生物化学实验五 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核糖核酸的结构和功能的理解。
实验原理，酵母核糖核酸是由核糖核苷酸单元组成的，核糖核酸的主要结构是由磷酸、核糖和碱基组成的链状分子。
核糖核酸通过加热、冷却和酸性条件下，可将其分离成RNA的不同组分，如tRNA、rRNA和mRNA等。
实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获，将酵母菌落接种在含有葡萄糖和氨基酸的培养基中，培养一定时间后，收获酵母细胞。
2. 酵母细胞的裂解，将收获的酵母细胞用裂解液处理，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核糖核酸。
3. 酵母核糖核酸的分离，利用差速离心法，将裂解后的酵母细胞液在不同离心速度下进行离心，分离出不同密度的RNA组分。
4. RNA组分的鉴定，通过琼脂糖凝胶电泳，将分离出的RNA组分进行电泳，根据不同RNA组分的迁移速度和位置，进行鉴定和分析。
实验结果：经过实验，成功分离出了酵母核糖核酸的不同组分，包括tRNA、rRNA和mRNA等。
通过琼脂糖凝胶电泳，得到了不同RNA组分的电泳图谱，根据图谱分析，确认了各个RNA组分的存在和相对含量。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深了对核糖核酸的结构和功能的理解。
同时，实验结果也为进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
实验中遇到的问题及解决方法：在实验过程中，可能会遇到RNA的降解、污染等问题，可以通过在实验中加入RNase抑制剂、严格控制实验条件等方法来解决。
总结：本次实验为我们提供了一种了解RNA结构和功能的方法，也为我们今后的科研工作提供了重要的参考。
通过实验，我们不仅学会了实验操作技能，还深化了对核糖核酸的理解，为我们今后的学习和研究打下了坚实的基础。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。
二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。
RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。
其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。
2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。
其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。
三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。
然后将菌液离心收获，去除上清液。
2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。
再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。
四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。
实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。
酵母核糖核酸的提取和组分鉴定1
实验步骤
一、酵母中RNA粗制品的制备
1、提取： 将5g酵母悬浮于30ml 0.04 M NaOH溶液中（先加15ml），并在 研钵中研磨均匀，将悬浮液转移到锥形瓶中，在沸水上加热30 分钟(期间不时搅拌)。 2、分离 上述提取液取出，冷却后转入大离心管内，以4000r/min离心 10min，使提取液与菌体残渣等分离。 3、沉淀RNA 将上清液缓缓倾入（边搅拌）15ml酸性乙醇溶液中，待核糖核 酸沉淀完全后，离心5min（4000rpm）。 4、洗涤和抽滤 用95%乙醇15ml洗涤沉淀，离心5min（4000rpm）弃去上清液， 沉淀再用15ml无水乙醚拌匀后，布氏漏斗中抽滤（用乙醚冲洗 2-3次），至沉淀抽干，即得RNA粗制品。
实验六
酵母核糖核酸的提取 和组分鉴定
实验目的
学习稀碱法提取RNA，了解核酸的组分，并掌握鉴定
核酸组分的方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备RNA的方法也各有不同，通
常根据材料的性质以及制备的要求来选择相应的提取方法。由于酵母
中RNA含量较高， DNA 较少，在实验室常用酵母作为提取RNA的材料, 一般使用浓盐法、稀碱法来提取变性的RNA ，若要制备具有生物活性 的RNA，实验室常用苯酚法。
本实验采用稀碱法提取制备RNA,其原理是利用稀的NaOH溶液，将细胞 裂解， RNA溶于碱性提取溶液中，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质 与核酸分离，然后通过离心除去菌体等残渣，在上清液（碱提取液） 中加入酸性乙醇溶液使解聚的RNA沉淀，即得到RNA的粗制品。
核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可 使其水解，在水解液中用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组分 的存在。
酵母的提取及组分鉴定常用文档
1. 磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴， 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。
(二) 沸水中加热时要时常摇动试管；
加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴 然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸将其完全水解，并用下列方法鉴定其中组分：
磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变
磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变
6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中 化。
(三) 嘌呤碱与硝酸银共热产生褐色的嘌呤银沉淀，以鉴定嘌呤的存在。
加热5～10min，观察颜色变化。 管号 1号 2号 3号
混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色 化。
(二) 3,5-二羟基甲苯与核糖在浓酸中共热呈绿色，以鉴定核糖的存在。
变化。 了解RNA提取的原理，掌握RNA组分鉴定的方法
各加3mol/L HAc 2滴，立即摇匀酸化，用石蕊试纸检查。 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平；
2. 核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试剂 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平；
3
氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水解液 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。
10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～10min，观
察颜色变化。
四、结果与计算
管号
1号
2号
3号
颜色
五、注意事项 (一) 酵母研磨要充分； (二) 沸水中加热时要时常摇动试管； (三) 硝酸银中加氨水应逐滴加入，白色沉淀消
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。
实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。
实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。
将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。
2. RNA的提取。
将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
3. RNA的纯化。
将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
4. RNA的酶切。
将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。
5. RNA的电泳分析。
将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。
根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。
实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。
通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。
实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。
通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。
在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。
以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
1.嘌呤碱：取水解液1毫升加入过量（约等体积）浓氨水，然后 加人约1ml 0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 2.核糖：取一支试管加入水解液1ml、 三氯化铁浓盐酸溶液2ml 和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。 放沸水浴中l0min。注意溶液是否变 成绿色，说明核糖的存在。
3.磷酸：取一支试管，加入水解液1毫升和定磷试剂l毫升。在 水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的 了解从酵母中提取RNA的原理、方法及其组分，掌握鉴定 核酸组分的方法。 二、原理 酵母核酸中主要是RNA（2.67％～10.0％），DNA含量很 少（0.03％中提取RNA的方法很多，常用的有稀碱法和浓盐法。前者是 利用稀碱使细胞壁溶解，这种方法提取时间短，但是RNA在此 条件下不稳定，易分解；后者是在加热的条件下，利用高浓度 盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，产品色泽较好。本 实验主要目的是提取核酸进行核酸组分鉴定，对RNA稳定性要 求不严格，故采用稀碱法。
三、材料和试剂 干酵母 定磷试剂 ……
四、操作 将5g酵母悬浮于15mL0.04M氢氧化钠溶液中，并在乳钵 中研磨均匀（此步是实验能否成功的关键，至少10min）。将 悬浮液转移至锥形瓶中。再用10mL0.04M的氢氧化钠溶液分 两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。将锥形瓶置于沸浴上加 热30min后，将锥形瓶置于自来水中冷却。将匀浆转移到离心 管中，托盘天平上配平，离心4000r/min，8min，取上清液于 洗净的锥形瓶中，并缓缓倾入二倍体积的PH=2.5酸性乙醇溶 液。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后， 再配平，离心 4000r/min ，5min。弃去上清液，取沉淀，即 RNA粗品。用1.5M的硫酸（约5ml）将沉淀分几次转移到玻璃 试管内，用沸水浴加热10min（时间太短可能致使组分鉴定实 验失败）制成水解液并进行组分的鉴定。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验名称：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验目的：通过实验，掌握分离酵母核糖核酸的技术和方法，
了解酵母核糖核酸的结构和组成，为深入研究生物分子提供基础
知识。
实验原理：酵母是常见的单细胞真菌，其细胞内含有多种生物
分子，其中包括核糖核酸，其主要作用是传递遗传信息。
酵母核
糖核酸在组成上分为核糖体RNA和转运RNA两类，其中核糖体RNA分子量较大，可以通过葡萄糖等物质的离心分离、盐析和凝
胶过滤等方法进行纯化。
实验步骤：
1.将酵母菌株培养至对数生长期，并收集其含有核糖核酸的细胞。
2.将酵母菌细胞裂解，并加入一定量的盐，使其发生盐析反应。
3.将含有核糖核酸的盐析液进行凝胶过滤，通过分子量筛选，
分离出核糖体RNA。
4.对分离出的核糖体RNA进行电泳实验，检测该分子的分子量和组成。
实验结果：
1.通过盐析实验，成功从酵母菌细胞中分离出核糖体RNA，依
据电泳图谱，该分子的分子量约为20kD。
2.通过对核糖体RNA的电泳图谱进行分析，可以发现，在核糖体RNA中，存在大约四分之三的核糖核酸分子为16S rRNA，其
它分子为其他转运RNA。
结论：通过本次实验，我们成功地从酵母菌的细胞中分离出核
糖体RNA，掌握了酵母核糖核酸的分离和组分鉴定等技术和方法，为深入研究生物分子提供了基础研究支持。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告目录1. 实验目的1.1 研究背景1.2 实验目的2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸2.2 分离技术3. 实验步骤3.1 样品制备3.2 离心分离3.3 纯化提取3.4 鉴定分析4. 实验结果与讨论5. 实验结论6. 参考文献1. 实验目的1.1 研究背景在细胞内，核糖核酸（RNA）是一种重要的核酸分子，其功能涉及到基因的转录和翻译。
酵母细胞中的RNA有着重要的生物学功能，因此进行酵母核RNA的分离与组分鉴定具有一定的研究意义。
1.2 实验目的通过实验，掌握酵母核RNA的分离技术，了解其基本组成和结构特点，为后续RNA在生物学领域的应用提供基础支持。
2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸酵母核RNA是一种由核糖核酸组成的RNA，主要参与酵母细胞内的基因表达和蛋白质合成过程。
2.2 分离技术本实验将采用离心分离和纯化提取的方法，通过差速离心将细胞裂解液中的酵母核RNA和其他细胞组分进行分离，再利用纯化技术进行酵母核RNA的提取。
3. 实验步骤3.1 样品制备准备酵母细胞样品，通过适当的处理方法制备得到待分离的样品。
3.2 离心分离采用差速离心技术，以不同细胞组分的密度差异进行分离，获得含有酵母核RNA的分离物。
3.3 纯化提取通过特定的纯化方法，将酵母核RNA从其他细胞组分中纯化提取出来，得到较纯的酵母核RNA溶液。
3.4 鉴定分析对分离得到的酵母核RNA样品进行各种分析技术，如凝胶电泳和质谱分析，确定其组分、纯度和结构特点。
4. 实验结果与讨论根据实验结果进行数据分析，探讨实验过程中出现的现象和可能的问题，进一步加深对酵母核RNA的理解。
5. 实验结论总结实验过程中取得的重要发现和结论，反思实验方法的可行性和局限性，为未来相关研究提供借鉴。
6. 参考文献列出本实验报告涉及的参考文献，方便读者进一步了解酵母核RNA分离及组分鉴定的相关知识。
酵母核糖核酸
实验六：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的：了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、主要器材： 1．水浴2、离心机四、试剂和材料1．0.04 mol/L氢氧化钠溶液2．酸性乙醇溶液3．95%乙醇5．1.5 mol/L硫酸溶液6．浓氨水7．0.1 mol／L硝酸银溶液8．氯化铁浓盐酸溶液9．苔黑酚乙醇溶液10．定磷试剂11．酵母粉五、操作：将1g酵母悬浮于10mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至玻璃试管内。
沸水浴加热30分钟，冷却后移入到离心管内，离心(3000r/min)10分钟，将上清液缓缓倾人10mL酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾人。
待核糖核酸沉淀完全后，移入离心管内，再离心(3000r/min)5分钟。
弃上清液。
用95%乙醇离心洗涤沉淀1次，弃乙醇后，得RNA沉淀。
将RNA沉淀从离心管内转移到一只试管中，然后向试管内加入1.5 mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟，制成水解液，通过下述实验进行组分鉴定：1、嘌呤碱做三组对照实验：取3支试管分别进行如下操作（1）水解液1mL＋浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？（2）浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无沉淀？（3）水解液1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？2、核糖：取1支试管，水解液1mL ＋三氯化铁浓盐酸溶液2mL ＋苔黑酚乙醇溶液0.2 mL，沸水浴中3分钟。
注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
3、磷酸：取1支试管，水解液1mL ＋定磷试剂1mL，在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
生化实验课件-酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (2)
核苷酸的消化和核酸一樣。此外嘌呤類核苷
酸可用1.5mol/L的HCL，100℃ 水解1小時脫磷；
嘧啶類核苷酸可用10mol/L H 2 SO4消化1—2個小
時脫磷。
二，試劑
1.標準磷試劑（含磷5μg/ml）:準確稱取恒重
（105℃ ）的 KH 2 PO4 0.4389g,用水定容到100ml，此液
3. 催化劑：硫酸銅（ CuSO4 •5H 2O）：硫酸鉀
（ K 2 SO4）=1：4（W/W）,研成細末。
4. 30%過氧化氫，濃硫酸
三，操作方法
1.製作磷標準曲線：
取標準磷酸溶液（ 5μg/ml ）0，0.5，1.0，1.5，2.0，
2.5，3.0ml，用水補足到3ml，含磷量分別為0，2.5，5，
3.磷酸：取一支試管，加入水解液1ml和定磷試劑 1ml。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍色，說明磷 酸是否存在。
離心機使用及注意事項
使用方法:
1 ．接通電源 2 ．平衡離心樣品 3. 加入樣品, 關蓋 4 ．設置時間 5．調節轉速 6. 關機, 開蓋, 取出樣品
注意事項:
（1）離心前必須仔細檢查轉頭各孔內有無異物。 （2）離心管必須仔細平衡。 （3）機內若不清潔，離心管要封口。 （4）必須慢啟動，然後加速。 （5）離心時不准開蓋。 （6）不准用手刹車。
1000ml 500ml 1000ml 500ml 200ml 50ml 50ml 80ml 10ml
11. 定磷試劑
50ml
（1）17%硫酸：將17毫升濃硫酸（比重1.84）緩緩 加入到83毫升水中。
（2）2.5%鉬酸銨溶液： 2.5g鉬酸氨溶於100ml水中。
（3）10%抗壞血酸溶液：10g抗壞血酸溶於100ml水 中，貯存棕色瓶保存。溶液呈淡黃色時可用，如呈深 黃色或棕色則失效，需要純化抗壞血酸。
生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析
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①磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀 (1mL $ + 1mL定磷试剂)：
(NH4)2MoO4 + H3PO4 → (NH4)3PO4·12MoO3↓(黄色)
Mo6+
SnCL2
Mo4+
Mo(MoO4)2 (兰色)
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② 核糖与地衣酚(orcin)试剂反应呈鲜绿色 (1mL $ + 1mL FeCl3 + 2mL orcin→水浴加热)
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OD260/OD280的比值用于估计核酸的纯度,OD260/OD230估计 去盐的程度。
对于RNA纯制品，其OD260/OD280≈2.0，OD260/OD230应大于 2。
OD260/OD230<2说明去盐不充分, 可以再次沉淀和70%乙醇洗 涤。
浓度计算： DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000 RNA样品的浓度（μg / μl）：OD260×稀释倍数×40/1000
当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml ssDNA浓度约为37μg / ml RNA浓度约为40μg / ml
纯DNA：OD260/OD280≈1.8 (＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染） 纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0 （＜1.7时表明有蛋白质或酚污染,可以增加酚 /氯仿抽提）
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5.RNA的组分鉴定
①RNA的酸解 将装有待测RNA的三角瓶，在电炉上加热，至溶液透明 为止，得到RNA的水解液，期间不停晃动，以使受热均 匀。
酵母核糖核酸的提取及测定
二、 研究依据及原理：
酵母作为工业上大量生产核酸的最为理想的微生物，因为酵母 核酸中主要是 RNA（2.67~10.0%） ，DNA 很少（0.03~0.516%） ，菌体 容易收集，RNA 也易于分离。此外，抽提后的菌体蛋白质，也具有 很高的利用价值。 RNA 提取过程是先使 RNA 从细胞中释放， 并使它和蛋白质分离， 然后将菌体除去，再根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将 pH 调 到 2.0~2.5 使 RNA 沉淀，进行离心收集。 提取 RNA 的方法很多， 在工业生产上常用的是稀碱性和浓盐法。 本实验采取浓盐法（10%NaCl） 核酸不论是 DNA 还是 RNA，都是由核苷酸组成的多聚核苷酸 化合物，而核苷酸是由糖，碱基和磷酸构成。 要测定生物体内核酸的含量或者测定提取出来的核酸含量，只
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需要测定组成核苷酸的一种成分，如磷，糖或碱基，便可计算出核糖 的含量，因为核算分子中这三个组份是以等分子比例存在的，即每一 个嘌呤或嘧啶分子都与一分子戊糖及一分子磷酸相连接的， 所以只要 测出其中任何一组分的含量即可求出核糖的含量。 本实验采用紫外吸收法测定核糖核酸含量，因为核酸的组成成 分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收，最大吸收在 260mm 处，利 用此特性可以对核酸进行定量测定。
E 260 A 260
（1） RNA 含量（%）=
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告引言：酵母核糖核酸（RNA）是一种重要的生物分子，具有多种功能。
通过对酵母RNA的分离和组分鉴定实验，我们可以更好地了解其结构和功能。
本实验旨在通过一系列实验步骤，从酵母细胞中分离出RNA，并对其进行组分鉴定。
实验材料和方法：1. 酵母细胞培养液2. 细胞裂解液3. 高速离心机4. RNase酶5. RNA提取试剂盒6. 紫外可见光分光光度计实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获：将酵母细胞培养液置于适宜的培养条件下，培养至细胞密度达到一定程度后，用离心机将细胞沉淀下来。
2. 细胞裂解：将细胞裂解液加入细胞沉淀中，充分裂解细胞膜，释放出内部的细胞器和分子。
3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行RNA的提取。
这一步骤主要是通过化学方法将RNA分离出来。
4. RNase酶处理：为了去除可能存在的DNA和蛋白质的污染物，可以使用RNase酶对提取的RNA进行处理。
5. 紫外可见光分光光度计测定：使用紫外可见光分光光度计对提取的RNA溶液进行测定，以确定RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上的实验步骤，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
在RNase酶处理后，我们发现RNA的纯度得到了明显的提高。
通过紫外可见光分光光度计的测定，我们确定了RNA的浓度。
酵母RNA的组分鉴定是一个复杂而重要的过程。
通过进一步的实验，我们可以对RNA进行凝胶电泳分析，以确定RNA的大小和分子量。
此外，我们还可以使用逆转录酶和聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，对RNA进行进一步的研究，以了解其在基因表达调控中的作用。
结论：通过本实验，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
这为我们进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
酵母RNA在生物学研究中具有重要的意义，对于深入了解细胞的基因表达调控机制具有重要的参考价值。
酵母RNA的提取和组分鉴定
酵母RNA的提取一、实验目的1、掌握酵母RNA提取的方法。
2、了解核酸的组成。
3、掌握鉴定核酸组分的方法和操作。
二、实验原理三、实验步骤1、用托盘天平称1g干酵母于研钵中，加入少许石英砂，再加入2ml 0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨至少5min。
2、再加4ml 0.04mol/LNaOH溶液于匀浆液中，混匀后，将匀浆液转移到大试管中，再用4ml 0.04mol/LNaOH溶液洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。
3、将大试管小心在沸水浴中加热30min，冷却后倒入离心管中，与另一组同学的离心管在托盘天平上平衡，然后两组的离心管对称地放入离心机中，2000r/min下离心15min。
4、吸取10ml酸性乙醇溶液于小烧杯中，将离心管上清液小心倒入小烧杯中，边倒入边搅拌，直到RNA沉淀完全。
5、将小烧杯中的液体倒入2个干净的离心管，平衡、离心（2000r/min）3min。
6、弃去两离心管上清液，各离心管中加入95%乙醇2.5ml，振荡、混匀、平衡、离心（2000r/min）3min。
7、弃去两离心管上清液，各离心管加入3ml 1.5mol/L硫酸，混匀、倒入同一个大试管中，贴上标签，放在试管架上，备用。
8、将水解液在沸水浴中加热至少10min，使沉淀RNA充分水解。
9、取一支试管A，加入1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，再逐滴加入浓氨水至沉淀消失，然后加入1ml水解液放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。
10、另取一支试管B，加入水解液1ml，三氯化铁浓盐酸溶液2ml和地衣酚乙醇溶液0.2ml（约4滴），混匀，用试管夹夹好后放到沸水浴中3~5min，注意观察溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
11、再取一支试管C，加入水解液1ml和定磷试剂1ml，混匀，在沸水浴中加热，注意观察溶液颜色的变化，溶液变蓝，说明磷酸存在。
注意事项：离心一定要平衡对称放入离心机中，离心机达到设置转速时才能离开。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定酵母核糖核酸的提取及测定⼀、实验背景及⽬的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍⽣物在⽣物化学、医药、⾷品添加剂、农业等领域有着⼴泛的应⽤。
⽐如能够促进作物的⽣长，在⽔稻、⼩麦、柑橘及多种蔬菜⽣产中应⽤，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强⼒助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为⽣产治疗癌症、肝炎及冠⼼病等药物的原料。
⽽利⽤微⽣物资源提取氨基酸、核苷酸等⽣物⼩分⼦，具有成本低、⾮化学合成、⽆毒、⽆害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵⾏业的快速发展，产⽣了相应的⼤量发酵副产物，如何利⽤这些副产物，既做到不污染环境，还能产⽣良好的经济效益，⼀直是研究的热点。
⽽啤酒废酵母中RNA 含量达6%~8%，是⽣产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋⽩质(占⼲菌体的50%)还具有很⾼的利⽤价值。
所以利⽤啤酒废酵母⽣产RNA形成了⾮常有益的产业链。
[2] 本实验⽬的就是学习从酵母中提取RNA的⽅法并掌握其测定⼿段。
⼆、实验原理微⽣物是⼯.业上⼤量⽣产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋⽩质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调⾄其等电点，使之沉淀，进⾏离⼼收集。
提取RNA的⽅法很多，在⼯业⽣产上常⽤的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利⽤碱使细菌细胞壁⽔解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利⽤⾼浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于⽔，在含盐的菌体溶液中，RVA 有较⾼的溶解度。
⼆者均通过控制温度使蛋⽩质变性沉淀，通过离⼼将RNA及蛋⽩质和酵母菌体分离，进⽽在等电点沉淀RNA，从⽽达到提取⽬的。
本实验采⽤浓盐法(10% NaCl),是⾷品医药卫⽣领域制备RNA 制剂的经典⽅案。
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实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的要求
学习和掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法；了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材与试剂
1〉材料
酵母粉。
2〉器材
乳钵、150ml锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、滤纸、试管夹。
3〉试剂
(1)
0.04mol/L氢氧化钠溶液。
(2)酸性乙醇溶液：将0.3ml浓盐酸加入30ml的乙醇中。
(3)95%乙醇。
(4)乙醚。
(5)
1.5mol/L硫酸溶液。
(6)浓氨水。
(7)
0.1mol/L硝酸银溶液。
(8)三氧化铁-浓盐酸溶液：
将2ml 10%三氧化铁溶液(用FeCl
3·6H
2O配制)加入到400ml浓盐酸中。
(9)苔黑酚乙醇溶液：
溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中。
(10)定磷试剂。
a.17%硫酸溶液：
将17ml浓硫酸(比重
1.84)缓缓加入到83ml水中。
b.
2.5%钼酸铵溶液：将2.5g钼酸铵溶于100ml水中。
c.10%抗坏血酸：
将10g抗坏血酸溶于100ml水中，储于棕色瓶保存。
溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效。
临用时将上述3种溶液与水按比例混合：17%硫酸溶液︰
2.5%钼酸铵溶液︰10%抗坏血酸︰水=1︰1︰1︰2(体积分数)。
四、实验步骤
1〉RNA提取
将10g酵母悬浮于90ml
0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至150ml 锥形瓶中。
在沸水浴上加热30min后，冷却。
(3000r/min)离心10分钟，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
待核糖核酸沉淀完全后，(3000r/min)离心5分钟。
弃去上清液。
用95％乙醇洗涤沉淀两次，每次10ml。
乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至漏斗中过滤。
沉淀即为粗RNA，可在空气中干燥。
作鉴定或测定含量用。
2〉鉴定
取200mg提取的RNA，加入
1.5mol/L硫酸溶液10ml，在沸水浴中加热10min制成水解液并进行组分的鉴定。
(1)嘌呤碱：
取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加入约1mL
0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
(2)核糖：
取一支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液
0.2ml。
放沸水浴中10分钟。
注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
(3)磷酸：
取一支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml。
在沸水浴中加热10min，观察若溶液变成蓝色，说明有磷酸存在。
五、结果处理
记录现象并解释。
现象：
(1)与硝酸银反应生成了少量的银化合物沉淀。
(2)反应后沸水浴，溶液变成绿色。
(3)反应后沸水浴，溶液变成蓝色。