比较不同途径给胰岛素对血糖的影响 ppt课件
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18
胰岛素口腔黏膜喷雾给药效果不如皮下注射，作用强度及达峰浓度 均低于后者，但其体内药物保持的有效浓度和作用时间均较持久。口 腔黏膜给药0.5h后血糖下降明显，1h后达高峰，药效可维持5～6h。
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预期结果及结果分析
结果分析：
3种给药途径给予胰岛素对正常家兔及四氧嘧啶糖尿病模型家兔血 糖降低均有作用。 胰岛素作为一种蛋白质，普通制剂易为消化酶所破坏，口服无效， 必须经注射给药。皮下注射吸收快，半衰期较长，作用可维持数小时， 但起效时间较长。是目前最常用的胰岛素给药方法。但对机体带来了 诸多不便，同时较经眼给眼和舌下黏膜给药途径起效慢。 胰岛素滴眼剂是一种简便易行的剂型，胰岛素经滴眼给药主要通 过眼结膜和鼻泪管黏膜吸收进入体循环而达到降糖效果。但是，经眼 给药时药物损失量较大，且作用时间短，生物利用率低。 胰岛素经舌下黏膜给药后，由于舌下黏膜有丰富的末梢血管丛， 一部分药物能迅速进入体内，但由于黏膜吸收的“饱和关卡效应”和 黏膜上皮对药物的吸附作用，加之胰岛素之间有很强的聚合力［10］， 可能使一部分胰岛素以多分子聚合物形式在口腔内蓄积滞留。因此， 效果较皮下注射及滴眼给药略低。
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6
实验方法和步骤
具体分组：i）正常组，胰岛素注射给药；ii）四氧嘧啶糖 尿病模型组，胰岛素注射给药；iii）正常组，胰岛素滴眼 给药；iv）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素滴眼给药；v） 正常组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药；vi）四氧嘧啶糖尿病 模型组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药。
2. 实验前家兔禁食18～20h，取六组家兔，分别称重。 以3%戊巴比妥钠1ml/kg耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将家 兔仰位固定于兔台。随时补充适量戊巴比妥钠使动物在整 个实验中维持浅麻醉状态。 3. 每只家兔刺破耳缘静脉取血1ml，随后立即补充同体积 肝素化的生理盐水。
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4
实验对象、器材及药品
实验对象
家兔（2.5～3kg）
实验器材
722 型分光光度计、离心机、兔手术台、固定 绳、水浴箱、离 心管若干、小试管若干、移液管 5ml 和 1ml 若干、注射器 5ml 和 2ml 及 微量注射器若干、100ml锥形瓶、胶布、纱布等。
•
实验药品
1% 戊 巴 比 妥 钠 、 胰 岛 素 注 射 剂 、 胰 岛 素 口 腔 黏 膜 喷 雾 剂 （ 40IU/ml ）、四氧嘧啶、肝素、 pH7.4 磷酸盐缓冲液、 Na2CO3 、酒 石酸、CuSO4•6H2O、钼酸、钨酸钠、85%浓磷酸、浓硫酸、无水葡萄 糖、生理盐水、苯甲酸。
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实验方法和步骤
7. 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 ［8］：
（1）、血液采集后，取干燥锥形瓶一个，准确加入蒸馏水 7.0ml，用移液管吸取全血0.2ml，慢慢将血液滴入水中，并用 其水洗涤移液管吸头，使血液全部移入锥形瓶中，混匀。 （2）、加入1/3mol/LH3SO4 0.4ml，10%钨酸钠溶液0.4ml， 充分混匀，放置5～10min。 （3）、待溶液由红色变为咖啡色后，离心7min（转速为 3000r/min）。 （4）、测定方法 ：手工操作法取试管3支，取上清液按下表 操作。 9 ppt课件
（5）、混匀放置3min，将上述各管用蒸馏水3ml 稀释。将各管混匀后，用空白管调“0”点，在 波长620nm处比色，读取标准管及测定管吸光度。
（注：本法对葡萄糖有专一性，不受其它糖及还 原性物质干扰，其正常值为130～150mg/100ml。）
血糖含量计算方法 ：血糖含量（mmol/L）== (测定管吸光度/标准管吸光 度)×100/180.2×2×0.025
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观察指标
比较六组家兔各时间血糖含量，记录数据，计算后填入下表
表-2不同途径给胰岛素家兔血糖浓度变化
血糖浓度（mmol/L）（单位：min）
分组 药物剂量 -15 0 15 30 60 120 180 240
i ii
iii iv v vi
0.75ml/kg 0.75ml/kg
50μl 50μl 0.25ml/kg 0.25ml/kg
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7
实验方法和步骤
4. i）组、ii）组15min后皮下注射胰岛素0.75ml/kg，并 记录注射时间。分别取0、15、30、60、120、180、 240min全血1ml［7］，并补充同体积肝素化的生理盐水， 取血方法同步骤3。
5. iii）组、iv）组15min后用微量注射器取胰岛素50μl 滴入动物左眼，并记录注射时间。分别取0、15、30、60、 120、180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理 盐水，取血方法同步骤3。 6. v）组、vi）组15min后取胰岛素口腔黏膜喷雾剂 0.25ml/kg经适量pH7.4磷酸盐缓冲液稀释后从舌下喷雾 给药，并记录给药时间。分别取0、15、30、60、120、 180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理盐水， 取血方法同步骤3。
比较不同途径给胰岛素对血糖的 影响
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1
立项的依据
胰岛素自发现以来一直是治疗糖尿病的主要药物，特别是 1965年中国首次人工合成胰岛素成功为胰岛素广泛应用于 临床奠定了基础［1］。 然而直接将胰岛素口服给药，可使其在胃肠道被蛋白酶迅 速降解，故临床常采用注射给药，但注射给药给病人带来 诸多不便。 近年来，非注射给药途径的胰岛素制剂已成为国内外学者 的研究热点［2］。
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14
研究结论
近年来，糖尿病的发病率持续上升，已成为全世界发病率 和死亡率最高的疾病之一。
注射恐惧症和每日多次注射的压力导致了研究和开发新的 给药途径。 当前改进胰岛素治疗的关键，在于找的代替给患者带来痛 苦和麻烦的皮下注射胰岛素的方法。 本实验通过对家兔进行不同途径给胰岛素，了解其对血糖 的影响，从而可以正确高效的使用胰岛素治疗糖尿病，同 时有助于促进对胰岛素非注射途径的研究与发展。
［2］孙爽；吕邵娃；王锐；夏畅；李永吉 胰岛素非注射给药及与中药联合应用新进展 中国实验方剂学杂志 2011，266（13） ［3］Halperin F；Lopez X；Manning R 胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素分泌的增强作 用受损 中国糖尿病杂志 2014，6（1） ［4］吕敏；王峰；李颖；王幼珍；王京媛；贾广兴 胰岛素经眼吸收后对正常和四氧嘧啶 致糖尿病模型家兔的降血糖作用 中国药学杂志 1995，13（1） ［5］徐叔云；卞如濂；陈修 药理实验方法学.第二版.北京 人民卫生出版社 1991： 1274
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•
实验方法和步骤
1.家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立［4］：
（1）、取36只健康成年家兔，雌雄兼备，体重2.5～3kg。 （2）、糖尿病模型的制备方法参考文献［5］，取18只 成年家兔，雌雄兼备，空腹24h后静脉给予150mg/kg［6］ 四氧嘧啶生理盐水溶液，3d后待空腹血糖浓度达到 16.65mmol/L以上时，即认为生成糖尿病模型。 （3）、正常家兔与糖尿病家兔分别随机分为3组，雌雄 兼备，共6组。
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15
注意事项
1. 如家兔注射胰岛素后发生低血糖休克，可提前采血。 2. 葡萄糖氧化酶法测血糖浓度应在取血后2h内完成。 3. 配制溶液时注意严格控制剂量，避免因剂量误差导致 实验结果不准确。
4. 操作完毕应立即比色，久置颗粒变粗影响结果。
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参考文献
［1］张文玉；张路晗 胰岛素滴眼液促吸收剂的研究 中国药科大学学报 1997，275（5）
验方法和步骤
表-1 家兔血糖测定（ml）
试剂 血清 空白管 —— 标准管 —— 测定管 2.0
葡萄糖标准应用液
蒸馏水 碱性磷酸铜
——
2.0 2.0
2.0
—— 2.0
——
—— 2.0
充分摇匀，置沸水浴中准确煮沸8min，取出切勿摇动，冷水中冷却 磷钼酸试剂 2.0 2.0 2.0
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10
实验方法和步骤
［6］王开富；李鸣真；叶望云；柳重威；龚波 四氧嘧啶剂量和家兔性别对制作糖尿病模 型的影响 同济医科大学学报 1994，223（3）
［7］周密妹；杨虎；郭梅；耿立坚；李性天；吴国民 胰岛素口腔黏膜喷雾剂在四氧嘧啶 致糖尿病兔体内的药动学研究 中国药房杂志 2008，752（10） ［8］张翠香；罗永会；陈贵元 胰岛素及肾上腺素对家兔血糖含量影响综合实验的建立和 探索 临床和实验医学杂志 2009，8（1） ［9］李吉华；郭功玲；李亚力 胰岛素给药途径的研究进展 山东医药杂志 2004，48 （14） ［10］McEvoy GK.AHFS Drug Information［M］.37th.Maryland：American Society of Healty - System Pharmacists Inc，1995：2161～2165
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预期结果及结果分析
预期结果 ：
皮下注射胰岛素1h后血糖下降较前明显，用药后2～4h后达高峰，半 衰期为2h，血糖浓度最大可下降50%以上，维持时间为5～7h。 相 比之下，为3种给药方法中效果最好的一种。
用胰岛素经眼给药和皮下注射相比，前0.5h血糖下降程度无显著性 差异。0.5h以后，经眼给药降糖幅度显著大于静脉注射。用药2h后血 糖下降50%，维持时间4～5h［9］，并且可使血糖降至正常范围内。
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2
实验目的
本实验通过对正常家兔及糖尿病家兔不同途径给予胰岛素， 比较不同途径给药时胰岛素的降血糖作用。
同时学习葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的方法。
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3
实验原理
胰岛素是一种由两条多肽链组成的酸性蛋白质， A链含21个氨基酸残基，B链含30个氨基酸残基， A、B两链通过两个二硫键以共价相连。 胰岛素通过促进糖原的合成和储存，加速葡萄糖 的氧化和酵解，并抑制糖原分解和异生而降低血 糖［3］。
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胰岛素口腔黏膜喷雾给药效果不如皮下注射，作用强度及达峰浓度 均低于后者，但其体内药物保持的有效浓度和作用时间均较持久。口 腔黏膜给药0.5h后血糖下降明显，1h后达高峰，药效可维持5～6h。
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预期结果及结果分析
结果分析：
3种给药途径给予胰岛素对正常家兔及四氧嘧啶糖尿病模型家兔血 糖降低均有作用。 胰岛素作为一种蛋白质，普通制剂易为消化酶所破坏，口服无效， 必须经注射给药。皮下注射吸收快，半衰期较长，作用可维持数小时， 但起效时间较长。是目前最常用的胰岛素给药方法。但对机体带来了 诸多不便，同时较经眼给眼和舌下黏膜给药途径起效慢。 胰岛素滴眼剂是一种简便易行的剂型，胰岛素经滴眼给药主要通 过眼结膜和鼻泪管黏膜吸收进入体循环而达到降糖效果。但是，经眼 给药时药物损失量较大，且作用时间短，生物利用率低。 胰岛素经舌下黏膜给药后，由于舌下黏膜有丰富的末梢血管丛， 一部分药物能迅速进入体内，但由于黏膜吸收的“饱和关卡效应”和 黏膜上皮对药物的吸附作用，加之胰岛素之间有很强的聚合力［10］， 可能使一部分胰岛素以多分子聚合物形式在口腔内蓄积滞留。因此， 效果较皮下注射及滴眼给药略低。
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实验方法和步骤
具体分组：i）正常组，胰岛素注射给药；ii）四氧嘧啶糖 尿病模型组，胰岛素注射给药；iii）正常组，胰岛素滴眼 给药；iv）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素滴眼给药；v） 正常组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药；vi）四氧嘧啶糖尿病 模型组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药。
2. 实验前家兔禁食18～20h，取六组家兔，分别称重。 以3%戊巴比妥钠1ml/kg耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将家 兔仰位固定于兔台。随时补充适量戊巴比妥钠使动物在整 个实验中维持浅麻醉状态。 3. 每只家兔刺破耳缘静脉取血1ml，随后立即补充同体积 肝素化的生理盐水。
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实验对象、器材及药品
实验对象
家兔（2.5～3kg）
实验器材
722 型分光光度计、离心机、兔手术台、固定 绳、水浴箱、离 心管若干、小试管若干、移液管 5ml 和 1ml 若干、注射器 5ml 和 2ml 及 微量注射器若干、100ml锥形瓶、胶布、纱布等。
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实验药品
1% 戊 巴 比 妥 钠 、 胰 岛 素 注 射 剂 、 胰 岛 素 口 腔 黏 膜 喷 雾 剂 （ 40IU/ml ）、四氧嘧啶、肝素、 pH7.4 磷酸盐缓冲液、 Na2CO3 、酒 石酸、CuSO4•6H2O、钼酸、钨酸钠、85%浓磷酸、浓硫酸、无水葡萄 糖、生理盐水、苯甲酸。
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实验方法和步骤
7. 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 ［8］：
（1）、血液采集后，取干燥锥形瓶一个，准确加入蒸馏水 7.0ml，用移液管吸取全血0.2ml，慢慢将血液滴入水中，并用 其水洗涤移液管吸头，使血液全部移入锥形瓶中，混匀。 （2）、加入1/3mol/LH3SO4 0.4ml，10%钨酸钠溶液0.4ml， 充分混匀，放置5～10min。 （3）、待溶液由红色变为咖啡色后，离心7min（转速为 3000r/min）。 （4）、测定方法 ：手工操作法取试管3支，取上清液按下表 操作。 9 ppt课件
（5）、混匀放置3min，将上述各管用蒸馏水3ml 稀释。将各管混匀后，用空白管调“0”点，在 波长620nm处比色，读取标准管及测定管吸光度。
（注：本法对葡萄糖有专一性，不受其它糖及还 原性物质干扰，其正常值为130～150mg/100ml。）
血糖含量计算方法 ：血糖含量（mmol/L）== (测定管吸光度/标准管吸光 度)×100/180.2×2×0.025
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观察指标
比较六组家兔各时间血糖含量，记录数据，计算后填入下表
表-2不同途径给胰岛素家兔血糖浓度变化
血糖浓度（mmol/L）（单位：min）
分组 药物剂量 -15 0 15 30 60 120 180 240
i ii
iii iv v vi
0.75ml/kg 0.75ml/kg
50μl 50μl 0.25ml/kg 0.25ml/kg
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实验方法和步骤
4. i）组、ii）组15min后皮下注射胰岛素0.75ml/kg，并 记录注射时间。分别取0、15、30、60、120、180、 240min全血1ml［7］，并补充同体积肝素化的生理盐水， 取血方法同步骤3。
5. iii）组、iv）组15min后用微量注射器取胰岛素50μl 滴入动物左眼，并记录注射时间。分别取0、15、30、60、 120、180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理 盐水，取血方法同步骤3。 6. v）组、vi）组15min后取胰岛素口腔黏膜喷雾剂 0.25ml/kg经适量pH7.4磷酸盐缓冲液稀释后从舌下喷雾 给药，并记录给药时间。分别取0、15、30、60、120、 180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理盐水， 取血方法同步骤3。
比较不同途径给胰岛素对血糖的 影响
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立项的依据
胰岛素自发现以来一直是治疗糖尿病的主要药物，特别是 1965年中国首次人工合成胰岛素成功为胰岛素广泛应用于 临床奠定了基础［1］。 然而直接将胰岛素口服给药，可使其在胃肠道被蛋白酶迅 速降解，故临床常采用注射给药，但注射给药给病人带来 诸多不便。 近年来，非注射给药途径的胰岛素制剂已成为国内外学者 的研究热点［2］。
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研究结论
近年来，糖尿病的发病率持续上升，已成为全世界发病率 和死亡率最高的疾病之一。
注射恐惧症和每日多次注射的压力导致了研究和开发新的 给药途径。 当前改进胰岛素治疗的关键，在于找的代替给患者带来痛 苦和麻烦的皮下注射胰岛素的方法。 本实验通过对家兔进行不同途径给胰岛素，了解其对血糖 的影响，从而可以正确高效的使用胰岛素治疗糖尿病，同 时有助于促进对胰岛素非注射途径的研究与发展。
［2］孙爽；吕邵娃；王锐；夏畅；李永吉 胰岛素非注射给药及与中药联合应用新进展 中国实验方剂学杂志 2011，266（13） ［3］Halperin F；Lopez X；Manning R 胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素分泌的增强作 用受损 中国糖尿病杂志 2014，6（1） ［4］吕敏；王峰；李颖；王幼珍；王京媛；贾广兴 胰岛素经眼吸收后对正常和四氧嘧啶 致糖尿病模型家兔的降血糖作用 中国药学杂志 1995，13（1） ［5］徐叔云；卞如濂；陈修 药理实验方法学.第二版.北京 人民卫生出版社 1991： 1274
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实验方法和步骤
1.家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立［4］：
（1）、取36只健康成年家兔，雌雄兼备，体重2.5～3kg。 （2）、糖尿病模型的制备方法参考文献［5］，取18只 成年家兔，雌雄兼备，空腹24h后静脉给予150mg/kg［6］ 四氧嘧啶生理盐水溶液，3d后待空腹血糖浓度达到 16.65mmol/L以上时，即认为生成糖尿病模型。 （3）、正常家兔与糖尿病家兔分别随机分为3组，雌雄 兼备，共6组。
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注意事项
1. 如家兔注射胰岛素后发生低血糖休克，可提前采血。 2. 葡萄糖氧化酶法测血糖浓度应在取血后2h内完成。 3. 配制溶液时注意严格控制剂量，避免因剂量误差导致 实验结果不准确。
4. 操作完毕应立即比色，久置颗粒变粗影响结果。
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参考文献
［1］张文玉；张路晗 胰岛素滴眼液促吸收剂的研究 中国药科大学学报 1997，275（5）
验方法和步骤
表-1 家兔血糖测定（ml）
试剂 血清 空白管 —— 标准管 —— 测定管 2.0
葡萄糖标准应用液
蒸馏水 碱性磷酸铜
——
2.0 2.0
2.0
—— 2.0
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充分摇匀，置沸水浴中准确煮沸8min，取出切勿摇动，冷水中冷却 磷钼酸试剂 2.0 2.0 2.0
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［6］王开富；李鸣真；叶望云；柳重威；龚波 四氧嘧啶剂量和家兔性别对制作糖尿病模 型的影响 同济医科大学学报 1994，223（3）
［7］周密妹；杨虎；郭梅；耿立坚；李性天；吴国民 胰岛素口腔黏膜喷雾剂在四氧嘧啶 致糖尿病兔体内的药动学研究 中国药房杂志 2008，752（10） ［8］张翠香；罗永会；陈贵元 胰岛素及肾上腺素对家兔血糖含量影响综合实验的建立和 探索 临床和实验医学杂志 2009，8（1） ［9］李吉华；郭功玲；李亚力 胰岛素给药途径的研究进展 山东医药杂志 2004，48 （14） ［10］McEvoy GK.AHFS Drug Information［M］.37th.Maryland：American Society of Healty - System Pharmacists Inc，1995：2161～2165
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预期结果及结果分析
预期结果 ：
皮下注射胰岛素1h后血糖下降较前明显，用药后2～4h后达高峰，半 衰期为2h，血糖浓度最大可下降50%以上，维持时间为5～7h。 相 比之下，为3种给药方法中效果最好的一种。
用胰岛素经眼给药和皮下注射相比，前0.5h血糖下降程度无显著性 差异。0.5h以后，经眼给药降糖幅度显著大于静脉注射。用药2h后血 糖下降50%，维持时间4～5h［9］，并且可使血糖降至正常范围内。
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实验目的
本实验通过对正常家兔及糖尿病家兔不同途径给予胰岛素， 比较不同途径给药时胰岛素的降血糖作用。
同时学习葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的方法。
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实验原理
胰岛素是一种由两条多肽链组成的酸性蛋白质， A链含21个氨基酸残基，B链含30个氨基酸残基， A、B两链通过两个二硫键以共价相连。 胰岛素通过促进糖原的合成和储存，加速葡萄糖 的氧化和酵解，并抑制糖原分解和异生而降低血 糖［3］。