miR-122-5p靶向FGFRL1通过PI3KAKT信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

2021 ,Jan ；49( 1) ：5-12
・5・
现 代 医 皆Modern Medical Journal
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•论 著・
miR-122-5p 靶向 FGFRL1 通过 PI3K/AKT 信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭
魏俊，杨琨
(孝感市中心医院神经外科，湖北孝感342000)
［摘要］目的：探讨微小RNA-122-5p(miR-122-5p)对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能作
用机制。

方法：采用qRT-PCR 和Western blotting 检测HEB 细胞及胶质瘤SHG44、U87细胞中miR-122-5p 、 成纤维细胞生长因子受体样1 ( FGFRL1)的表达；MTT 、Transwell 小室实验分别检测miR-122-5p 过表达与敲 低FGFRL1表达对SHG44细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响；双荧光素酶报告基因检测miR-122-5p 与
FGFRL1基因的靶向关系。

FGFRL1过表达验证m i R-122-5p 对SHG44细胞增殖、迁移及侵袭的作用。

采用
Western blotting 检测MMP2.MMP9及PI3K/AKT 信号通路蛋白的表达水平。

结果：胶质瘤细胞中miR-122-
5p 的表达下调,FGFRL1的表达上调；miR-122-5p 过表达或敲低FGFRL1可显著抑制胶质瘤细胞增殖、迁移
及侵袭能力，抑制MMP2、MMP9、p-PI3Kp85、p-AKT 表达。

双荧光素酶报告实验证实FGFRL1基因是miR- 122-5p 的靶基因。

FGFRL1过表达可逆转miR-122-5p 过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。

结论:miR-122-5p 可负向调控FGFRL1表达而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭，其可能通过调控PI3K/
AKT 信号通路而发挥作用。

［关键词］胶质瘤；微小RNA-122-5p ；成纤维细胞生长因子受体样1；增殖；迁移；侵袭
［中图分类号］R739.41 ［文献标识码］A ［文章编号］1671-7562(2021)01-0005-08
doi ：10.3969/j. issn. 1671-7562.2021.01.002
［收稿日期］2019-07-31 ［修回日期］2020-09-27
［基金项目］湖北省卫生健康委员会联合基金资助项目(WJ2019H251)
［作者简介］魏俊(1974-),男，湖北孝感人，副主任医师。

E-maiI ：2123692743@
［通信作者］杨琨 E-mail ：420981057@qq. com
［引文格式］魏俊,杨琨.miR-122-5p 靶向FGFRL1通过P13K/AKT 信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭［J ］.现代医学,2021,49(1):5-12.
•6•现代医学(Modem Medical Journal)2021年1月，49(1)
miR-122-5p targeting FGFRL1inhibits proliferation,migration and
invasion of glioma cells by PI3K/AKT pathway
WEI Jun,YANG min
(Department of Neurosurgery,Xiaogan Central Hospital,Xiaogan342000,China)
[Abstract]Objective:To investigate the effects of microRNA-122-5p(miR-122-5p)on the proliferation, migration and invasion of glioma cells and its possible mechanism.Methods:qRT-PCR and Western blotting were used to detect the expression of miR-122~5p and fibroblast growth factor receptor-like1(FGFRL1)in HEB cells and glioma SHG44and U87cells.MTT assay and Transwell chamber assay were used to detect the effects of niiR-122~5p overexpression and knockdown of FGFRL1on proliferation,migration and invasion of SHG44cells.The dual luciferase reporter gene was used to detected the target relationship between miR-122-5p and the FGFRL1 gene.Overexpression of FGFRL1verified the effect of miR-122-5p on proliferation,migration and invasion of SHG44cells.The expression levels of MMP2,MMP9and PI3K/AKT signaling pathway proteins were detected by Western blotting.Results:The expression level of miR-122-5p was significantly decreased in glioma cells,while
the expression level of FGFRL1was significantly increased.Overexpression miR-122-5p or knockdown FGFRL1 significantly inhibited the proliferation,migration and invasion of glioma cells and inhibited the expression of MMP2,MMP9,p-PI3Kp85and p-AKT.The dual luciferase reporter assay confirmed that the FGFRL1gene was a target gene for miR-122~5p.Overexpression of FGFRL1reversed the inhibitory effect of miR-122-5p overexpression
on proliferation,migration and invasion of glioma cells.Conclusion:miR-122~5p can negatively regulate FGFRL1 expression and inhibit glioma cell proliferation,migration and invasion,which may play a role in regulating PI3K/ AKT signaling pathway.
[Key words]glioma；microRNA-122-5p；fibroblast growth factor receptor-like1；proliferation；migration；invasion
脑胶质瘤是一种恶性程度较高的颅内恶性肿瘤，目前对其治疗效果不佳，患者预后生存期较短,严重影响患者生存质量U切。

脑胶质瘤具有极强的浸润性，导致患者术后复发率高⑶。

因此，探究脑胶质瘤发病机制有助于发现新型治疗方法而提高治疗效果，既往研究⑷表明，遗传、化学致癌物等可能通过改变胶质瘤发病相关基因表达而促使癌基因激活及抑癌基因失活最终引发胶质瘤。

微小RNA-122-5p(microRNA-122-5p,miR-122-5p)通过靶向MYC而抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡151o LINC01296可通过靶向抑制miR-122-5p而促进肝细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭⑹但miR-122-5p对胶质瘤细胞恶性生物行为的影响及其作用机制尚未可知。

靶基因预测⑺显示，成纤维细胞生长因子受体样1(fibroblast growth factor receptor-like1,FGFRL1)基因可能是miR-122-5p的靶基因，FGFRL1可促进卵巢癌恶性进展。

miR・210-3p 通过靶向抑制FGFRI」而抑制膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭⑻。

miR-122-5p是否可通过靶向调控FGFRL1而参与胶质瘤发生及发展过程尚未可知。

相关研究结果⑼显示，通过抑制磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,P13K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路激活可抑制胶质瘤细胞迁移及侵袭能力，从而减缓胶质瘤发生及发展进程。

本研究主要探讨miR-122-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响，旨在为揭示胶质瘤发病机制提供新思路，
1材料与方法
1•1材料与试剂
HEB细胞及胶质瘤SHG44、U87细胞均购自上海医学科学院细胞所。

DMEM培养基购自美国Gibco公司；Transwell小室与Mgteigel基质胶购自美国BL)公司；MMP2、MMP9、FGFRL1抗体均购自美国Santa Cruz 公司；磷酸化的P-PI3Kp85、p-AKT抗体均购自美国Cell Signaling Technology公司;miR-122~5p mimics及阴性对照(miR-con)、miR-122-5p抑制物(anti-miR-122-5p)及阴性对照(anti-miR-con)均购自西安沃尔森生物技术有限公司；转染试剂Lipofecta mine2000购自美国Invitrogen公司；qRT-PCR试剂盒购自美国Gene
魏俊，等.miR-122-5p靶向FGFRL1通过PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭•7•
Copoeia公司；胰蛋白酶购自德国Miltenyi Biotec公司; Trizol试剂与反转录试剂盒均购自大连宝生物工程有限公司:FGFRL1小干扰序列（si-FGFRLl）及阴性对照（si-con）均购自上海吉玛制药技术有限公司；MTT购自美国Sigma公司。

1.2方法
1.2.1细胞转染及分组HEB细胞与胶质瘤SHG44、U87细胞培养于含有体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中，放入37七、体积分数5%CO2培养箱内培养，收集对数生长期胶质瘤SHG44细胞接种于6孔板，待细胞生长密度为50%时进行转染。

根据转染物不同将SHG44细胞随机分为NC组（不进行任何处理的细胞）、miR-con组（转染miR-122-5p mimics 阴性对照）、miR-122-5p组（转染miR-122-5p mimics）、si-con组（转染si-FGFRL1阴性对照）、si-FGFRLl组（转染si-FGFRLl）、miR-122-5p+pcDNA-con组（转染miR-122-5p mimics的基础上再转染pcDNA-con）、miR-122-5p+pcDNA-FGFRL1组（转染miR-122-5p mimics的基础上再转染pcDNA-FGFRL1）o转染6h后将培养液更换为含有10%胎牛血清的DMEM完全培养液，继续培养48h,收集对数生长期细胞完成后续实验。

1.2.2qRT-PCR检测细胞中miR-122-5p、FGFRLl mRNA表达水平用Trizol试剂从HEB细胞及胶质瘤SHG44、U87细胞中提取RNA,对miR-122-5p、FGFRLl 的RNA反转录合成cDNA,扩增，按照qRT-PCR法检测细胞中miR-122-5p、FGFRLl mRNA相对表达量。

qRT-PCR反应体系:SYBR Premix Ex Taq D（2x）10pj,cDNA20,上下游引物各0.8口，ROX Reference Dye（50x）0.4p,l,ddH206p,l o反应条件：95七预变性5min；95七变性15s,60t退火60s, 72弋延伸30s,共循环40次。

采用比较阈值（Ct）法定量分析数据,miR-122-5p以U6为内参基因，FGFRL1以p-actin为内参基因，采用2一山。

法计算miR-122-5p、FGFRLl mRNA表达水平。

1.2.3细胞增殖分析收集转染后胶质瘤SHG44细胞，按照1x2孔“细胞密度接种于96孔板（200讪•孔"），每组设置3个复孔及相应空白对照，分别培养24、48、72h后每孔加入20口质量浓度为5mg•ml"的MTT溶液，放入37T恒温饱和湿度培养箱内继续培养4h,弃培养基，每孔加入150山二甲基亚砚（DMSO）,室温避光孵育10min,充分溶解，以空白孔为对照，应用酶标仪490nm波长检测各孔OD值。

实验设置3次重复。

1.2.4体外迁移实验采用Transwell小室细胞运动实验检测细胞迁移能力，小室孔径均为&0“m,收集对数生长期的胶质瘤SHG44细胞，调整细胞密度为1xio6mr',取100M细胞悬液加入Transwell小室的内室，取500口含10%胎牛血清的DMEM完全培养基加入Transwell小室的下室，放入37T、体积分数5%CO?培养箱内继续培养24h,取岀小室，用棉签擦去未穿过膜的细胞,多聚甲醛固定15min,结晶紫溶液染色5min,蒸憎水清洗，风干，置于显微镜下随机选取10个视野计数穿过膜的细胞数，实验设置3次重复。

1.2.5体外侵袭实验无血清DMEM培养基以1：8稀释比稀释Matrigel基质胶。

对数生长期胶质瘤SHG44细胞，用0.25%胰蛋片酶消化细胞制备单细胞悬液，调整细胞密度为1x io6m r',取200门细胞悬浮液加入小室的内室，取500山DMEM完全培养基加入小室的下室，放入37乜、体积分数5%C（）2培养箱内继续培养24h,取岀小室，用棉签擦去未穿过膜的细胞，采用多聚甲醛固定15min,弃多聚甲醛，用结晶紫溶液染色5min,蒸憎水清洗，风干，置于显微镜下随机选取10个视野观察并计数穿过膜的细胞数，实验设置3次重复。

1.2.6miR-122-5p靶基因的预测与验证应用生物信息学软件Starbase预测miR-122-5p的靶基因，结果显示FGFRL1可能为miR-122-5p的潜在靶基因，预测miR-122-5p调控FGFRL1基因的结合序列，设计合成FGFRL13'UTR序列及突变后FGFRL13'UTR序列，将合成的两种目的基因片段分别克隆到psiCHECK-2双荧光素酶报告基因载体，构建FGFRL13，UTR双荧光素酶报告基因野生型载体（WT-FGFRL1）及其突变型载体（MUT-FGFRL1）,重组载体经PCR电泳及基因测序鉴定证明成功构建重组载体。

分别将WT-FGFRLK MUT-FGFRL1与miR-122-5p mimics或miR-con共转染胶质瘤SHG44细胞，应用双荧光素酶检测系统检测其活性。

1.2.7Western blotting检测蛋白表达收集HEB细胞,胶质瘤SHG44.U87细胞及转染后胶质瘤SHG44细胞，用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞置于EP管内，加入细胞裂解液，充分混匀，冰上裂解30min,4七下以12000r•min-1离心10min,吸取上清，采用BCA 法测定蛋白浓度,根据蛋白样品浓度计算蛋白上样体积。

配置10%SDS凝胶，每孔加入30曲蛋白样品，电泳反应条件依次为80V30min J20V90min,待蛋白完全分离。

应用电转法将分离的蛋白凝胶转移至PVDF膜，室温封闭1h,加入一抗（1：1000）后4乜孵
• 8 •现代医学(Modem Medical Journal ) 2021 年 1 月,49 (1)育24 h,再加入二抗(1 : 2 000)室温孵育1 h,TBST 洗 涤3次，每次5 min,加入ECL 化学发光试剂。

应用
Quantityone 软件检测条带灰度值。

1.3统计学处理
应用SPSS 21.0统计软件进行数据分析。

服从正
态分布的实验数据均以灭士s 表示，两组间比较采用独 立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间 两两比较采用LSD-t 检验。

P<0.05为差异具有统计 学意义。

2结 果2. 1
miR-122-5p 及FGFRL1在正常胶质细胞和胶
质瘤细胞系中的表达
相对于HEB 细胞，胶质瘤SHG44、U87细胞中
miR-122-5p 的表达水平显著降低(P < 0. 05 ),而
FGFRL1 mRNA 及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),
见图1、表1。

miR-122-5p 在胶质瘤SHG44细胞中的
表达水平相对较低，因此选取胶质瘤SHG44细胞进行 后续实验。

HEB 细胞 SHG44细胞 U87细胞
FGFRL1
卩-actin
图 1 Western blotting 检测 FGFRL1 蛋白表达
Fig 1 Western blotting was used to detect the protein expression of FGFRL1
表1胶质瘤细胞和胶质细胞系中miR-122-5p 、FGFRLl mRNA 和FGFRL1蛋白表达量
Tab 1 Expression of miR-122-5p, FGFRL1 mRNA and FGFRL1 protein in glioma cells and glial cell lines
细胞
n
相对表达量
miR- 122-5p
FGFRL1 mRNA
FGFRL1蛋白
HEB 纟田胞
9 1.00 ±0. 10
1.00 ±0. 10
0.20 土 0.03
SHG44细胞
90.28 ±0.03a
1.58 ±0. 15a
0.88 ±0.09a U87细胞9
0.59 ±0.06a
2.45 ±0.25a
0.72 ± 0.07a
F 值242.876
151.380245.525
P 值
<0.001<0.001
<0.001
a 与HEB 细胞比较,P<0.05
2.2 过表达miR-122-5p 抑制SHG44胶质瘤细胞增
殖、迁移和侵袭
胶质瘤SHG44细胞中miR-122-5p 过表达，相对
于miR-con 组,胶质瘤SHG44细胞增殖能力显著降低
(P<0. 05),迁移及侵袭细胞数均显著减少(P V 0. 05 ) , MMP2、MMP9蛋白表达量显著降低(P< 0. 05),而miR- con 组与NC 组相比差异无统计学意
义，见图2、表2。

B
NC 组 miR-con 组 miR-122-5p 组
MMP2
MMP9
卩-actin
A. Transwell 检测细胞迁移和侵袭；
B. Western blotting 检测MMP2和MMP9的蛋白表达
图2敲减FGFRL1后SHG44胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的检测结果
A. Trans w ell was used to detect cell migration and invasion ；
B. Western blotting was used to detect the protein expression of MMP2 and MMP9
Fig 2 Knockdown of FGFRL1 inhibited the proliferation , migration and invasion of SHG44 glioma cells
魏俊，等.miR-122-5p 靶向FGFRL1通过PI3K/AKT 信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭・9・
表2过表达miR-122-5p 后SHG44胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的检测结果
Tab 2 Overexpression of miR-122-5p inhibited the proliferation , migration and invasion of SHG44 glioma cells
a 与 miR-con 组比较,P <0. 05
组另0
n
相对表达量
细胞增殖
细胞迁移数量
细胞侵袭数量
miR- 122-5p
MMP2MMP9
24 h 48 h
72 h
Nr 幺R
Q
1.00 ±
1.00 ±
0.75 ±0.36 ±
0.62± 1.25 ±412.36 ±189.26 ±0. 10
0. 10
0.03
0.04
0. 13
0. 12
41.2018.991.02 ± 1.02±
0.70 +
0.35 +
0.60 +
1.22 +
410.77 +
195.85 +
miR-con 组
9
0. 10
0. 100.03
0.05
0.09
0. 12
41.0119.581.88 +0.42 +0.25 +0.32 ±
0.50 +
0.90 +
225.15 ±92.46 ±
miR-122-5p 组
9
0. 18a
0.05
0.08a
0.04
0.07a 0.09a 22.513
9.25*
F 值130.053139.360249.695 2.053 3.73227.53780.488
109.051
P 值
<0.001
<0.001<0.0010. 1500.039<0.001<0.001<0.001
2.3敲减FGFRL1抑制SHG44胶质瘤细胞增殖、迁
移和侵袭与NC 组、si-con 组相比，si-FGFRLl 组胶质瘤 SHG44细胞增殖能力明显降低(P < 0. 05),迁移及侵
袭细胞数显著减少(P < 0. 05) , MMP2、MMP9蛋白表
达水平显著降低(P<0.05),见图3、表3。

MMP2
MMP9
P-actin
NC 组
miR-con 组 miR-122-5p 组
FGFRL1
图3 Western blotting 检测MMP2和MMP9的蛋白表达
Fig 3 Western blotting was used to detect the protein expression of MMP2 and MMP9
2.4 miR-122-5p 靶向 FGFRL1
应用Starbase 软件分析显示,FGFRL1的3'UTR
区存在miR-122-5p 可能的结合位点，见图4A 。

双荧 光素酶报告基因检测系统结果显示，转染克隆有
FGFRL1 -3，UTR 突变型载体质粒实验中，miR-122-5p
组与miR-con 组比较，荧光素酶活性差异无统计学意
义;转染克隆有FGFRL1 -3，UTR 载体质粒实验中，miR- 122-5p 组荧光素酶活性明显受到抑制，与miR-con 组
比较,荧光素酶活性差异具有统计学意义(P < 0. 05 ),
见表4。

Western blotting 检测结果显示，与miR-con 组
相比,miR-122-5p 组FGFRL1蛋白相对表达量显著减
少(0. 25 ± 0. 03 vs 0. 85 ± 0. 08, P < 0. 05 )；与 anti- miR-con 组相比，anti-miR-122-5p 组显著促进 FGFRL1
蛋白的表达(1.25 ±0. 12 vs 0. 86 ± 0.08,P< 0.05) o
见图4B 。

结果说明miR-122-5p 过表达可显著下调靶
基因FGFRL1的表达。

表3敲减FGFRL1抑制SHG44胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭
Tab 3 Knockdown of FGFRL1 inhibited the proliferation , migration and invasion of SHG44 glioma cells
相对表达量_________ __________细胞增殖__________ 细胞迁 细胞侵
二力'J
n
FGFRL1
MMP2MMP924 h
48 h 72 h
移数量
袭数量
NC 组
9
0.85 ±
1.00 土
0.78 ±0.32 ±0.65 ±
1.29 ±415.23 ±185.04 ±0.08
0. 110.080.04
0. 13
0. 12
41.52
18.51
si-con 组
90.86 ±
0.98 ±
0.75 ±0.30±
0.63 ±
1.25 ±
418.22 ±192.36 ±
0.08
0. 10
0.07
0.05
0.090. 1241.82
19.23si-FGFRLl 组
9
0.32 ±
0.40±
0.20±
0.30 ±
0.52 ±
0.93 ±
220.08 ±88.16 ±
0.05 *
0.05 *0.03a
0.040.07a 0.09"
22.018
8.82a
F 值168.412127.463235.9920.632 4.42528.488
87.961115.586
P 值
<0.001
<0.001<0.0010.540
<0.001<0.001<0.001
<0.001
与 si-con 组比较
,P<0.05
・10・现代医学(Modem Medical Joumal)2021年1月,49(1) A
A.Starbase软件对miR-122-5p和FGFRL1结合进行预测示意
图；B.Western blotting检测FGFRL1表达量
图4miR-122-5p靶向调控FGFRL1表达
A.Starbase software predicted the combination of miR-122-5p and
FGFRL1；B.Western blotting was used to detect the expression of
FGFRL1
Fig4miR-122-5p targeted and regulateed FGFRL1expression
表4miR-con或miR122-5p与报告质粒共转染
SHG44细胞后双荧光素酶活性检测
Table4Detection of dual luciferase activity after co­
transfection of miR-con or miR-122-5p with reporter
plasmid into SHG44cells
组另||n
荧光素酶活性
野生型突变型
miR-con组n 1.00±0.10 1.00±0.10 miR-122-5p组90.25±0.03"0.95±0.09，值21.551 1.115
P值<0.0010.281
a与miR-con组比较,P<0.05
2.5FGFRL1高表达可以部分逆转miR-122-5p高表达对SHG44增殖、迁移和侵袭的影响
相较于miR-122-5p+pcDNA-con组，miR-122-5p+ pcDNA-FGFRLl组胶质瘤SHG44细胞增殖能力明显增强（P<0.05）,迁移及侵袭细胞数显著增多（P< 0.05）,MMP2、MMP9蛋白表达水平显著升高（P< 0.05）,见图5、表5。

2.6PI3K/AKT信号通路蛋白的表达
miR-122-5p组胶质瘤SHG44细胞中p-PI3Kp85、P-AKT表达水平显著低于miR-con组（P<0.05）；与miR-122-5p+pcDNA-con组相比，miR-122-5p+ pcDNA-FGFRLl组胶质瘤SHG44细胞中p-PI3Kp85、
FGFRL1
MMP9
图5Western blotting检测FGFRL1、MMP2和MMP9蛋白表达
Fig5Western blotting was used to detect the protein expression of FGFRL1.MMP2and MMP9
P-AKT表达水平显著升高（P<0.05）。

见图6、表6。

3讨论
miRNA表达异常可通过调控下游靶基因表达而参与胶质瘤发生及发展过程〔冋。

张媛等mi研究表
明，miR-374在胶质瘤细胞中呈低表达，miR-374过表达可通过靶向抑制PTTG基因而抑制胶质瘤细胞增殖及侵袭。

申松波等七】研究表明,miR-150在胶质瘤组织中表达下调，上调miR-150表达可抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力。

关于miR-122-5P在胶质瘤发展方面的作用研究尚未见报道，因此本研究初步分析miR-122-5p对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。

miR-122-5p表达异常与黑色素瘤发生及发展过程密切相关⑴】。

肝癌患者血清中miR-122-5p表达水平降低，其可作为临床诊断肝癌的分子标志物帥）。

miR-122-5p通过下调DUSP4而抑制胃癌细胞迁移及侵袭I切。

LncRNA MIR205HG作为miR-122-5p的竞争性内源性RNA（ceRNA）而促进宫颈癌细胞增殖（闵。

与上述研究报道相似，本研究结果表明胶质瘤细胞中miR-122-5p的表达水平降低,miR-122-5p过表达可明显抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭，提示miR-122-5P可能参与胶质瘤发生及发展过程。

进一步研究显示，miR-122-5p过表达后胶质瘤细胞中MMP2、MMP9表达水平明显降低。

通过抑制MMP2、MMP9表达可抑制胶质瘤细胞迁移及侵袭能力"1。

过表达miR-122-5p可通过降低MMP2、MMP9表达减弱胶质瘤细胞迁移及侵袭能力。

通过靶基因预测显示FGFRL1可能是
miR-122-5p
魏俊，等.miR-122-5p 靶向FGFRL1通过PI3K/AKT 信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭・11・
表5 FGFRL1高表达可以部分逆转miR-122-3p 高表达对SHG44增殖、迁移和侵袭的影响
Tab 5 High expression of FGFRL1 could partially reverse the effects of high expression of miR-122-3p on the proliferation , migration and invasion of SHG44
a 与 miR-con 组比较,P <0. 05 ；
b 与 miR-122-5p + pcDNA-con 组比较，P <0. 05
组另IJ
相对表达量
细胞增殖
细胞迁移数量
细胞侵 袭数量
FGFRL1
MMP2MMP9
24 h
48 h 72 h miR-con 组
0.86 ± 1.00 ±
0.77 ±0.38 ±0.65 ± 1.28 ±
415.25 ±
190.25 ±
0.08
0. 10
0.070.05
0.07
0.1341.5119.03miR-122-5p 组
0.24±
0.40±0.25 ±
0.34±0.51 ±
0.93 ±
220.15 ±95.89 ±
0.03"
0.05°
0.03a
0.04
0.06"0.0911
22.01a
9.59"miR-122-5p +
0.25 ±
0.41 ±0.30±0.33 ±0.50±
0.90 ±
224.75 ±92.78 ±
pcDNA-con 组
0.030.05
0.030.04
0.06a
0.09a
22.48
9.28
miR- 122-5p +
0.72 ±
0.85 ±
0.65 ±
0.35 ±0.60±
1.21 ±
386.23 ±
168.28 ±
pcDNA-FGFRLl 组
0.0911
0. 11»
0. 0611
0.04
0.06a
0. 12**
38.63»16.80»
F 值225.920
124.738230.301
2.301
12.0002& 244
91.942
108.833
P 值
<0.001<0.001<0.0010.096
<0.001<0.001<0.001<0.001
p-AKT
p-PI3Kp85
图 6 Western blotting 检测 p-PI3Kp85 和 p-AKT 蛋白的表达
Fig 6 Western blotting was used to detect the protein expression
of p-PI3Kp85 and p-AKT
的靶基因，双荧光素酶报告检测系统及Western
blotting 实验证实miR-122-5p 可靶向结合FGFRL1，并
可负性调控FGFRL1表达。

FGFRL1表达水平升高可 能促进食管鳞癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤发生及发展 过程"呵。

miR-122-5p 可能通过抑制FGFRL1表达
而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭。

为验证上述假 设,在胶质瘤细胞中转染miR-122-5p mimics 的基础上
再转染入FGFRL1过表达质粒,结果发现胶质瘤细胞
增殖、迁移及侵袭能力均得到一定程度的恢复，说明 miR-122-5p 过表达可通过下调靶基因FGFRL1的表
达进而减弱胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力。

同时
本研究进一步分析发现,胶质瘤细胞中miR-122-5p 过
表达可显著抑制PI3K/AKT 信号通路相关蛋白p- PI3Kp85、p-AKT 表达，而共转染FGFRL1过表达质粒
表 6 Western blotting 检测 p-PI3Kp85 和 p-AKT 蛋
白的相对表达量
Tab 6 Western blotting was used to detect the expression of p-PI3Kp85 and p-AKT
组别
相对表达量
p-PI3K P 85
p-AKT miR-con 组90.65 ±0.06
0.72 ±0.07
miR-122-5p 组
90.20±0.02a
0. 15 ±0.02tt
miR- 122~5p +
pcDNA-con 组
9
0.25 ±0.02
0.20 ±0.02
miR-122-5p +
pcDNA-FGFRLl 组
90.55 ±0.05b 0.60 ±0.06b
F 值
255.435
314.419
p 值
<0.001<0.001
a 与 miR-con 组比较，P <0. 05 ； 1）与 miR- 122-5p + pcDNA- con 组比较,P<0.05
后,胶质瘤细胞中p-P13Kp85、p-AKT 表达水平显著升
高。

抑制PI3K/AKT 信号通路可减弱胶质瘤细胞增 殖、迁移及侵袭能力［20'211o 提示miR-122-5p 过表达
可靶向抑制FGFRL1表达而减弱胶质瘤细胞的迁移、
侵袭及增殖能力，其可能通过抑制PI3K/AKT 信号通
路而发挥作用。

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