步骤 5、观察结果
1、实验内容
①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。 一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。 夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。 斜面部均应向上。
者姓名、日期等。 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并放至原来的位置上。 用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基 之用 大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究 苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，刺 上，塞好试管塞，37℃培养18～24小时后取 当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。 微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化 （6）培养18~24h ，观察结果 琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
3、穿刺接种法
图2-3 穿刺接种法
4、平板划线接种法
常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状 况和观察某些生化反应。沙门氏菌的各属在亚硫酸 铋琼脂平板上呈黑色，具有金属光泽；志贺氏菌属 在HE琼脂平板、SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板上 呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
4、平板划线接种法——接种方法
（1）标记 志贺氏菌属在HE琼脂平板、SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。
（1）四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培养基平皿一个 (2)菌落溶血特征：菌落溶血有下列3种情况。
基本技术，也是重要环节。
（7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，
放至原来的位置。 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
表基3表面常。见的几种细菌的斜培养面和基接上种方轻法举轻例 挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
牛膏蛋白胨培养基是最常用 的基础培养基
基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养
按
物质制成的一类营养丰富的培养基
用
途
加富培养基
不 同 划
选择培养基
用来将某种或某类微生物从混杂的 微生物群体中分离出来的培养基
巧克力琼脂培养基：淋球菌及脑膜炎双球菌在此培养 基上生长较佳
2、常见培养基
选择培养基
亚硒酸盐增菌液：作为沙门氏菌属及某些志贺氏菌属 增菌用
伊红－美蓝琼脂：分离沙门氏及志贺氏菌属细菌 Baird-Parker培养基：用于金黄色葡萄球菌的培养分
离
2、常见培养基
鉴别培养基
三糖铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 双糖含铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 葡萄糖枸橼酸盐琼脂：共作鉴别大肠杆菌与产气杆菌
②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上 的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却 。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平 板1/5），此视为二区。
4、平板划线接种法
③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷 却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板 1/4），此为三区。
④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三 区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。
表3 常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种法
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法
穿刺接种法
菌种
葡萄球菌和大肠 杆菌的混合菌液
大肠杆菌培养物
大肠杆菌培养物 枯草杆菌培养物
变形杆菌培养物 痢疾杆菌培养物
培养基 普通琼脂平板
琼脂斜面 培养基
普通肉汤 培养基
半固体琼脂 培养基
1、斜面培养基接种法
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不 同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某 种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含 有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常 需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学 性状，不同的细菌需要不同的培养基进固体培养基、液体培养 基和半固体培养基。
基表面。
1、斜面培养基接种法
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并 放至原来的位置上。重新烧灼接种环，灭菌后放回 试管架上。接种好的试管放37℃温箱培养，18～ 24小时候观察生长情况。
1、斜面培养基接种法
图2-1 斜面培养基接种法
2、液体培养基接种方法
可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊， 有的呈沉淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另 外还可以供测定细菌生化特性用。凡是肉汤、葡萄 糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用 此法接种。
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
便在接种是易于拔取。 2、液体培养基接种方法
（3）取菌种 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
2于、某液些体菌培落养的基溶接血种作方用法左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞， （6）培养18~24h ，观察结果
1、斜面培养基接种法
图2-3 穿刺接种法 （2）培养严格的无菌操作意识
伊基红表－ 面美。（蓝琼6脂：）分离以沙门右氏及手志贺手氏菌属掌细菌及小指，小指及无名指分别拔取并
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并放至原来的位置上。
夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。 为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的
（1）四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培 步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。
的位置。
4、平板划线接种法
（4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒
精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入 其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端 来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10）， 视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40 度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作 。
常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些 生化特性。琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、 柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可 用此法接种。
1、斜面培养基接种法
步骤：（1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。 （2）点燃酒精灯。 （3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌 种与待接种的培养基管，使菌种管位于左侧， 斜面部均应向上。 （4）以右手拇指和食指捏持转动两管试管塞，以 便在接种是易于拔取。 （5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。
4、平板划线接种法
（2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火 焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰 中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金 属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通 过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然 后将接种环移开火焰，待其冷却。
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基
4、平板划线接种法——待接种接方法种的培养基管，进行斜面培养基接种，从
（1）四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培养基平皿一个
斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养 固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定
的半固体琼脂培一养基接。 种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 一（、4）相分关离基划础线理接再论种－细次－菌细菌通的培过养 火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
分
鉴别培养基 用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物，与培养 基中的特殊化学物质发生特定的化 学反应，产生明显的特征变化
2、常见培养基
基础培养基
肉浸液培养基：一般细菌都能在此培养基内生长 营养琼脂培养基：一般细菌培养使用 蛋白胨水培养基：靛基质实验
2、常见培养基
加富培养基
血琼脂培养基：可作为肺炎球菌、链球菌、葡萄球 菌、嗜血杆菌等的分离培养，还可用 于某些菌落的溶血作用
②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。
将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。
（1）菌液：金黄色葡萄球菌和普通大肠杆菌菌液各一管。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属
微生物平板划线试验
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀 释的目的。
4、平板划线接种法
图2-5 四区划线
4、平板划线接种法
4、平板划线接种法
（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放， 送进37℃温箱培养。
（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表 面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表 面结构、透明度、颜色等性状。
培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择 培养基、鉴别培养基。
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物
固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
理
状
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
态
半固体培养基
不 同 划 分
液体培养基
2、液体培养基接种方法
图2-2 液体培养基接种法
3、穿刺接种法
常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁 培养基等的接种，前者用于测定细菌的动力，后二 者则用于观察细菌的生化反应。
3、穿刺接种法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基接种法，握持菌种管及待接种 的半固体琼脂培养基。 （3）右手持接种针，灭菌冷却后，以针挑取菌 苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，刺 达近管底部，但不必及于管底，然后循原路 退出。 （4）接种完毕，接种针重新灭菌后放至试管架 上，塞好试管塞，37℃培养18～24小时后取 出观察细菌的生长情况。
之用
二、细菌的接种方法
将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是 其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在 琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半 固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法 可相应的分为四种。
三、金黄色葡萄球菌和普通大肠杆菌 平板划线接种实验
1、实验内容 2、实验目的 3、实验用品 4、实验步骤 5、观察结果
1、实验内容
①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。 一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。 夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。 斜面部均应向上。
者姓名、日期等。 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并放至原来的位置上。 用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基 之用 大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究 苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，刺 上，塞好试管塞，37℃培养18～24小时后取 当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。 微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化 （6）培养18~24h ，观察结果 琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
3、穿刺接种法
图2-3 穿刺接种法
4、平板划线接种法
常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状 况和观察某些生化反应。沙门氏菌的各属在亚硫酸 铋琼脂平板上呈黑色，具有金属光泽；志贺氏菌属 在HE琼脂平板、SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板上 呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
4、平板划线接种法——接种方法
（1）标记 志贺氏菌属在HE琼脂平板、SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。
（1）四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培养基平皿一个 (2)菌落溶血特征：菌落溶血有下列3种情况。
基本技术，也是重要环节。
（7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，
放至原来的位置。 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
表基3表面常。见的几种细菌的斜培养面和基接上种方轻法举轻例 挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
牛膏蛋白胨培养基是最常用 的基础培养基
基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养
按
物质制成的一类营养丰富的培养基
用
途
加富培养基
不 同 划
选择培养基
用来将某种或某类微生物从混杂的 微生物群体中分离出来的培养基
巧克力琼脂培养基：淋球菌及脑膜炎双球菌在此培养 基上生长较佳
2、常见培养基
选择培养基
亚硒酸盐增菌液：作为沙门氏菌属及某些志贺氏菌属 增菌用
伊红－美蓝琼脂：分离沙门氏及志贺氏菌属细菌 Baird-Parker培养基：用于金黄色葡萄球菌的培养分
离
2、常见培养基
鉴别培养基
三糖铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 双糖含铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 葡萄糖枸橼酸盐琼脂：共作鉴别大肠杆菌与产气杆菌
②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上 的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却 。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平 板1/5），此视为二区。
4、平板划线接种法
③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷 却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板 1/4），此为三区。
④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三 区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。
表3 常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种法
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法
穿刺接种法
菌种
葡萄球菌和大肠 杆菌的混合菌液
大肠杆菌培养物
大肠杆菌培养物 枯草杆菌培养物
变形杆菌培养物 痢疾杆菌培养物
培养基 普通琼脂平板
琼脂斜面 培养基
普通肉汤 培养基
半固体琼脂 培养基
1、斜面培养基接种法
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不 同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某 种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含 有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常 需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学 性状，不同的细菌需要不同的培养基进固体培养基、液体培养 基和半固体培养基。
基表面。
1、斜面培养基接种法
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并 放至原来的位置上。重新烧灼接种环，灭菌后放回 试管架上。接种好的试管放37℃温箱培养，18～ 24小时候观察生长情况。
1、斜面培养基接种法
图2-1 斜面培养基接种法
2、液体培养基接种方法
可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊， 有的呈沉淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另 外还可以供测定细菌生化特性用。凡是肉汤、葡萄 糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用 此法接种。
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
便在接种是易于拔取。 2、液体培养基接种方法
（3）取菌种 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
2于、某液些体菌培落养的基溶接血种作方用法左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞， （6）培养18~24h ，观察结果
1、斜面培养基接种法
图2-3 穿刺接种法 （2）培养严格的无菌操作意识
伊基红表－ 面美。（蓝琼6脂：）分离以沙门右氏及手志贺手氏菌属掌细菌及小指，小指及无名指分别拔取并
（8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并放至原来的位置上。
夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。 为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的
（1）四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培 步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。
的位置。
4、平板划线接种法
（4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒
精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入 其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端 来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10）， 视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40 度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作 。
常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些 生化特性。琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、 柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可 用此法接种。
1、斜面培养基接种法
步骤：（1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。 （2）点燃酒精灯。 （3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌 种与待接种的培养基管，使菌种管位于左侧， 斜面部均应向上。 （4）以右手拇指和食指捏持转动两管试管塞，以 便在接种是易于拔取。 （5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。
4、平板划线接种法
（2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火 焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰 中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金 属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通 过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然 后将接种环移开火焰，待其冷却。
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基
4、平板划线接种法——待接种接方法种的培养基管，进行斜面培养基接种，从
（1）四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培养基平皿一个
斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养 固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定