厌氧菌的种类与人体分布

产气荚膜梭菌
(C．perfringens )
（一）生物学性状 图
1.形态染色：革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，芽胞圆形位于 菌体中央或次极端，直径不大于菌体，但较少形 成，有荚膜，无鞭毛。 2.培养特性：生长迅速，代谢活跃，45℃生长最好血平板上双 层溶血环，Nagler反应，“汹涌发酵” 3.生化反应：H2S＋，明胶＋，葡萄糖＋，乳糖＋，麦芽糖＋， 蔗糖＋，卵磷脂酶＋
抵抗力强 周鞭毛，无荚膜（除产气荚膜梭菌外） 致病菌产生外毒素致病，病情严重 防治：类毒素与抗毒素
引起人类疾病的各种 常见厌氧芽胞梭菌
细菌名称 所致疾病
破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌
艰难梭菌
破伤风 菌血症、气性坏疽、软组织感染、 食物中毒等 食物中毒、婴儿肉毒梭菌症、创伤 肉毒症 抗生素相关性腹泻、抗生素相关性 伪膜性肠炎
早期诊断可避免病人最终截肢或死亡
分离培养及动物实验 接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定 动物实验 如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于105病菌/克 食品或106病菌/克粪便可确立诊断
四、防治原则
预防
及时处理伤口，破坏和消除厌氧微环境 预防性的使用抗生素
厌氧手套箱：图
设备自动
其他：
OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿－－可反复打开， Oxyrase酶系统能使培养基中O2去除，并产生CO2。
鉴定试验
形态与染色：
用24h内幼龄菌，多染色性，多形性
菌落性状：
色素、溶血、荧光等
生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等 抗生素敏感试验：
二、临床意义
感染普遍，以混合感染为主。内源性＞外源性，无芽胞..＞芽胞.. 感染原因 1.局部组织的氧化还原电势（Eh）↓ 2.机体免疫功能↓ 3.机体局部屏障作用破坏 感染的临床及细菌学指征： 1.局部气体产生 2.发生在黏膜附近的感染 3.深部外伤 4.有特殊的分泌物 5.某些抗生素治疗无效的感染 6.其它：镜检有菌而培养阴性等
重点： 厌氧菌的实验室检查 常见厌氧菌的生物学特征
概述
一、厌氧菌的种类与人体分布：
定义：
在有氧条件下不能生长，无氧的环境中才能生长的细菌。（缺 乏完善的酶系统，只能以无氧发酵进行能量代谢） 分类： (1)生物学分类: 1.革兰+有芽胞杆菌 2.G+无芽胞杆菌、G-无芽胞杆菌、G+厌氧球菌、G-厌氧球菌 (2)对氧耐受程度分类: 对氧极端敏感的厌氧菌、中度厌氧菌、耐氧厌氧菌 分布： 自然界广泛分布，是人体正常菌群，其中肠道中厌氧菌量最多。
艰难梭菌
（一）生物学性状：图 1.形态染色：革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形或长方形，位于菌 体次极端，无荚膜，有鞭毛。 2.培养特性：严格厌氧，血平板无溶血环，CCFA平板呈黄色菌 落，在紫外灯下可见黄绿荧光。 3.生化反应：H2S－,蔗糖－,葡萄糖＋,乳糖－,麦芽糖－,吲哚 －,脂酶－ （二）临床意义
正常菌群。医院感染的重要病原菌。产生A、B两种毒素，即 肠毒素和细胞毒素，引起假膜性肠炎 （三）微生物学检查 直接涂片镜检 ，分离培养，鉴定鉴别
革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 临床厌氧菌感染中最常见的病原菌
一、类杆菌属
BBE平板上有黑色晕圈
二、普雷沃菌属图
KVLB出现黑色菌落
三、卟啉单胞菌属 四、梭杆菌属
治疗
局部感染的处理
抗生素
α抗毒素 高压氧舱法
肉毒梭菌
（一）生物学性状：图 1.形态染色：革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形位于菌体次极端， 比菌体粗，呈网球拍状。无荚膜，有鞭毛。 2.培养特性：普通培养基生长，血平板上β 溶血环，庖肉培养 基肉渣消化，变黑，恶臭。 3.生化反应：H2S＋,明胶＋,葡萄糖＋,乳糖－,麦芽糖＋,吲哚 －,脂酶＋ （二）临床意义 肉毒毒素--毒性最强 嗜神经性。食物中毒。 剧毒（对人致 死量为0.1µg) （三）微生物学检查 直接涂片镜检 ，分离培养，鉴定鉴别
二、致病条件
伤口需形成厌氧微环境
伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染
大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血 有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口 无侵袭力，仅在局部繁殖，外毒素致病
三、致病因子
对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin) 质 粒 编 码 的 破 伤 风 痉 挛 毒 素 (tetanospasmin)
主要是抗毒素发挥中和作用 抗毒素人工免疫
六、微生物学检查法
一般不进行涂片镜检和分离培养 典型的症状和病史即可作出诊断
七、防治原则
防止创口厌氧微环境的形成
特异性预防：注射破伤风类毒素
紧急预防 ：注射 破伤风 抗毒素 （ tetanus
antitoxin，TAT） 特异性治疗：早期足量抗毒素及抗生素
灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆S）、万古霉素等
聚茴香脑磺酸钠（SPS）敏感试验：厌氧消化链S 气液相色谱技术（GLC） 厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸）， 过柱分析定性定量 DNA G+C mol%
值差越大，亲缘关系越远
药物敏感试验
考虑做体外药敏试验的临床情况：明确厌氧菌引起的严重感染、已确证厌氧菌 感染而经验用无效、需长期用药的厌氧菌感染。 方法 培养基 琼脂稀释法 布氏血琼脂 接种浓度 105细胞／点 优点 可同时测多 个菌株 106CFU／ML 48H 经济，可商 品化 0.5麦氏比浊度 24－48H MIC精确 孵育时间 48H
厌氧菌的检验
临床标本 肉眼观察 及直接镜检 分离培养 厌氧培养
2-7d
增菌培养
确定厌养培养 需氧培养 厌氧培养
生长
兼性厌氧菌
无生长
专性厌氧菌 分类鉴定
生化反应
生长
保存菌种
形态与染色 菌落特性
药物敏感试验
药敏性鉴定 气液相色谱
梭状芽胞杆菌属
严格厌氧菌，革兰阳性 芽胞比菌体粗，菌体膨大呈梭状，
属神经毒(neurotoxin)，
毒性极强(对人致死量<1µg) 蛋白质，不耐热
四、破伤风痉挛毒素
结构
菌体：一条多肽
释出菌体：轻链（A链）-S-S-重链（B链） B链：神经节苷脂结合的单位 A链：毒性作用
作用机制
角弓反张 苦笑面容
五、免疫性
破伤风免疫属外毒素免疫，
厌氧罐法－以物理或化学方法造成无氧环境
美蓝指示剂（有氧蓝色） 刃天青指示剂（有氧红色）
抽气换气法： 10%H2、10%CO2、80%N2、钯粒
图
冷触媒法： 产气袋、钯粒、美蓝 硼氢化钾、碳酸氢钠、枸橼酸药片
钢末法： 黄磷燃烧法：
钯粒 C2O+H2↑ H 2O O2
气袋法：图
原理同上冷触媒法简便
检验方法
• 直接镜检
形态、大小、排列、染色性、有无芽胞、 色素、基：新鲜、预还原 非选择性培养基：BAP(血、 维生素、氯化血红素等 ) 选择培养基 ： KVLB、EYA、BBE、TS… 2）标本接种 固体和液体培养基同时接种 3）培养方法 厌氧罐培养法、厌氧气袋培养法、厌氧培养箱培养法 4）结果观察 2.次代培养和厌氧菌在确定 3.厌氧菌培养失误的原因 采集运送 培养基 厌氧环境 时间等因素
破伤风梭菌 （C．tetani）
(一)生物学性状图
1.形态染色: 革兰阳性芽胞圆形，比菌体大，位于菌体顶端 呈鼓槌状，无荚膜，有鞭毛。
2.培养特性: 专性厌氧菌,在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽 毛状，庖肉培养基轻度变浊，肉渣部分消化，微变黑，恶 臭，产少量气体。 3.生化反应：不发酵分解糖类，硝酸盐－，H2S＋，明胶＋ 4.抵抗力：芽胞耐121℃20min或干热150℃1h，在干燥的土壤 和尘埃中可存活数年对P、C、E、TE等敏感，氨基糖苷类耐 药。
肉汤稀释法 布氏心老浸液
E试验 布氏血琼脂
ß内酰胺酶 琼脂培养基
单个菌落
30－50min
经济快速 检测对青 霉素G和 AMP的耐药
耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药
厌氧菌直接镜检初步鉴别
菌名 革兰染色 形态及其他特征 破伤风杆菌 G+b 细长、梭形或鼓状，有芽胞、周鞭毛 产气荚膜梭菌 G+b 粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞， 有荚膜 放线菌 G+b 分支呈棒状、X、Y、V或栅状，脓汁 中的黄色颗粒有琥珀酸气味 产黑色素类杆菌 G-b 多形性，长短不一，标本有恶臭， 琥珀味，紫外线照射发红色荧光 韦荣球菌 G-c 极小的革兰阴性球菌 消化链球菌 G+c 革兰阳性呈现链状的小球菌
二、致病物质
α 毒素
以A型产生量最大
引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、
肝脏、心功能受损 在气性坏疽的形成中起主要作用
β 、ε 、ι 毒素
引起坏死损伤和血管通透性增加
肠毒素
气性坏疽
•食物中毒
三、微生物学检查法
直接涂片镜检 深部创口取材涂片 革兰阳性大杆菌 白细胞少且不典型 伴有其他杂菌
革兰阳性无芽胞杆厌氧杆菌
一、丙酸杆菌属 二、优杆菌属 三、乳酸杆菌属 四、双歧杆菌属
厌氧性球菌
一、消化球菌属革兰阳性
黑色消化球菌
二、消化链球菌属革兰阳性
厌氧消化链球菌图
三、韦荣球菌属革兰阴性
小韦荣球菌
谢 谢
标本采集
•采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气 •易污染标本不宜厌氧培养 齿龈、咽喉拭子、痰液或气管吸出物、小肠内容物、阴道或宫颈拭 子、尿液或导尿液、粪便、洗胃液、皮肤表面或伤口边缘等标本 •不同部位标本采集法 针筒抽取、穿刺术、外科切开等 •即送即检，避免标本干燥、接触空气和低温保存 1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行 2.无菌小瓶法：少量脓液运送，加指示剂 3.厌氧袋法：床边接种 4.标本充盈法：大量液体标本 5.组织块运送法：厌氧罐，钢丝绒 6.棉拭子法：急需时用－A、B管