双特异性抗体与抗体融合蛋白

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构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 吞噬细胞/APC FcγR、CR
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Immunology
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构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 NK细胞 FcγR、CD56
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双特异性抗体的效应靶
效应细胞 T细胞 NK细胞 中性粒细胞
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➢ 末端半胱氨酸残基（Cys）共价交联
在两种scFv分子C末端分别带上自由的Cys， 通过常规二硫键共价交联，形成双特异性抗体
VHA L VLA Cys
VHB L VLB Cys
-S-S-
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➢ 单链双特异性抗体
将两种scFv分子基因用linker连接在一起， 然后表达形成双特异性抗体
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11
构建策略
双特异性抗体的构建方法
杂化杂交瘤技术
将具有某种特异性（如抗瘤细胞）的McAb 细胞株与具有抗第二抗原（如蓖麻毒蛋白） 的小鼠脾细胞进行融合，即产生出杂化杂交 瘤细胞株的二价瘤体。
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12
杂化杂交瘤技术产生的双特异性抗体
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➢ 只有L1H1-H2L2才是所需的双特异性抗体
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15
➢ 杂化杂交瘤方法的不足
产量低，仅占10% 产物需筛选，费时费力 瘤株不稳定
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构建策略
双特异性抗体的构建方法
化学交联法
Nisonoff和Rivers最早开始研究
双特异性抗体
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双特异性抗体
概述 构建策略 应用
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3
概述
双特异性抗体：
抗体两个结合点表现为不同的特异性，即分 别结合不同表位。
如，一个结合靶细胞（如肿瘤细胞），另一 结合药物或免疫效应细胞（如蓖麻毒素、抗 癌药物、细胞毒性细胞）
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4
化学交联法
用于制备双功能抗体的McAb可以是完整分 子，也可是经胃酶水解获得F（abˊ）2片段。 后者在减少鼠源免疫原性方面，效果较好。
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构建策略
双特异性抗体的构建方法
基因工程技术
利用分子生物学技术设计产生双功能抗体 常见有四种构建形式，多为小分子抗体。
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双特异性抗体
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5
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6
双特异性抗体的功用：
提高疗效，减少副作用。 主要用于靶向治疗。
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构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 T细胞 TCR CD3 CD2
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抗体免疫偶联物
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抗体免疫偶联物
概述 小分子药物与抗体偶联物 毒素及大分子多肽药物与抗体偶联物 应用
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概述
抗体免疫偶联物
将单抗与“弹头”药物偶联在一起，以提高 药物作用的特异性，主要用于肿瘤治疗。
VHA L VLA L VHB L VLB
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➢ 微型双特异性抗体
利用专门二聚化结构将两种scFv分子连接在 一起，形成双特异性抗体
如利用fos和jun基因的亮氨酸拉链序列：
VHA L VLA fos
VHB L VLB jun
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➢ 双体型双特异性抗体
将两种不同抗体的VH和VL用较短的linker连 接形成两种不同单链，当它们共表达时，其相 互间连接在一起，形成双特异性抗体
1993，Holliger
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双特异性抗体的应用
免疫诊断 肿瘤放射显影 肿瘤药物杀伤 肿瘤的免疫杀伤
乳腺癌、淋巴母细胞白血病、神经胶质瘤
化学交联无需经过细胞融合，比较简便易行。
通常利用重链与轻链这间的二硫链经还原 和再氧化，将两种不同特异性抗体的半分子结 合在一起。或用双功能交联剂，如邻苯酸酯等， 把两个抗体半分子交联在一起。
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化学交联的双特异性抗体
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构建策略
双特异性抗体的构建方法
可在具氨基的化合物上引入巯基
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小分子药物与抗体偶联物
直接偶联物
将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 SPDP(N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫基)-丙酸酯)
单核巨噬细胞 树突状细胞 红细胞
靶分子
TCR/CD3,CD2 FcγRIII,CD44,CD56,CD38
FcγRI,CR3, Fc αRI FcγRI,CR3, FcαRI
FcγR CR1
效应
杀伤肿瘤细胞
杀伤肿瘤细胞 病毒感染细胞 杀伤肿瘤细胞 病毒感染细胞 杀伤肿瘤细胞 病毒感染细胞
抗原递呈
免疫粘附
如，Mylotarg—抗CD33单抗偶联加里奇霉素， 治疗老年人急性髓细胞性白血病，2000年上 市。
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与单抗偶联的常用“弹头”药物
类别 植物毒素 微生物毒素 抗代谢药物
蒽环类药物 烷基化药物 抗有丝分裂药物 抗生素
名称
蓖麻毒素，相思豆毒素，皂角苷 绿脓杆菌外毒素，白喉毒素 氨基蝶呤，甲氨蝶呤，阿糖胞苷，5氟尿嘧啶，5-氟脱氧尿苷 阿霉素 柔红霉素 吗啉阿霉素 顺铂 苯丙氨酸氮芥 丝裂霉素C 长春花碱 秋水仙碱 鬼臼毒素 博莱霉素 加里奇霉素 平阳霉素
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小分子药物与抗体偶联物
一个单抗可偶联一个至数十个小分子 药物。
抗体分子中的多个基团可以用于连接， 如巯基，氨基，羟基，胍基，羧基，糖 基等。
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小分子药物与抗体偶联物
直接偶联物
将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 2-亚胺四氢噻吩(2-IT)
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➢ 杂化杂交瘤分泌的抗体形式
保持原特异性抗体分子：
L1H1-H1L1，L2H2-H2L2
重链特异性相同的配对抗体分子：
L1H1-H1L2，L1H2-H2L1 L2H1-H1L2，L1H2-H2L2
重链、轻链特异性不同的配对抗体分子：
L1H1-H2L2，L1H2-H1L2 L1H1-H2L1，L2H2-H1L2