金银花细胞悬浮培养体系的建立研究

2019年第6期现代园艺的横径，这被称为果肉的肩宽。

（３）测量果实最宽处的横切面积，这被称为果肉厚度。

（４）全面运用电子天平测量一个果实的重量，这也就是常见的单果重。

（５）测量辣椒成熟之后的形状，这被称为果实的形状。

４结果分析
４．１植物性状分析
由表１可以看出，川辣２号植株属于特早株型开展，抽
发侧枝能力很强。

植株在平时比较容易发生光合作用，且也有很强的抵御病虫害的能力。

从这一点上来说，要比其他４个品种表现的更优秀。

４．２产量和经济效益
从表２可以看出，川辣２号的温室产量为２６８６．３４ｋｇ，为
５个参试品种产量最高的，比温室平均产量要高。

川辣２号的温室平均收入为５９１５．１５元，比温室的平均收入也要高。

５结语
根据试验结果，全面分析上述５个辣椒品种的生长时期
和果实性状，并在之后全面分析植物形状、产量和经济效益，可以看出川辣２号有较好的商品外观性，且植株光合作用和防治病虫害的效果也较好。

之后，果实食用的过程中并不存在皮渣感，口感也相对较好。

所以适宜引入本地被推广种植。

参考文献
［１］杨婷，李小红，孙建勇，等．塑料大棚辣椒栽培技术要点［Ｊ］．农业科技信
息，２０１５（３）
（责任编辑禾初）
品种６６７ｍ２株数单果重（ｇ）单株果数（个）
单株产量（ｋｇ）
每座温室产量（ｋｇ）
每座温室收入（元）
韩国辣椒王子３８００３１．０６３３．４５１．０６２４５０．２２５３９０．５６方椒１号３７６０８７．６０１１．３５１．００２３２６．００５１１６．００川优１９３８５０５３．５１７．９５０．９４２２７９．６５５０１３．１７线椒１号３９００８９．６９．０５０．８２１９５６．５４４３０６．８５川辣２号
３８６０
５８．７
１９．１５
１．１３
２６８６．３４
５９１５．１５
表２
试验参试品种的产量结构
金银花细胞悬浮培养体系的建立研究
祖恩凡
赵晨晨张凌霄
钱晶晶
（安徽科技学院，安徽
凤阳
２３３１００）
摘
要：以金银花脱毒苗为试材，研究了外植体、培养基对金银花疏松愈伤组织的诱导以及悬浮培养液中激素种类
及其浓度和初始接种量对金银花悬浮细胞生长的影响。

结果表明：幼叶最易诱导愈伤组织；细胞悬浮培养最佳培养液为：ＭＳ＋６－ＢＡ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ；最佳初始接种量为６０ｇ／Ｌ。

关键词：金银花；疏松愈伤组织；细胞悬浮培养
金银花（Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａ）为忍冬科忍冬属多年生半常绿藤本植物［１］，有研究指出，金银花含有大量化学成分，如挥
发油中多有不饱和烯萜类和芳香醇类物质［２、３］
、有机酸类［４］、黄
酮类［５］和皂苷［６］等。

金银花含有大量的化学成分，具有清热解毒、疏散风热的功能，用于治疗温病发热、风热感冒、咽喉肿痛、肺炎、丹毒、蜂窝状组织炎和痢疾等多种疾病，为临床最常用中药之一［７］。

金银花作为食品、饮品应用广泛，且市场前景广阔［８－１１］。

近年来，大部分提取物都是采用金银花植物提取，若采用人工栽培方式培育［１２］，
生长周期相对较长；而植物组织或细胞培养具有不受环境和季节影响、培养周期短等优点。

１材料与方法
１．１试验材料
外植体来源于安徽科技学院种植基地，采集健壮的无病
虫害金银花的新生嫩茎，去除叶片作为外植体，用流水冲洗１０ｍｉｎ后备用。

１．２试验方法
１．２．１外植体消毒。

放入外植体，用无菌水冲洗３～４次。

将外植体放入超净工作台中，用无菌水冲洗３次，分别用双氧水
中浸泡消毒７ｍｉｎ，再用无菌水冲洗５次，最后将冲洗好的材料放于滤纸上备用。

１．２．２愈伤组织诱导。

将茎切成小段，处理叶片时则在叶脉处轻轻划上３～４道伤口，而后将截面朝向培养基，固体培养基均为：ＭＳ＋６－ＢＡ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ。

１周后，比较不同外植体诱导形成的愈伤组织性状及生长状况。

试验中不同外植体接种为一组试验，每组做３个重复，取平均数绘制生长曲线。

１．２．３诱导率与褐化率的统计。

诱导率（％）＝形成愈伤组织的外植体块数／接种外植体块数×１００；褐化率（％）＝褐化愈伤组织块数／愈伤组织总数×１００。

１．２．４细胞悬浮培养。

继代２次后，选择生长旺盛、结构疏松的愈伤组织块，用镊子夹碎或用小刀分割得到愈伤组织碎块，转移到装有ＭＳ液体培养基的三角瓶中进行悬浮培养，置于摇床内１１０ｒ／ｍｉｎ，２６℃振荡培养，每７ｄ继代１次，继代时培养物用２００目的灭菌细胞筛过滤，除去大细胞团和残渣，得到一定体积的小细胞团或单细胞悬浮液。

试验过程中采用不同激素（６－ＢＡ、ＮＡＡ和２，４－Ｄ）及不同浓度的组合（表２）比
试验研究
５--
DOI:10.14051/ki.xdyy.2019.06.002
2019年第6期
现代园艺较不同激素及浓度处理对金银花悬浮细胞生长的影响。

建立金银花细胞悬浮体系最优培养体系。

试验中不同激素组合为一组试验，每组做３个重复，取平均数绘制生长曲线。

１．２．５接种量对金银花悬浮细胞生长的影响。

选取起始接种量４，６，８ｇ／Ｌ，研究不同接种量对金银花悬浮细胞生长的影响。

每３ｄ观察生长情况，并分别取得细胞称鲜重。

试验中每个接种量为一组实验，每组做３个重复，取平均数绘制生长曲线。

２结果与分析
２．１外植体对愈伤组织诱导的影响
表１数据中显示，幼叶诱导形成的愈伤组织较为疏松，
生长较快，褐化率较低；老叶诱导形成的愈伤组织也较为疏松，褐化率低，但生长缓慢；而嫩茎诱导形成的愈伤组织较为坚硬，褐化率高。

因此该试验选择金银花的幼叶作为外植体。

２．２激素对金银花细胞培养诱导的影响
由表２可知，不同的激素种类和不同浓度配比对金银花愈伤组织的诱导有明显的影响。

６－ＢＡ含量越高诱导的细胞悬浮液颜色越绿，且分散性不好，不适合细胞悬浮培养。

而２，４－Ｄ含量较高的组合中诱导的培养液颜色为黄色，分散性较好。

试验显示，ＭＳ＋６－ＢＡ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋０．２ｍｇ／Ｌ是金银花细胞悬浮适合的激素组合。

２．３金银花细胞悬浮培养
金银花细胞悬浮培养采用的液体培养基激素配比与诱
导愈伤的固体培养基相同。

结果发现，细胞生长经历了４个阶段：迟滞期、快速生长期、平衡期和衰亡期，表现为典型的Ｓ形生长曲线。

液体悬浮培养条件下，细胞的生长周期为１５ｄ（图１）。

２．４
初始接种量对金银花悬浮细胞生长的影响
初始接种量对金银花细胞悬浮培养的影响，初始接种量按每瓶（２５ｍＬ培养液）接种鲜重１、１．５、２ｇ的愈伤组织，接种于液体培养基中，使细胞培养液浓度为４０、６０、８０ｇ／Ｌ。

图１显示，接种量较低时细胞的生长较为缓慢，接种量高时细胞出现了褐化死亡，培养液变为褐色。

而接种量为低处理组的生长期最长，细胞生长量最大。

初始接种量对细胞的增殖有明显的影响，初始接种量达到一定的值后细胞才能增殖，这是由于植物细胞的群集效应
而引起的；另一方面，接种量过高则细胞密度大，导致培养液中的养分很快被耗尽，同时容易积累有害物质，最终导致细胞衰老，细胞的生长量随即逐渐减少。

该研究结果表明，６０ｇ／Ｌ为金银花细胞悬浮培养最适初始接种量。

３结论与讨论
金银花为我国传统中药材，
其历史悠久。

目前，对于金银花无性繁殖的文章中涉及组织培养的研究较多，未查阅到金
银花细胞悬浮培养的相关文献。

本试验采用ＭＳ基础培养基，通过外植体选择、激素选择和起始接种量的研究初步建立起了金银花细胞悬浮体系。

试验中，最适外植体为金银花幼叶；最适悬浮培液为：ＭＳ＋６－ＢＡ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋０．２ｍｇ／Ｌ，最佳起始接种量为６０ｇＬ。

通过本次试验建立起金银花细胞悬浮培养体系并为今后的金银花细胞产物提取打下基础。

参考文献
［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．北京：化学工业出版社，２０００
［２］李会军，张重义，李萍．忍冬不同药用部位挥发油成分分析［Ｊ］．中药材，２００２（４）
［３］候冬岩，回瑞华，杨梅．抗病毒草药金银花的化学成分分析［Ｊ］．鞍山师范学院学报．２００３（４）
［４］娄红祥，郎伟君，吕木坚．金银花中水溶性化合物的分离与结构确定［Ｊ］．中草药．１９９６（４）
［５］柴兴云，王林，宋越等．山金银花中黄酮成分的研究［Ｊ］．中国药科大学学报，２００４（４）
［６］ＣｈｅｎＭ．ＣｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｍａｃｒａｔｈｏｉｄｅｓＰａｒｔ１［Ｊ］．ＣｈｉｎＣｈｅｒｎＬｅｔｔ，１９９０（１３）
［７］何晶．金银花的药理作用及临床应用［Ｄ］．天津市第三中心医院：天津药学，２００８
［８］谭政委．金银花化学成分及其药理学研究进展［Ｍ］．河南省农业科学院芝麻研究中心：安徽农业科学，２０１８
［９］赵忠良．金银花水溶性抗菌物质的提取及其抑菌效果研究［Ｊ］．中国生物制品学杂志，２００６（２）
［１０］黄喜如，刘伟娜，曹冬．金银花的化学成分药理作用研究评析［Ｊ］．中医药学刊，２００５（３）
［１１］ＳｈｉｍｏｄａＨ，ＳｅｋｉＥ，ＡｉｔａｎｉＭ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｇｒｅｅｎｃｏｆｆｅｅｂｅａｎｅｘｔｒａｃｔｏｎｆａｔａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｇａｉｎｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＢＭＣＣｏｍｐｌｅ－ｍｅｎｔａｒｙａｎｄＡｌｔｅｒｎａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００６（９）
［１２］张山山，黄璐琦，袁媛．栽培金银花农艺性状的数量分类学研究［Ｊ］．中国中药杂志，２０１４（２９）
（责任编辑张芝）
外植体诱导率（％）
愈伤组织状态生长状况褐变率（％）
嫩茎９６疏松、浅黄色生长较快２０幼叶８４较疏松、黄绿色生长较慢３６老叶
７６
坚硬、深绿色
生长极慢
４８
表１
不同外植，体对金银花愈伤组织诱导的影响
培养基
代号生长调节剂细胞悬浮液生长状态
６－ＢＡＮＡＡ２，４－Ｄ生长状态表面特征１００．８０生长较慢分散性不好，淡黄色２０．４０．６０生长慢分散性不好，淡黄色３０．４０．８０．２生长较快分散性较好，黄褐色４０．６０．５０生长快分散性较好，黄褐色５
０．６
０．５
０．２
生长极快
分散性好，黄褐色
表２
不同培养基对金银花愈伤组织生长的影响
图１初始接种量对金银花悬浮细胞鲜重的影响
试验研究６--。