植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定(优选.)

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赠人玫瑰，手留余香。

2.2 植物体内可溶性蛋白含量的测定

2.2.1材料

新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g）

2.2.2试剂

标准蛋白质溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白质100μg/的标准蛋白溶液;

90%乙醇；85%磷酸(W/V)；考马斯亮蓝G－250溶液

2.2.3仪器设备

分光光度计；量筒；研钵；烧杯；量瓶；移液管；具塞刻度试管；分析天平；恒温水浴；

2.2.4测定方法

0～100μg/ml标准曲线的制作：取六支试管，分别按下表数据配制0～100μg/ml血清白蛋白液1ml。准确吸取所配各管溶液0.1ml，分别放入10ml具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝G—250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2min后，在595nm下比色，绘制标准曲线。

样品提取液中蛋白质浓度的测定：吸取样品提取液1.0ml，放入具塞试管中(每个样品设置两个重复)，加入5Ml考马斯亮蓝G－250溶液，充分混合，放置2min后在595nm下比色，记录吸光值，并通过标准曲线查得蛋白质含量。

结果计算：样品蛋白质含量(mg/g鲜重）=(C*V/a)/W

式中C－查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg）；

V－提取液总体积（ml）；

a－测定所取提取液体积（ml）；

W－取样量（g）。

3 结果分析

3.1 植物体内可溶性糖含量的测定

3.1.1可溶性糖标准曲线

表一：各试管中标准葡萄糖的吸光值

管号0 1 2 3 4 5

葡萄糖含量

0 40 80 120 160 200

（ug）

吸光度0 0.195 0.370 0.518 0.690 0.706

3.1.2芹菜、白菜、菠菜中可溶性糖的吸光值

吸光值样品名称

芹菜白菜菠菜

A1 0.358 0.347 0.333

A2 0.361 0.352 0.327

A3 0.367 0.351 0.327

平均值0.362 0.350 0.329

糖量为80.930μg；白菜样品溶液的含糖量为78.139μg；菠菜样品溶液的含糖量为73.256μg。

3.1.3可溶性糖含量计算

样品含糖量=样品含量（ug）*稀释倍数*100/{样品重（g）*106}g/100g鲜重

样品质量/g 吸光值查表所得含

糖量/μg

稀释倍数可溶性糖含量

/μg 芹菜 1.00 0.362 80.830 100 0.8083 白菜 1.00 0.350 78.139 100 0.7813 菠菜 1.00 0.329 73.256 100 0.7325

由表可知：芹菜中可溶性糖含量最高，白菜中含量居中，菠菜中可溶性糖含量最低。

3.2 植物体内可溶性蛋白含量测定

3.2.1 可溶性蛋白标准曲线

表1 各试管中标准蛋白质的吸光值

管号0 1 2 3 4 5

蛋白质含量

0 20 40 60 80 100

(ug)

吸光度0 0.286 0.578 0.852 0.921 1.250

3.2.2芹菜、白菜、菠菜中可溶性蛋白的吸光值

吸光值样品名称

芹菜白菜菠菜A1 0.095 0.122 0.085

A2 0.102 0.125 0.081

A3 0.097 0.128 0.080

平均值0.098 0.125 0.082

照标准曲线，可以得出：在1g蔬菜样品中移取的1ml样品溶液中，芹菜样品溶液含蛋白量为4.619μg；白菜样品溶液的含蛋白量为6.761μg；菠菜样品溶液的含蛋白量为3.349μg。

3.2.3可溶性蛋白计算

C ——查标准曲线值， ug V T ——提取液总体积， ml Vs ——测样时加样量，ml W F ——样品鲜重，g

4 讨论

通过实验对芹菜、白菜和菠菜体内的可溶性糖和可溶性蛋白的含量进行了测定，了解植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量有利于我们更清楚地了解各种植物，同时通过实验也让我们更加清楚地了解了植物体内可溶性糖和可溶性蛋白在植物生长中的作用。

可溶性糖是植物植物生长发育和基因表达的重要调节因子，它不仅是能量来源和结构物质，而且在信号传导中具有类似激素的初级信使作用。它的主要作用有以下几点：参与植物体内渗透压调节，在干旱环境中植物为了减缓由胁迫造成的生理代谢不平衡，细胞大量积累一些小分子有机化合物，可溶性糖就是这些小分子有机化合物之一，它通过渗透调节来降低水势，维持较高渗透压，保证细胞的正常生理功能；糖类能够以类似植物激素的方式作为一种信号分子存在，在植物的生长、发育、成熟核素哀牢等许多过程中发挥调控作用在种子萌发和种苗发育早期糖类可以调控植物的花转变，并且对植物花转变的调控具有多重效应，糖信号还可以调控叶片的衰老等；糖与植物氮调节之间存在代谢关系，而且不同的糖信号和氮信号转导途径可以在不同水平上相互响应等

)

/ ( 1000 * * * g mg W V V C F

S T

样品中蛋白质含量

植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，可溶性蛋白质含量是一个重要的生理生化指标，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标；在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度，这就需要测定蛋白质含量。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。

参考文献

[1] 基础生物化学实验（第二版）北京高等教育出版社

[2] 何照范.张迪青保健食品化学及其检测技术 1998

[3] 刘魁英食品研究与数据分析 1998

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