2020版药典大黄检验操作规程

大黄检验操作规程
执行标准：《中国药典》2020年版一部
规程：
1【性状】本品类圆形、圆锥形、卵圆形或不规则块状，长3~17cm，直径3~10cm。

除尽外皮者表面黄棕色至红棕色，有的可见类白色网状纹理及星点（异型维管束）散在，残留的外皮棕褐色，多具绳孔及粗皱纹。

质坚实，有的中心稍松软，断面淡红棕色或黄棕色，显颗粒性；根茎髓部宽广，有星点环列或散在；根木部发达，具放射状纹理，形成层环明显，无星点。

气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。

2【鉴别】
2.1鉴别（1）
2.1.1仪器与用具：显微镜、玻片。

2.1.2操作步骤：按药材(饮片)及成方制剂显微鉴别法标准操作规程操作。

2.1.2.1本品横切面：根木栓层及皮层大多已除去。

韧皮部筛管群明显；薄壁组织发达。

形成层成环。

木质部射线较密，宽2～4列细胞，内含棕色物；导管非木化，常1至数个相聚，稀疏排列。

薄壁细胞含草酸钙簇晶，并含多数淀粉粒。

2.1.2.2根茎髓部宽广，其中常见黏液腔，内有红棕色物；异型维管束散在，形成层成环，木质部位于形成层外方，韧皮部位于形成层内方，射线呈星状射出。

2.1.2.3粉末黄棕色。

草酸钙簇晶直径20~160µm，有的至190µm。

具缘纹孔导管、网纹导管、螺纹导管及环纹导管非木化。

淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45µm，脐点星状；复粒由2~8分粒组成。

2.2鉴别（2）
2.2.1仪器与用具：酒精灯、试管、木夹。

2.2.2操作步骤：取本品粉末少量，进行微量升华，可见菱状针晶或羽状结晶。

2.3鉴别（3）
2.3.1试剂：甲醇、盐酸、乙醚、石油醚、氨、甲酸乙酯、甲酸、羧甲基纤维素钠、氯仿、大黄酸对照品。

2.3.2仪器与用具：量筒（5ml、25ml）、水浴锅、烧杯、展开缸、点样管、三用紫外分析仪、电子天平（1/10000）、硅胶H薄层板。

2.3.3操作步骤：取本品粉末0.1g，加甲醇20ml，浸泡1小时，滤过，取滤液5ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。

再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～600C）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。

3【检查】
3.1土大黄苷：
3.1.1试剂：甲醇、乙醇。

3.1.2仪器与用具：量筒（5ml）、刻度吸管（1ml）、紫外光灯、电子天平（1/10000）。

3.1.3操作步骤：取本品粉末0.2g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液1ml，加甲醇至10ml，作为供试品溶液。

另取土大黄苷对照品，加甲醇制成每1ml含10µg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸（30:5:5:20:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的亮蓝色荧光斑点。

3.2水分照水分测定法第二法测定，不得过15.0%。

3.3总灰分：不得过10.0%。

3.4杂质不得过3%。

3.5二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法测定，不得过150mg/g。

3.6禁用农药：按农药残留量测定法（通则2341）测定，33种禁用农药不得检出（不得过定量限）。

4【浸出物】照水溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，不得少于25.0%。

5【含量测定】
5.1 总蒽醌
5.1.1试剂：甲醇、0.1%磷酸溶液、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品、盐酸、三氯甲烷。

5.1.2检测方法：高效液相色谱法。

5.1.3仪器与用具：量筒（10ml、25ml、50ml）、量瓶（25ml、50ml）、回流装置、分液漏
斗、超声仪、圆底烧瓶、锥形瓶、高效液相色谱仪、电子天平（1/10000）、药筛。

5.1.4操作步骤：
5.1.4.1色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长为254nm 。

理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

5.1.4.2对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1 ml 含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80µg，大黄甲醚40µg 的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2 ml ，混匀，即得（每1ml 中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16µg，含大黄素甲醚8µg）。

5.1.4.3供试品溶液的制备： 取本品粉末（过四号筛）约0.15g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml ，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液5ml ，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10 ml ，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10 ml ，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml ，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.1.4.4测定法： 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

5.1.4.5计算公式
含量（%）=C R
6101(水分） X R X W A V A ×100%
式中 C R 为对照品的浓度，g/ml 。

A R 为对照品峰面积或峰高。

A X 为供试品峰面积或峰高。

V 为供试品稀释体积，ml 。

W X 为供试品取样量，g 。

允许偏差： 相对标准偏差≤2.0%。

5.1.4.6标准规定：本品按干燥品计算，含芦荟大黄素（C 15H 10O 5）、大黄酸（C 15H 8O 6）、大黄素（C 15H 10O 5）、大黄酚（C 15H 10O 4）和大黄素甲醚（C 16H 12O 5）的总量不得少于1.5%。

5.2游离蒽醌 照高效液相色谱法(QC －SOP －3022－04)测定。

5.2.1 试剂
5.2.2 仪器与用具
5.2.3色谱条件与系统适用性实验 同【含量测定】总蒽醌项下。

5.2.3.1对照品乳液的制备 取【含量测定】总蒽醌项下的对照品溶液，即得。

5.2.3.2供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.5g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml ，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.2.3.3测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。

5.2.3.4计算公式
含量（%）=C R
6101(水分） X R X W A V A ×100%
式中 C R 为对照品的浓度，g/ml 。

A R 为对照品峰面积或峰高。

A X 为供试品峰面积或峰高。

V 为供试品稀释体积，ml 。

W X 为供试品取样量，g 。

允许偏差： 相对标准偏差≤2.0%。

5.2.3.5本品按干燥品计算，含游离蒽醌以芦荟大黄素（C 15H 10O 5）、大黄酸（C 15H 8O 6）、大黄素（C 15H 10O 5）、大黄酚（C 15H 10O 4）和大黄素甲醚（C 16H 12O 5）的总量计，不得少于0.20%。