小鼠MSTN shRNA可控表达载体构建及基因沉默效率研究

合集下载

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

（ＣｏｌｌｏｆＶｅｔＭｅｄ，ＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ２２５００９，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ（ＭＳＴＮ），ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｒｅｆｅｒｒｅｄｔＯａｓｇｒｏｗｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ８，ｉｓａｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｓｋｅｌ —
ｖｅｃｔｏｒａｎｄｔｈｅｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｓｔｕｄｙ
ＹＡＮＧＹｕｅｆｅｉ，ＱＩＹｕｙｕ，ＹＡＮＧＫａｉｄｉａｎ，ＱＩＣｈｕａｎｘｉａｎｇ，ｊｕＨｕｉｍｉｎｇ
Ｖｏ１．３７ＮＯ．４
Ｄｅｅ．２０１６
ＤＯＩ：１０．１６８７２／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１—４６５２．２０１６．０４．００１
小鼠ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ可控表达载体构建
及基因沉默效率研究
定量ＰＣＲ（ＱＲＴ－ＰＣＲ）及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＭＳＴＮｍＲＮＡ及蛋白的表达水平。结果表明：经ＤＯＸ诱导后，转染含
ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ重组载体细胞组ＭＳＴＮｍＲＮＡ相对表达水平比未经ＤＯＸ诱导组及其他对照组细胞中降低７Ｏ左右，
第３７卷第４期
２Ｏ１６年１２月
扬州大学学报（农业与生命科学版）
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）
杨跃飞，祁钰钰，杨开典，齐传翔，鞠辉明
（扬州大学兽医学院，江苏扬州２２５００９）
摘要：肌肉生成抑制素（ＭＳＴＮ）是肌肉发育的负调控因子。根据ＭＳＴＮｍＲＮＡ序列设计１对ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ并构建整合型四环素诱导表达ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ载体ｐｓｉｎｇｌｐｔＴＭｓＴＮｓｈＲＮＡ－ＧＦＰ。重组载体转染小鼠成肌细胞并经Ｇ４１８筛选，通过强力霉素（ＤＯＸ）诱导细胞中ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ表达，利用荧光显微镜观察细胞中ＧＦＰ表 Hale Waihona Puke 情况，利用实时荧光
差异极显著（Ｐ＜Ｏ．０１），ＭＳＴＮ蛋白也下降９Ｏ左右，其他各组间ＭＳＴＮｍＲＮＡ及蛋白表达量差异不显著（Ｐ＞Ｏ．０５）。
该研究成功构建了可控表达ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ载体，并在细胞水平证明其有很好的基因表达及调控效率，为后续制备可控
ｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｇｒｏｗｔｈ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｐａｉｒｏｆＭＳＴＮｓｈＲＮＡｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅＭＳＴＮｓｅｑｕｅｎｃｅ．ａｎｄａｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ，ｐＳｉｎｇｌｅ－ｔＴＳ－ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ～ＧＦＰ，ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔＯｅｘｐｒｅｓｓＭＳＴＮｓｈＲＮＡ．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄｔｏＣ２Ｃ１２ｅｅｌｌｌｉｎｅｓａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｄｗｉｔｈＧ４１８．ＭＳＴＮｓｈＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈＤＯＸ．ＴｈｅＧＦＰｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒａｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｔｈｅＭＳＴＮｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ
中图分类号：Ｑ７８６文献标志码：Ａ文章编号：１６７１ —４６５２（２０１６）０４ — ０００１ —０４
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｒｏｌｌａｂｌｅｍｉｃｅＭＳＴＮｓｈＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
表达ＭＳＴＮｓｈＲＮＡ转基因小鼠，通过精细调控ＭＳＴＮ基因的表达为研究该基因在肌肉发育中的功能奠定基础。
关键词：肌肉生成抑制素；可控表达；ｓｈＲＮＡ；基因沉默