回药木香油方抑制脑缺血再灌注损伤大鼠血清炎症因子表达

回药木香油方抑制脑缺血再灌注损伤大鼠血清炎症因子表达赵启鹏;程秀丽;朱亚飞;张转转
【摘要】目的探讨回药木香油方对脑缺血再灌注损伤后大鼠血清炎症因子的影响.方法雄性SD大鼠分为如下6组:假手术组、模型对照组、复方脑蛋白水解物阳性对照药组、木香油方4、8和16 g·kg-1组.灌胃给药每日1次,连续3d,第3天给药后1h采用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,并于再灌注后4、23和47h分别给药1次,于再灌注24和48h股动脉放血,处死大鼠.采用Longa评分标准评价神经功能,TTC染色法测定脑梗死比率,酶联免疫吸附法测定血清白介素-
1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α).结果复方脑蛋白水解物及木香油方4、8和16.0 g·kg-1组大鼠的神经功能评分和脑梗死比率均低于模型组(P＜0.05).与模型组比较,复方脑蛋白水解物及木香油方4、8和16g·kg-1组大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α明显降低(P＜0.05).结论木香油方可降低脑缺血再灌注损伤后大鼠神经功能评分及脑梗死比率,其机制可能与降低血清炎症因子表达有关.
【期刊名称】《宁夏医科大学学报》
【年(卷),期】2016(038)007
【总页数】6页(P729-733,前插1)
【关键词】木香油方;脑缺血再灌注;炎症因子
【作者】赵启鹏;程秀丽;朱亚飞;张转转
【作者单位】宁夏医科大学药学院,银川750004;回医药现代化省部共建教育部重点实验室,银川750004;宁夏回医药协同创新中心,银川750004;宁夏回药现代化工
程技术研究中心,银川750004;宁夏医科大学药学院,银川750004;宁夏医科大学药学院,银川750004;宁夏医科大学药学院,银川750004
【正文语种】中文
【中图分类】R743
缺血性卒中是脑卒中的主要类型之一，其发病率、致死率、致残率高，为全球性公共卫生问题[1]。

回医药是民族医药的重要组成部分，《回回药方》是一部理、法、方、药、术自成体系的民族医药学专著。

书中对脑卒中的治疗处方中出现频率较高的药物有：胡椒(58%处方使用)、腽肭脐(42%处方使用)、法而非荣(23%处方使用)等。

木香油方由“木香、胡椒、腽肭脐(海狗肾)、法而非荣(大戟)、阿吉而哈而哈(细辛)组成，专治左瘫右痪、口眼歪斜、又能助筋经力，用之皆得济”[2]。

在《回回药方》记载的治疗脑卒中的处方中，木香油方因其组方精简，含胡椒、腽肭脐和法而非荣三味高频药味，具有一定的代表性。

脑缺血早期的炎症反应是脑缺血再灌注损伤的主要发病机制之一[3]。

关于木香油
方对脑缺血再灌注损伤后炎症因子的影响尚未见报道，本研究旨在探讨木香油方对脑缺血再灌注损伤后部分炎症因子表达的影响，观察木香油方的抗炎作用，为其临床应用提供实验依据。

1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 160只SD雄性大鼠，SPF级，体质量(300±20)g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK(宁)2011-0001。

1.1.2 药物与试剂木香油方，按《回回药方》记载配伍比例配比，采用超临界萃取技术提取挥发性成分，挥发油得率为
2.7%,1g挥发油相当于生药39g。

药渣采用40%乙醇减压提取3次，每次1h，回收乙醇，烘干成药粉，药粉得率为40%，
1g药粉相当于生药2.5g。

木香油方16g·kg-1配制：用0.5%羧甲基纤维素钠溶
液将药粉和挥发油混合，每毫升含药粉0.6g，挥发油0.04g。

木香油方8g·kg-1
配制：用0.5%羧甲基纤维素钠溶液将药粉和挥发油混合，每毫升含药粉0.3g，挥发油0.02g。

木香油方4g·kg-1配制：用0.5%羧甲基纤维素钠溶液将药粉和挥发油混合，每毫升含药粉0.15g，挥发油0.01g。

复方脑蛋白水解物(安徽金太阳生
化药业有限公司，批号：1306191)；红四氮唑(上海灵锦精细化工有限公司，批号：2008050l)。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10 ELISA试剂盒(上海依科赛生物制品有限公司)。

1.2 方法
1.2.1 分组、预防性给药将实验大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、复方脑蛋白水解物组(0.013 g·kg-1)、木香油方组(4、8、16g·kg-1)，假手术组10只，其
他各组大鼠30只。

连续给药3d，灌胃体积均为10mL·kg-1，假手术组和模型组
大鼠给同体积的0.5%羧甲基纤维素钠灌胃，第3天给药后开始制备大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型。

1.2.2 模型制备[4] 采用改良的线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型，术前
禁食24h，自由饮水。

用水合氯醛(0.35g·kg-1)麻醉大鼠，仰卧位固定。

术区常规消毒，沿颈正中线切口，钝性分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉和翼腭动脉，结扎颈外动脉，在近心端结扎右侧颈总动脉。

把直径为0.26mm的尼龙线(在
18mm处做好标记)轻轻插入到大脑中动脉，尼龙线18 mm标记处刚好通过颈内
动脉和颈外动脉分叉处停止插入。

固定线栓，逐层缝合。

术中、术后保温至动物清醒。

中动脉阻断2h后，适当抽出线栓约10 mm，剪去漏出于皮肤外的线栓，进
行再灌注。

假手术组仅钝性分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉和翼腭动脉。

1.2.3 检测指标及方法采用Zea Longa 5级评分法[5]对脑缺血再灌注后4h进行
首次评分，0和4分者剔除，1至3分者纳入实验。

Zea Longa 5级评分设置如下：无神经损伤症状，评为0分；不能完全伸展左侧前爪，评为1分；向左侧转圈，
评为2分；向左侧倾倒，评为3分；不能自发行走，意识丧失，评为4分。

1.2.4 干预给药及处理为考察木香油方对大鼠脑缺血再灌注损伤后24和48h的干预作用，每组模型成功且存活4h以上的评分在1至3分的大鼠随机分为两个时间组，每组8只，按照预防给药的剂量分别于再灌注后4、23和47h各灌胃给药1次。

于再灌注24和48h取相应时间组大鼠股动脉血液，分离血清待测。

1.2.5 脑缺血再灌注损伤大鼠血清炎症因子的测定按照各试剂盒说明书测定血清
IL-1β、IL-4、IL-10以及TNF-α的含量。

1.2.6 脑梗死比率的测定于再灌注后24和48h，每组取8只大鼠，股动脉取血后处死，冰浴下取全脑，脑组织于-20℃冷冻约10min后取出，每2mm冠状位切片，用1%的红四氮唑溶液于37℃避光染色30min，梗死区被染成白色，正常区
域为红色，用镊子和手术刀仔细分开白色和红色区域，分别精密称取重量，计算脑梗死比率。

脑梗死比率=梗死部分重量(g)/全脑重量(g)×100%。

1.3 统计学方法
所有数据采用SPSS 17.0 统计软件进行分析，计量数据以均值±标准差±s)表示，
组间均值比较采用单因素方差分析，显著性水平α=0.05。

2.1 木香油方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分的影响
假手术组大鼠无神经功能缺失体征，评分为0；模型组评分增高；脑缺血再灌注损伤后24h，与模型组比较，复方脑蛋白水解物及木香油方4g·kg-1和8g·kg-1组
大鼠的神经功能评分明显降低(P均<0.05)，而木香油方16g·kg-1组神经功能评
分降低不明显(P>0.05)。

脑缺血再灌注损伤后48h，与模型组比较，复方脑蛋白
水解物及木香油方4、8和16 g·kg-1组大鼠的神经功能评分明显降低(P均<0.05)；木香油方三个剂量组及复方脑蛋白水解物组之间神经功能评分差异均无统计学意义(P均>0.05)，见表1和表2。

2.2 木香油方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死比率的影响
大鼠脑缺血再灌注损伤后24和48h，与模型组比较，复方脑蛋白水解物及木香油方4、8和16 g·kg-1组脑梗死比率明显降低(P<0.05或<0.01)，木香油方三个剂量组之间脑梗死比率差异无统计学意义(P>0.05)。

见图1、图2(前插1)和表3。

2.3 木香油方对脑缺血再灌注损伤大鼠血清炎症因子的影响
脑缺血再灌注损伤后24h，与假手术组比较，模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)；与模型组比较，复方脑蛋白水解
物及木香油方4和8 g·kg-1组均可降低大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α
水平(P<0.05)，而木香油方16 g·kg-1仅明显降低IL-10和TNF-α(P<0.05)。

脑
缺血再灌注损伤后48h，与假手术组比较，模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-10
和TNF-α水平均显著升高(P<0.05或<0.01)；与模型组比较，复方脑蛋白水解物及木香油方4和8 g·kg-1组均可降低血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-
α(P<0.05)，而木香油方16 g·kg-1组IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α，差异无统
计学意义(P>0.05)。

木香油方三个剂量组之间比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4和表5。

缺血和再灌注损伤是缺血性卒中的主要诱因，缺血/再灌注后氧化应激、兴奋性氨
基酸毒性、炎症损伤及细胞凋亡等诸多因素是其主要发病机制；这些环节互为因果，彼此重叠，形成恶性循环，最终导致细胞凋亡或坏死。

近年来研究表明，在脑卒中早期及急性期，氧化应激促发炎症反应是导致脑损伤的重要因素；脑缺血再灌注时，氧化应激会触发致炎因子(TNF-α、IL-1和IL-6)以及抗炎因子(IL-4和IL-10)的异
常表达，引起更严重的炎症反应，加重病情[6-8]。

复方脑蛋白水解物是从健康猪新鲜大脑组织中提取的一种活性肽类水解物，含有多种人脑必需氨基酸及脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等，可以通过血脑屏障，具有促进脑内蛋白质合成，抗氧化等作用，临床用于颅脑外伤、脑血管病后遗症等。

回族医药是回回民族丰富的医药遗产，是阿拉伯伊斯兰医学的一支，是祖国医学的
重要组成部分。

四元(即水、火、气、土)学说为回医理论基础。

回医认为脑卒中是因为“四元”运行紊乱而妄行引起的疾病。

据《回回药方》记载，脑卒中为回医学“风门”范畴，归属在左瘫右痪、口眼歪斜类。

左瘫右痪、口眼歪斜系由七窍微弱、筋中有湿，加之做重事、惊恐或大喜等而致脑脉弊阻，临床出现突然昏仆、半身不遂、口舌歪斜、言语蹇涩或失语、偏身麻木等症状[1,9-10]。

目前，已有学者围绕《回回药方》记载治疗脑卒中的复方进行了相关研究，如蜜煎菖蒲方、扎里努思方等[11-13]，而木香油方治疗脑卒中的现代研究尚未见报道。

木香油方由木香、法
而非荣及阿吉而哈而哈等五味药组成。

已有研究表明，其组成药味或其成分均具有一定的抗氧化应激、抗炎和抗凋亡作用。

比如，木香中的去氢木香内酯和木香烃内酯，在较低浓度(1μM)下即具有较强的抗炎活性，其抗炎作用与抑制核转录因子(NF-κB)和TNF-a水平以及调节多巴胺代谢相关基因有关[14-15]。

醋制法而非荣
可以抑制氧化损伤，减少细胞凋亡[16]；胡椒中的胡椒碱可通过降低IL-1β、IL-6、TNF-α的表达，减少脑缺血后的炎症反应[17]。

目前，采用MCAO方法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型用来模拟临床脑卒中是经典的方法。

国内外研究人员常采用此大鼠模型进行药物作用及机制研究，但选取再灌注后的时间点不同。

再灌注后24h为常用的时间点，再灌注后的其他时间点也
经常选用，如再灌注后6h、48h、72h、96h、7d及14d等[18-22]。

本研究为
观察木香油方对脑缺血再灌注损伤的保护作用及初步机制，选取大鼠脑缺血再灌注后24和48h作为观察点。

本实验结果表明，回药木香油方可以降低脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分和脑梗死比率，但脑缺血再灌注后24h神经功能评分和脑梗死比率略高于48h。

其作
用机制可能与降低脑缺血再灌注损伤后IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α炎症因子水平有关，但这些炎症因子的含量在脑缺血再灌注后24和48h无明显差异。

同时，木香油方抗脑缺血再灌注损伤的作用无剂量依赖性，木香油方高剂量(16 g·kg-1)
降低炎症因子作用没有8和4 g·kg-1剂量组明显，其具体原因有待进一步研究。

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