原位杂交自己整理

一、DEPC水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。

物理性质分子式：C6H10O5 分子量：162.1 外观：无色液体折射率：1.398（20°C）密度：1.12g/ml 摩尔浓度：6.9M DEPC气味芳香浓烈，强挥发性，有毒，需在通风橱中操作。

化学性质DEPC对湿气和酸碱敏感，在乙醇和二氧化碳的水溶液中缓慢分解，在155°C自行分解。DEPC 在氨水中特别不稳定，生成一种致癌的聚氨酯胶的物质。DEPC对核酸酶有积极地抑制作用。（主要是对含有-NH，-SH，-OH活性部位的酶起作用）。

使用要点：DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等，以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。通常使用0.1%的DEPC水溶液使Rnase 失活，即1ml DEPC溶于1L纯净水中。溶解时，DEPC不会很快溶解，开始时以小球的形式存在于溶液中，因此要在搅拌器中搅动直到小球消失为止。DEPC自行分解成乙醇和二氧化碳很慢，可以通过高压灭菌处理破坏DEPC或水溶液中煮沸15分钟以上。

注意事项保存：避光干燥密闭容器于2-8°C 注：使用时要戴乳胶手套和口罩。如果不慎溅到皮肤或眼睛，应立即用大量清水冲洗，如果感到不适，就医。

二、DEPC处理枪头：

1、用去离子水配制0.1%的DEPC，避光;

2、将枪头和EP管放入0.1%的DEPC内，保证枪头和EP管内都充满0.1%的DEPC（看自己的操作习惯了，本人是用左手拿住镊子夹住枪头或者EP管，右手使用移液器吸取0.1%的DEPC，将枪头或者EP管内充满0.1%的DEPC）；

3、避光、静置、过夜

4、装枪头和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，将枪头或者EP管内的DEPC水大致去除干净后，装起，包好

5、121摄氏度，30min

6、180摄氏度，干燥数个钟头（三个左右吧，这个时间具体记得不是很清楚了），用前拿出来

注意：处理DEPC时需要戴乳胶手套、口罩！

三、

使用甲酰胺和二甲亚砜（DMSO）一般不会导致高背景。在杂交液中加入30%二甲亚砜可使T2噬菌体DNA的Tm值比原先降低14℃，而使用酰胺甚至可使DNA在室温下变性和

复性。有报道反应液中每增加1%的甲酰胺浓度，Tm值可降低0.72℃。但是不同的实验条件与实验室需要确定自己的杂交条件。

四、Dextran sulfate

DSS Dextran sulfate sodium salt 葡聚糖硫酸钠盐MW：36000-50000

物理性质：白色或灰白色粉末

描述：硫酸葡聚糖是葡聚糖的聚阴离子衍生物，由葡聚糖和氯磺酸的酯化反应形成。其中含硫量约为17%，相当于葡聚糖分子的每个葡萄糖残糖中平均含1.9个硫酸基团。

重要用途：

·提高核酸杂交率-溶液中含10%的硫酸葡聚糖，DNA链的再退火率约增加10倍，这一现象进一步扩大了单链或双链的探针与固定在膜上的DNA/RNA的杂交率。不仅如此，添加10%硫酸葡聚糖也许会增加随机切割的双链DNA探针与固定化核酸的杂交率，高达100倍。

·显示免疫相关的活动：

（1）体液免疫的增强和抑制。

（2）B淋巴细胞的多克隆活化作用，甚至可以刺激未成熟的B细胞。

（3）胸腺细胞反应中，促使转化成凝集素。

（4）抑制血液凝固和血小板聚集。

（5）增强血纤维蛋白溶解活性。

（6）增强/抑制细胞介导的免疫应答。

·沉淀低密度（LDL）和极低密度（VDLD）脂蛋白- Mg2+存在的条件下，硫酸葡聚糖沉淀人血清中的低密度脂蛋白，上清液中留下高密度脂蛋白。利用硫酸葡聚糖的沉淀作用去除脂蛋白这一功能同样可以用来纯化其他材料，如β-2-糖蛋白。

·作为佐剂发挥作用；

溶解度：

溶于水（100mg/ml - 澄清或者轻微模糊的黄色溶液，高分子量的产品在水中的溶解度没有低分子量强）。灭菌前水溶液应配成缓冲体系（如碳酸氢钠），防止降解。

MP产品价格：

贮藏条件：25℃

五、Tris-HCl

三羟甲基氨基甲烷。外观：白色结晶水溶性：无色，澄清

毒性：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。

Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH 条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一，其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。作为蛋白缓冲液时，若后续工作需要质谱，则不适宜用Tris，最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。

六、EDTA

乙二胺四乙酸。EDTA 是一种重要的络合剂。EDTA是螯合剂的代表性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性配合物。

在分子生物学实验中：是二价金属螯合剂，抑制核酸酶；降低细胞膜的稳定性。

危险性：作为广泛应用于洗护产品中的EDTA，其刺激皮肤，黏膜，引起哮喘，皮肤发疹的负面作用正在凸现，是一种可能引起过敏的物质，通过丙二醇等透皮吸收剂被摄取后会引起钙缺乏症，血压降低，肾脏障碍，染色体异常和原生变异等一系列有害作用。

储存方法：

1. 禁止阳光直接照射及避免接近热源。

2. 开盖使用后请即刻拧紧瓶盖。

3. 使用时请倒入干燥及干净的器皿中，切勿直接用移液管从瓶中取液。