蛋白N端测序服务订购表

蛋白N端测序服务订购表
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客户基本信息登记
项目要求
样品说明
（如增加样品，可继续往下填写）
备注说明
1通则
1) 样品N端未被封闭。

2) 样品如被修饰，请详细告知修饰方式。

3) 样品如有特殊理化性质（如膜蛋白、PVDF转膜不易结合，特殊酶活性，特殊结构等），请详细说明。

4) 若为已知序列样品，请告知预期序列信息。

5) 请务必告知样品表观分子量范围。

6) 建议客户提供溶液样品或含样品的PVDF膜，微量样品请不要以冻干粉形式提供。

特殊情况请致电生工生物工程（上海）股份有限公司咨询。

2溶液
1) 样品纯度应达到90%以上（HPLC），标明准确纯度。

纯度越高，实验结果越理想。

2) 样品浓度不低于1mg/ml，体积不少于200μl，并标明准确浓度。

3) 请务必标明样品缓冲液的成份，并保证样品缓冲液中不含蛋白酶。

4) 请自留备份，以便交流实验情况。

5) 若运送路程较长，请将样品置入冰盒内保存，以防止蛋白质降解。

3 PVDF膜
1) 请务必使用PVDF膜，不能用NC膜（硝酸纤维素膜）替代。

2) 为防止部分蛋白质可能发生的在电泳过程中被胶内杂质封闭N末端。

请自行考虑做预电泳。

即用低电流跑空胶2~2.5小时后再上样进行电泳分离。

3) 电泳过程中，应尽量避免条带拖尾现象。

用于测序的PVDF膜上条带应狭窄清晰。

4) 尽可能使用厚胶转膜，这样能够保证转膜后单位面积上样品量相对多些，请累积三条以上的目的条带用于测序。

5) 样品转膜后，请使用R-250染色1分钟，避免使用Coomassie G-250。

脱色液中的乙醇可增加到40~60%，脱色过程中注意观察。

背景颜色很快脱掉后，纯净
水里漂洗一下，剪下目的蛋白条带。

6) 含样品的PVDF膜保存在密闭EP管中，冰箱内可以放置3~6个月。

7) 电转移缓冲液建议使用CAPS缓冲液，而不要使用Tris-甘氨酸缓冲液。

8) 公司严格按照客户要求所测氨基酸数目检测，客户要求所测氨基酸数目大于实际样品氨基酸数目，以客户指定待测的氨基酸数目收费（N端封闭除外）。

4 纯度鉴定
请客户务必提供样本纯度鉴定结果，SDS胶图或液相纯化结果。

推荐客户先进行HPLC纯度鉴定。