sds-page凝胶配方及制胶[最新]

sds-page凝胶配方及制胶[最新] SDS-PAGE凝胶配方及制胶
12%分离胶
体积试剂 5ml 8ml 10ml 15ml 25ml 30ml 60ml 90ml 120ml
30%Acr-Bis(ml) 2 3.2 4 6 10 12 24 36 48
1.5M Tris-HCl 1.25 2
2.5
3.75 6.25 7.5 15 22.5 30 PH8.8(ml)
ddH2O(ml) 1.65 2.64 3.3 4.95 8.25 9.9 19.8 29.7 39.6
10%SDS(ul) 50 80 100 150 250 300 600 900 1200
10%APS(ul) 50 80 100 150 250 300 600 900 1200
TEMED(ul) 3 4.8 6 9 15 18 36 54 72
5%浓缩胶
体积试剂 4ml 6ml 8ml 12ml 16ml 20ml 24ml 36ml 48ml
30%Acr-Bis(ml) 0.66 0.99 1.32 1.98 2.64 3.3 3.96 5.94 7.92
1M Tris-HCl 0.5 0.75 1 1.5 2 2.5 3 4.5 6 PH6.8(ml)
ddH2O(ml) 2.74 4.14 5.48 8.28 11.02 13.7 16.56 24.84 33.12
10%SDS(ul) 40 60 80 120 160 200 240 360 480
10%APS(ul) 40 60 80 120 160 200 240 360 480
TEMED(ul) 4 6 8 12 16 20 24 36 48
1、按顺序加溶液，每加完一个溶液摇匀一下。

2、TEMED要在通风橱中加，加入后混匀30秒左右后再注胶;吸打时枪头不出液面，以减少气泡
3、分离胶配好后要用水封顶，聚合至少40min(也可聚合一夜)
4、加入浓缩胶后插梳子(要洗干净)，梳子倾斜插入，避免产生气泡。

聚合0.5-
1h(若不用可先泡在电极液中，第二天再用)，拔梳子时要尽量避免拔歪
5、电泳条件:大胶 500V，15mA/板 9h左右
小胶 500V，15mA/板 1.5-2h左右
(电流根据时间来定，用新电极液时，时间会缩短，此外溴酚蓝条带过了浓缩胶后，可适当加大电流)
10% 2块
大板
30%Arc-Bis 24.448
mL
1.5M 16.8 mL
Tris-Hcl(pH8.8)
分离胶 ddHO 27.367 2
mL
10%SDS 672μl
10%APS 504μl
TEMED 25.2μl
5% 2块大
板(15mL)
30%Arc-Bis 2.4255mL
1.0M 1.837 mL
Tris-Hcl(pH6.8)
浓缩胶 ddHO 10.143mL 2
10%SDS 147μl
10%APS 132.3μl
TEMED 13.23μl。