Agilent1260HPLC工作原理及简单操作课件

HPLC各模块的工作原理及维护
泵的注意事项
1 ，溶剂的过滤、脱气； 2 ，避免使用腐蚀性溶剂；
3，在满足分析的前提下，尽可能使用 较低的流速—较低的系统压力。
4，更换过滤白头； 5，考虑溶剂的相容性；
• 四元泵：
四元泵多通道比例阀MCGV使 用时注意，缓冲溶液要放在A、 D通道，以避免盐颗粒析出。建 议A通道：水； B、C通道：有 机溶剂； D通道：缓冲溶液。
• 内容：
一、 HPLC各模块的原理及维护； 二、开机/关机操作；
三、讨论； 四、评估。
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一 、 HPLC各模块工作原理及维护
HPLC： 高效液相色谱仪(High Performances
Liquid Chromatography)。 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检
测器、记录仪等几个部分组成。 工作时储液器中的流动相被高压泵打
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HPLC各模块的工作原理及维护
检测器— DAD
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HPLC各模块的工作原理及维护
检测器— FLD
• FLD(Fluorescence Detector) 荧 光检测器：是利用某些溶质在受 到紫外光激发后，能发射可见光
(荧光)的性质来检测的。 •FLD是一款具有高度灵敏度和高 度选择性的检测器。其激发光源 是氙灯，此灯不需要预热。 •其流通池和DAD的一样，也要定 期用异丙醇冲洗，以保证性能。
入系统，样品溶液经样品进样器进入流 动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中 具有不同的分配系数，在两相中做相对 运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分 配过程，各组分在移动速度上产生较大 的差别，被分离成单个组分依次从柱内 流出，通过检测器时，样品浓度被转换 成电信号传送到记录仪，数据以图谱形 式打印出来。
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HPLC各模块的工作原理及维护
关于溶剂
• 所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水； • 所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤
有机相应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤膜只 能用一次，不能重复使用； • 如果没有在线脱气机，所有溶剂应经过超声脱气； • 水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要 超过两天； • 如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮 化钠； • 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂； • 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂； • 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿 下用强酸(35%硝酸)浸泡时，用水冲洗，但不要使 用超声处理。
3. 用纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为 1ml/min 。本步骤主要是保护色谱柱。
4. 如果未使用缓冲液，上面1、2两步骤可免去，直接用 纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为1ml/min。
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. 三、实验及讨论 更换过滤白头(参照PPT 9-11 )
. 四、评估
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开机/关机操作
指示灯状态
每个部件接通电源后 LED灯显示绿色
6种LED仪器状态：
关 机 power off 准 备 进 样 power on 没 准 备 好 Not Ready 运 行 Run
故障Error 驻留Resident
Blink
黑Black 黑Black 黄Yellow 绿Green 红Red
4，打开Seal Wash清洗液开关， 清洗10min。
5，打开清洗阀，排除系统中的 气泡，平衡差不多30min.
6, 拧上清洗阀，将流量设为所 需流速，平衡30min即可以打 样。
• 关机操作： 1，如果使用了缓冲溶液流动相
应先用水冲洗系统30min 。 2，用纯有机相冲洗系统30min 。 3 ，在工作站上关闭各个模块 。 4 ，退出工作站，关闭计算机 。 5，关闭LC各个模块的电源。
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HPLC各模块的工作原理及维护
更换过滤白头
清洗阀PurgeValve
过滤白头
金密封垫 聚四氟乙烯密封垫
• 在清洗阀中的过滤白头需要更换，在清 洗状态下，设置流量为5ml/min，此时 系统压力如果超过10bar，则需更换过 滤白头。
• 更换步骤：
1 ，关闭泵电源；
2，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔 掉废液管；
黄 闪 烁 Yellow
blinking
仪器LED 状态显示
电源开关显示
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开机/关机操作
清洗阀Purge Valve
逆时针打开清洗阀
• 逆时针旋转打开清洗阀，清洗 阀打开时，液体从废液管中流 出，为清洗状态。
• 更换溶剂后，打开清洗阀，设 置流量5ml/min，冲洗5-10 min.
• 顺时针旋紧清洗阀为关闭状态, 此时流动相由毛细管流向进样 器.
6，尽可能使用新鲜的水；
7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要 选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。
8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议 使用聚乙烯密封垫，部件号为09051420，在0—200Bar下使用聚乙烯 密封垫比标准密封垫更耐磨损。
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HPLC各模块的工作原理及维护
样品准备
关于进样器
过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品
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HPLC各模块的工作原理及维护
检测器— RID
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二、 开机/关机操作
Seal wash Computer
Power Chemstation
Purge
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二、 开机/关机操作
• 开机操作：
1，打开计算机。
2，打开LC各模块的电源，等待 仪器自检完毕， 1-2min。
3，双击桌面上“Instrument 1 Online”图标，进入化学工作 站,在工作站打开各工作模块。
阵列作为检测元件的UV-VIS检测器. • DAD的光源—氘灯有一定的半衰期，
一般为1000小时左右，所以在没有样 品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘 灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关 ,这样也会影响寿命。同时，打开灯需 要预热10min 左右，灯使用时间越长， 预热的时间也要越长。 • 流动池污染后，会造成灵敏度下降、 噪声加大，应避免脏的样品进入流动 池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持 流动池性能有一定好处。
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HPLC各模块的工作原理及维护
关于在线真空脱气机
• 在线真空脱气机的管路容量为 12ml，压力范围为110Torr190Torr。
• 为保证脱气机的良好使用性能， 在下述情况下需要用注射器抽洗 脱气机管路，每个通道使用不低 于30ml的异丙醇。
1 ，新的脱气机或新的管路； 2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有
毛细管出口,流向进样器
顺时针关闭清洗阀
废液管,清洗阀打开 时溶剂由此流向废液 瓶.
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开/关机操作
整台液相色谱仪的维护
每次用过仪器后必须做!
1. 在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟，此时 必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。
2. 关上排放阀，用90%+10%的水、甲醇溶液冲洗整个系 统，时间为15~20分钟，流量1ml/min。本步骤主要是冲 洗干净系统内其他含盐的部位。
进样量尽量小
样品完全溶解在流动相中
样品没有完全溶解
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HPLC各模块的工作原理及维护
关于进样器
准备位置
调用样品瓶 吸样品
进样和运行位置
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标准进样过程 ...
HPLC各模块的工作原理及维护
自动进样器
.样品要干净、经过过滤。 • 洗针：把样品残留降低到最
小限度，可降低进样的记忆 效应，洗针瓶最好不要加瓶
关于色谱柱保护
过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。 柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围 不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相
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HPLC各模块的工作原理及维护
检测器— DAD
• DAD (Diode Array Detector)二极 管阵列检测器，是以光电二极管
3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来； 4 ，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，
将过滤白头拿出； 5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密
封垫和金密封垫； 6，装上清洗阀；
7 ，连接管路。
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HPLC各模块的工作原理及维护
更换过滤白头
1，去掉毛细管，废液管
2，卸掉清洗阀
3，更换过滤白头
4，更换白头，装好清洗阀 10
Agilent 1260 HPLC 工作原 理
及简单操作
10-12-2019
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Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作
• 培训目的：
1.了解HPLC各模块的原理； 2. 掌握HPLC各模块日常维护的要点； 3. 掌握开机，关机。
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Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作
机相之间、两个不相容流动相之 间的互换时； 3，输液泵关闭了一段时间，或使用 挥发性溶剂混合物。
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HPLC各模块的工作原理各模块的工作原理及维护
关于泵(泵头组件)
柱塞杆Piston
活塞外框架
泵头密封垫
主动输入阀AV
Seal Wash组件
泵腔
出口球阀BOV
清洗阀Purge Valve
垫。
• 多次吸液 用于进样量大于100ul
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HPLC各模块的工作原理及维护
关于恒温柱箱
• 控制范围：最高80ºC，低温低于 室温10ºC。
• 预热块体积左面为3ul，右面为6ul
， 除非有特殊要求，左右温度应 保 持一致。
• 一定要关闭前面板。
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HPLC各模块的工作原理及维护
关于原理
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HPLC各模块的工作原理及维护