血小板膜表面抗体测定
血小板膜表面CD62P检测活化方法
血小板膜表面CD62P检测
操作步骤
1. 标本采集：
(1)采血管顺序编号。
(2)抽取静脉血，采血管中注入2ml。
(3)于10分钟之内完成血小板激活和染色步骤，操作时应注意
减少人工激活。
注意事项：1、至少要采集10ml全血
2、而且必须用粗针采血
3、如果是用注射器，则将采的血先放入才血管，最后将
剩余的几毫升弃掉或做它用。
4、如果是用采血针采血，先弃掉2ml,然后再往采血管中采
集。
2. 荧光抗体染色：
(1)取2支试管，加入待测外周血标本，两管各加5ul
(2)在对照管中加入CD62P的同型对照抗体、CD61 各20μl
(3)在试验管中加入CD62p抗体和CD61抗体各20μl。
(4)轻轻混匀，室温暗处孵育15-20分钟。
(5)孵育后，加入500ul的PBS（若血小板数目过多，可以多加一
些PBS），混匀后上机检测；若不能立即上机，加入500ul 1%的多聚甲醛溶液固定，24小时内上机分析。
注意事项：
1、在所有操作中动作应轻柔，不可力度过大，因为血小板容易活化
2、方案的建立：
两张图：（1）散点图CD61/SS，圈CD61阳性的血小板（2）直方图CD62P，分析血小板的表达情况
FS，SS均应选择Log方式检测，阈值设在FL1（CD61的荧光通道）上，值可能会比较大，可能在200、300左右。
血小板抗体检测临床应用妇产科篇
在分娩时选择性剖宫产可能有助于防止脑出血发生。
3.剖腹产
在一些情况，IVIG的作用是不可预测的，因此需要每周进行宫内血小板输注。然而在子宫内的血小板输注是一种侵入性的过程，有胎儿损失的风险，尤其是对低血小板计数的胎儿。如果出血性疾病是由血管损伤造成的，那么输血小板是不起作用的。胎儿血小板输注可能需要重新评估，以更好地平衡这种治疗的风险和有效性。
血小板抗原
相关疾病与反应
同种异体抗原同种抗原自身抗原药物依赖性抗原
输注无效发热、变态反应,TRALI流产新生儿（或胎儿）血小板减少、颅内出血
输注无效非溶血性输血反应反复流产新生儿同种免疫性血小板减少症（NAIT）
血小板血型与临床--同种异体抗原
血小板
输血
妊娠
骨髓移植
致敏血小板并引起破坏
抗供者血小板抗体
1
胎儿宫内死亡或颅内出血（ICH）可能早在14-16周妊娠时发生；而在妊娠30周之前，胎儿因NAIT导致的ICH发生的概率为10%。患有NAIT的新生儿产后患有ICH的概率为10%~20%，其中有10%的死亡率。研究者发现，患有ICH的新生儿常伴有神经功能损伤。
2
与新生儿溶血病不同的是，NAIT可能会出现在第一次妊娠，且在以后的妊娠中血小板抗体阳性率为100%，患有NAIT的概率非常高，且血小板减少症的程度更严重。
在胎儿出生前再检测一次孕妇体内血小板抗体的水平，如阳性则提示临床医生要做好胎儿患新生儿血小板相关性疾病的治疗预案。
临床意义
妊娠期血小板降低的查因：对于妊娠期血小板减低的孕妇（尤其是罹患或有自身免疫性疾病史）建议进行血小板抗体检测以对其孕期流产、死胎以及新生儿罹患血小板相关免疫性疾病的风险作出评估并提示临床医生尽早制定相应治疗方案。
流式细胞术检测血小板功能及其临床应用
由于血小板的活化程度可由血小板 酶作外源激动剂时 ,为防止血小板聚集
膜糖蛋白表达水平的高低来判断 ,近年 并形成纤维蛋白凝块 ,可在全血标本中
来 ,文献报道利用流式细胞术 ,特别是全 加 入 四 肽 化 合 物 Gly2Pro2Arg2Pro
血法流式细胞术 ,检测血小板膜糖蛋白 ( GPRP) [3] 。固定这一步若不干扰单抗
它仅在血小板活化时才因构象变化而显 活化血小板检测的一些代表性单抗 。
21 血小板缺陷性疾病 :全血法流式
露出来 。因此 ,使用这个表位的荧光单 抗 ,我们能更精确地在更早阶段检测到
三 、诊断学意义及临床应用
细胞术提供了一个简单 、迅速的方法来
利用全血法流式细胞术检测上述血 诊断血小板膜糖蛋白缺陷性疾病 ,如巨
号 。探测器收集每个细胞的荧光讯号和 的百分率 。阳性血小板百分率法与荧光
光散射 ,然后传入计算机进行分析 。 传统的流式细胞术检测血小板膜糖
蛋白的表达 ,常用的样本是经洗涤的血 小板或富含血小板的血浆 。由于血小板 极易活化激惹 , 样本经离心 、洗涤等步 骤 ,容易人为地导致体外血小板激活 ,影 响临床诊断价值 。为此 ,Shatti 等[2] 引入 了全血法流式细胞术 。该技术能使用全 血样本测定循环中血小板的活化状态以 及血小板对激活剂的功能应答 。
抽血抗凝 →稀释 →生物素化的检测
板相关疾病的诊断中 ,检测血小板功能 用单克隆抗体 (单抗) →激动剂或缓冲液
的方法常常是有争议的 。这通常是由于 →固定 (1 %多聚甲醛) →FITC 标记的鉴
方法本身的原因造成的[1] ,譬如 ,静脉阻 别用单抗 →PE2卵白素 →稀释 。
滞 、抗凝剂选择 、离心 ,甚至标本处理不
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测血小板功能及其临床应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）检测血小板功能及其临床应用血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
关键词：血小板临床应用流式细胞术血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白表达水平的高低来判断，近年来，文献报道利用流式细胞术，特别是全血法流式细胞术，检测血小板膜糖蛋白的表达［2］。
该技术能灵敏、特异地检测血液中活化血小板，并评价其功能。
现就全血法流式细胞术检测血小板功能的方法及临床应用现状和潜力进行综述。
一、全血法流式细胞术1.方法学：流式细胞仪能快速测定大量个体细胞的特性。
样品中欲分析的细胞预先进行荧光标记，然后由压缩氮经硅管送达标本室，再以5 000～10 000个细胞/秒的速率逐个射入光敏感区。
在适当波长的激发光作用下，被特殊染色的细胞发射出一定量的荧光脉冲讯号。
探测器收集每个细胞的荧光讯号和光散射，然后传入计算机进行分析。
传统的流式细胞术检测血小板膜糖蛋白的表达，常用的样本是经洗涤的血小板或富含血小板的血浆。
由于血小板极易活化激惹，样本经离心、洗涤等步骤，容易人为地导致体外血小板激活，影响临床诊断价值。
为此，Shatti等［2］引入了全血法流式细胞术。
各类血小板功能检测的临床意义
显微镜计数法
通过人工显微镜观察血液样本，计数血小板数 量。
其他方法
如流式细胞术、电镜技术等，用于特殊情况下或进一步研究。
血小板计数检测的临床意义
诊断出血性疾病
血小板计数是诊断出血性疾病的 重要指标，如特发性血小板减少 性紫癜、血栓性疾病等。
监测抗凝治疗
对于接受抗凝治疗的患者，定期 检测血小板计数有助于评估治疗 效果和调整治疗方案。
通过检测血小板表面的活化标记物， 了解血小板活性状态。
血小板功能检测的临床应用
诊断血栓性疾病
通过对血小板功能的检测，有助于诊 断血栓性疾病，如动脉粥样硬化、心 肌梗死、脑卒中等。
评估心血管疾病风险
通过检测血小板功能，可以评估个体 发生心血管疾病的风险，为预防和治 疗提供依据。监测抗血小板药物治疗效果来自血小板活化检测的临床意义
诊断血栓性疾病
01
血小板活化是血栓形成的关键步骤，通过检测血小板活化程度
有助于诊断血栓性疾病，如心肌梗死、脑梗死等。
评估抗血小板治疗效果
02
对于接受抗血小板治疗的患者，检测血小板活化程度有助于评
估治疗效果，指导治疗方案调整。
预测心血管事件风险
03
血小板活化程度与心血管事件风险密切相关，通过检测血小板
活化程度有助于预测患者发生心血管事件的风险。
血小板活化检测的注意事项
01
02
03
标本采集和处理
采集血液标本时应避免过 度挤压和抗凝剂不足，防 止血小板活化和聚集。
检测方法选择
不同检测方法对血小板活 化的敏感性和特异性存在 差异，应根据具体情况选 择合适的检测方法。
结果解读
结合患者临床表现和其他 检查结果综合分析血小板 活化检测结果，避免误诊 和漏诊。
血小板 抗原抗体检测
自身 抗体
被动同种异体免疫 性血小板减少症
移植相关同种异体 免疫性血小板减少 症
自发性血小板减少 症
继发于母体自发性 血小板减少症
HLA / HPA 抗 体
HPA1b(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, AntiCD36 HLA-I抗体50~80% 17~25%(日本人为 HPA-2b), HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA3b,HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b
血小板抗原抗体
广州医科大学附属第五医院 输血科
b
1
目录
血小板抗原 血小板抗体 抗体检测及交叉配血
血小板相关疾病
b
2
血小板抗原
❖ 血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体, 并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.
❖ 血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原
筛选基因型相容的供者 避免血小板抗体的产生
采取预防和治疗措施 避免流产、出血等
减少血小板输注无效 避免紫癜、出血和死亡
b
11
血小板抗原定型
HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a ba ba b a b ab a b
阳性对照条带 等位基因条带
1bb
2ab
3bb
4aa 5aa 15aa
❖ 血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）
b
3
血小板抗原
血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 ❖ 来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所
血小板抗体检测和相容性血小板输注的应用
血紫癜 （Ｔ ） Ｐ Ｐ 相符合 。 对血小板输注疗效 的评价 ， 由于血小板
输 注后 患 者 出血症 状 不易 量化 ，故 以血小 板恢 复 百分 率
的 １ ３例 进 行 ２次 以 上 血 小 板 输 注 治 疗 的血 液 病 及 肿 瘤 患 １
上普遍采用机采血小板输注 ， 但有妊娠史 的女性或 多次输血
的患者 ， 易产生同种免疫 ， 导致血小板输注无效 （Ｔ 。本文 Ｐ Ｒ） 通过对 １ ３例多次输注 机采血小板 的患者进行 血小板抗体 １
展 ， 腔镜 、 腹 宫腔 镜 下 处 理 子宫 肌 瘤 已成 为手 术 发 展 的方 向 ， 具 有 创 伤 出血 少 、 复 快 的 特 点 。 恢
［ ］ 黎培毅 ， ４ 刘宏伟 ， 杨延林 ． 腹式筋膜 内子宫 切除术． 用妇产科 实
杂志，９ ８ １ （ ）３ ． １９ ，４ １ ：６ ［ ］ 唐 良萏 ， ５ 卞度宏． 妊娠合并子宫肌瘤 的处理 ． 实用妇产 科杂志 ，
被检测 。
１ 统计 学 处 理 ． ４
Ａ Ｏ血 型不合而导致血小板破坏 ｌ。若血小板输 注后 １ｈ的 Ｂ ５ ｌ Ｃ Ｉ７ ， Ｃ＜ ． 应首先考虑免疫 因素所 致 ； １ｈ的 Ｃ Ｉ 数在正 ５ 若 Ｃ指
常范 围内， ２ 而 ４ｈ的 Ｃ Ｉ４５ 则应考 虑非免疫性 因素所致 。 Ｃ ＜ ．， 本研究结果显示 ４ ． ６９ ％患者出现 Ｐ Ｒ， Ｔ 与文献 ［ ］ ６ 报道在多次 输血 和慢性血小板减少 患者 中 ，有 ３ ％一０ ０ ７ ％出现血小板输
为正常卵巢组织。我院在全子宫切除术时是否切 除卵巢 已采 取非常慎重的态度 。术中应仔细检查双侧卵巢 ， 若正常 ． 原则 上予 以保 留。
参 考 文 献
血液学检验33第七章-第2节-血小板的检验
1.是诊断特发性血小板减少性紫癜的指标之一 2.是ITP观察疗效及估计预后的指标 3.有助于研究其他疾病的免疫机制 【应用评价】 1.方法学
2.自身抗体的类型
第二节 血小板检验
六、血小板生存时间
【实验原理】根据观察单次剂量服用阿司匹林后血 小板TXB2和MDA生成量的恢复曲线可以反映血小板 的生存时间。可用ELISA或RIA测定TXB2或MDA的含 量。 【参考区间】TXB2法 7.6～12d，MDA法 9～12d
第二节 血小板检验
六、血小板生存时间
【临床意义】PST缩短见于血小板破坏增多性疾病 、 血小板消耗过多性疾病、高凝状态和血栓性疾病等。 【应用评价】PST测定主要有放射性核素和非放射性 核素两类方法。放射性核素法测定的准确度较高； TXB2或MDA测定的非放射性核素法可避免使用放射性 核素，操作简便。
第 第一 七章 章 造 血血栓及与造止血血调疾控病 检验技术
第一节 造血器官与造血微环境 第二节 血小板检验
单击目此录处编辑母版标题样式
一、血小板黏附试验 二、血小板聚集试验 三、血小板膜糖蛋白测定 四、血小板活化分析 五、血小板自身抗体 六、血小板生存时间 七、血小板第3因子有效性测定
第二节 血小板检验
第二节 血小板检验
七单、击血小此板处第编3因辑子母有版效标性测题定样（式PF3 ）
【实验原理】将健康人和患者的富含血小板血（PRP） 和乏血小板血浆（PPP）交叉混合，以白陶土激活 FⅫ，加钙离子后测定混合血浆的凝固时间，比较各 组血浆凝固时间的差异，从而判断PF3是否有缺陷。 【参考区间】受检者与健康人PRP、PPP交叉混合的 凝固时间延长＜5s 。
第二节 血小板检验
二、血小板聚集试验
血小板抗体检测及临床应用
荧光法
√
√
极高 一般 ＞2h 荧光显微镜 或流式细胞仪
敏感性高 特异性不足
固相凝集法
√ √
高 较好 ＜1h 平板离心机，洗板机
血小板交叉配型应用最 为广泛的方法
03 固相法血小板检测
MASPAT试剂盒组成
MASPAT试剂盒 (K1360)
• 96孔板 (12 条 *8 孔) • 微孔上包被有血小板单克隆抗体 • MASPAT LISS液：10 ml • MASPAT 抗人 IgG: 6 ml • 阳性质控(混合血小板特异性抗体): 1 ml • 阴性质控(不含血小板特异性抗体): 1 ml
非溶血性输血反应风险评估
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体是引起临床非溶血性发热输血不良反应的最主 要原因，尤其是有输血史、输血小板史、妊娠史、器官移植史、自身免疫性疾病史等患 者临床输血工作中，输血不良反应约70%. 文献报道输注红细胞为2-6%，输注血小板为20-30%，多次输血患者高达27-63%.
目的
检测受血者血清中是否存在待输血小板的抗体，或患者反复输注血小板、全血及血小板 的血液制品后产生血小板抗体，这些抗体能够导致血小板输注无效及输血反应。
临床意义
只有经过血小板筛查和配型，输注与患者相合或基本相合的血小板，才能达到安全有效 输注血小板功效，另外血小板抗体筛查可协助诊断某些血小板减少症。
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热输血反应 非常有意义。
05 血小板抗体检测应用（输血科） 血小板抗体阳性性别比较及发生NHTR比例
吴宇辰，徐笑红，叶宏宇，血小板抗体对非溶血性输血反应的影响，中国输血杂志，2015-28.8
06 血小板抗体检测应用（输血科） 输血反应与血小板抗体关系
流式细胞仪操作规程 (1)
流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定2：HLA-B27测定3：CD55／CD59测定4：血小板抗体测定5：红细胞抗体测定6：粒细胞抗体测定7：白血病免疫分型测定8：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定9：XL操作步骤淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号：200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定(C D系列)方法流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理：双/三色直接免疫荧光法。
荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数。
淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD5+，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+；抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。
根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。
标本采集与处理受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。
采集部位静脉采血抗凝剂 EDTA或肝素抗凝血要求 1．样本量至少1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。
若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
4．溶血样本不能用。
试剂品牌剂型规格贮存贝克曼库尔特成分 1：单克隆抗体液体 1ML 2—8℃2：全血溶血试剂液体A：甲酸液体 70ML 室温B：碳酸钠等液体 32ML 室温C：多聚甲醛液体 14ML 室温3：鞘液液体 20L 室温4：清洗液液体 5L 室温5：荧光微球液体 10ML 2-8℃质控品 BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8℃可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。
原发免疫性血小板减少症GPIIb／IIIa抗体检测的临床意义
不同性别、临床科室患者血小板抗体筛查结果分析
㊃论著㊃不同性别㊁临床科室患者血小板抗体筛查结果分析*陆乐1,李平1ә,刘婷婷1,王树亚1,周勤21.南京大学医学院附属鼓楼医院输血科,江苏南京210008;2.江苏师范大学数学与统计学院,江苏徐州221116摘要:目的调查血小板抗体在住院患者中的阳性率,分析血小板抗体在性别之间的差异及在临床科室的分布情况,从而进一步保障临床患者输注血小板的有效性与安全性㊂方法选取2019年3-5月在南京大学医学院附属鼓楼医院有输血可能的入院患者8250例作为研究对象,采用固相凝集法检测其血小板抗体㊂计算抗体阳性率,并利用R3.4.1软件进行统计分析㊂结果女性患者的血小板抗体阳性率(6.60%)显著高于男性患者(4.43%),差异有统计学意义(P<0.05)㊂聚类分析结果显示风湿免疫科㊁血液内科和中医科患者的血小板抗体阳性率显著高于其他临床科室,差异有统计学意义(P<0.05)㊂结论女性患者及血液病㊁风湿免疫疾病患者应重视血小板抗体筛查,以便阳性患者在血小板输注前进行血小板交叉配型,避免出现血小板输注无效㊂关键词:固相凝集法;血小板抗体;血小板输注无效;输血安全D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2021.03.002中图法分类号:R446.6文章编号:1673-4130(2021)03-0263-04文献标志码:AA n a l y s i s o f p l a t e l e t a n t i b o d y s c r e e n i n g r e s u l t s i n p a t i e n t sw i t h d i f f e r e n t g e n d e r a n d c l i n i c a l d e p a r t m e n t s*L U L e1,L I P i n g1ә,L I U T i n g t i n g1,WA N G S h u y a1,Z H O U Q i n21.D e p a r t m e n t o f B l o o d T r a n s f u s i o n,G u l o u H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o M e d i c a l C o l l e g eo f N a n j i n g U n i v e r s i t y,N a n j i n g,J i a n g s u210008,C h i n a;2.S c h o o l o f M a t h e m a t i c s a n d S t a t i s t i c s,J i a n g s u N o r m a l U n i v e r s i t y,X u z h o u,J i a n g s u221116,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e p o s i t i v e r a t e o f p l a t e l e t a n t i b o d y i n h o s p i t a l i z e d p a t i e n t s,a n a l y z e t h e d i f f e r e n c e o f p l a t e l e t a n t i b o d y b e t w e e n g e n d e r s a n d t h e d i s t r i b u t i o n o f c l i n i c a l d e p a r t m e n t s,s o a s t o f u r t h e r e n s u r e t h e e f f e c t i v e n e s s a n d s a f e t y o f p l a t e l e t t r a n s f u s i o n i n c l i n i c a l p a t i e n t s.M e t h o d s A t o t a l o f8250h o s p i-t a l i z e d p a t i e n t s w i t h t h e p o s s i b i l i t y o f b l o o d t r a n s f u s i o n i n G u l o u H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o M e d i c a l C o l l e g e o f N a n j i n g U n i v e r s i t y f r o m M a r c h t o M a y2019w e r e s e l e c t e d a s t h e r e s e a r c h o b j e c t s,a n d t h e i r p l a t e l e t a n t i b o d i e s w e r e d e t e c t e d b y s o l i d p h a s e a g g l u t i n a t i o n m e t h o d.T h e a n t i b o d y p o s i t i v e r a t e w a s c a l c u l a t e d a n d a n a l y z e d b y R3.4.1s o f t w a r e.R e s u l t s T h e p o s i t i v e r a t e o f p l a t e l e t a n t i b o d y i n f e m a l e p a t i e n t s(6.6%)w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n m a l e p a t i e n t s(4.43%),t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).T h e r e s u l t s o f c l u s t e r a n a l y s i s s h o w e d t h a t,t h e p o s i t i v e r a t e o f a n t i b o d y i n r h e u m a t o l o g y d e p a r t m e n t,h e m a t o l o g y d e p a r t-m e n t a n d t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e d e p a r t m e n t w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n o t h e r d e p a r t m e n t s,t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).C o n c l u s i o n F e m a l e p a t i e n t s a n d p a t i e n t s w i t h h e m a t o l o g i c d i s e a s e s a n d r h e u m a t i c i mm u n e d i s e a s e s s h o u l d p a y a t t e n t i o n t o p l a t e l e t a n t i b o d y s c r e e n i n g,s o t h a t p o s i t i v e p a t i e n t s c a n c a r r y o u t p l a t e l e t c r o s s m a t c h i n g b e f o r e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n t o a v o i d i n e f f e c t i v e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n.K e y w o r d s:s o l i d p h a s e a g g l u t i n a t i o n;p l a t e l e t a n t i b o d y;i n e f f e c t i v e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n;t r a n s f u s i o n s a f e t y血小板是巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质,在伤口愈合㊁止血及器官移植排斥等生理和病理过程中有着十分重要的作用㊂近年来随着输血技术的提高,血小板输注已成为提高临床㊃362㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3*基金项目:国家自然科学基金项目(11671178);江苏省输血协会英科新创科研基金项目(J s2018028)㊂作者简介:陆乐,女,主管技师,主要从事输血免疫学研究㊂ә通信作者,E-m a i l:g l y y s x k@163.c o m㊂本文引用格式:陆乐,李平,刘婷婷,等.不同性别㊁临床科室患者血小板抗体筛查结果分析[J].国际检验医学杂志,2021,42(3):263-265.患者(特别是血液疾病和肿瘤患者)血小板计数,防止出血最为快速㊁有效的方法,是现代成分输血技术领域的重要内容[1]㊂通过输注血小板可以有效降低血小板疾病导致的病死率,对于临床上反复输血的患者,其体内易产生血小板抗体[2],经常出现血小板输注无效㊂血小板抗体对血小板的破坏还会严重影响患者的生命健康与安全[3]㊂导致血小板输注无效的原因包括非免疫因素和免疫因素,非免疫包括发热㊁感染㊁脾大等[4],免疫因素为血小板抗体[5],其中最主要的原因为血小板同种抗体㊂现将南京大学医学院附属鼓楼医院8250例患者血小板抗体检测结果与分析报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选择2019年3-5月南京大学医学院附属鼓楼医院有输血可能性的入院患者,排除临床诊断不明确㊁病历资料不完整的患者,共计8250例为研究对象㊂其中男性3975例,女性4275例;发病年龄1~101岁,平均(51.0ʃ18.26)岁㊂1.2试剂与仪器1.2.1试剂血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)㊁血小板抗体筛检细胞㊁血小板抗体检测用指示红细胞均购自长春博德生物技术有限责任公司㊂1.2.2仪器T D58低速离心机购自长沙湘智离心机有限公司,P W-812全自动酶标洗板机购自深圳汇松科技发展有限公司㊂1.3检测方法1.3.1标本前处理采集患者2m L左右静脉血,采用乙二胺四乙酸二钾抗凝,1500ˑg离心10m i n㊂1.3.2固相凝集法(1)血小板抗体检测试剂盒平衡至室温(18~25ħ),制备洗涤液,将浓缩洗涤液用蒸馏水按1ʒ24体积比稀释㊂(2)稀释商品化的冻干血小板,每支血小板冻干粉加入0.5m L生理盐水,溶解混匀㊂(3)反应板条上标记患者编号㊁阳性对照和阴性对照㊂每个反应孔中加入1滴(50μL)血小板悬液,轻摇反应板10s㊂(4)平板式离心机50ˑg离心5m i n,将血小板固定在反应孔底部㊂(5)轻轻倒出反应孔中的液体,洗涤液清洗反应板3次㊂(6)每个反应孔中加入2滴(100μL)低离子强度溶液,并按编号向相应反应孔中加入1滴(50μL)患者血浆㊁阳性对照液及阴性对照液㊂(7)用封口胶将反应孔封好,混匀,平放入湿盒中,37ħ温浴30m i n后,弃封口胶,清洗反应板5次㊂(8)加入1滴抗人I g G及1滴指示红细胞试剂,混匀,观察记录结果㊂1.4统计学处理利用R3.4.1统计软件对结果进行分析,计量资料不满足正态分布以M(P25~P75)表示;计量资料满足正态分布以xʃs表示,采用t检验;计数资料以率表示,率的比较采用χ2检验;采用聚类分析对临床科室进行分组;以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1不同性别血小板抗体筛查结果比较本研究中女性患者血小板抗体阳性率(6.60%)显著高于男性(4.43%),差异有统计学意义(χ2=18.478,P<0.05)㊂见表1㊂表1不同性别的血小板抗体筛查结果比较性别检测例次(n)阳性例次(n)阳性率(%)男39751764.43女42752826.602.2不同临床科室血小板抗体阳性率比较不同临床科室的血小板抗体阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=86.513,P<0.05)㊂见表2㊂表2不同临床科室的血小板抗体阳性率比较编号科室检测例次(n)阳性例次(n)阳性率(%) 1产科232198.192耳鼻咽喉头颈外科493244.873风湿免疫科671725.374妇科760516.715感染科3738.116骨科1399755.367呼吸内科3026.678急诊中心1417.149老年科6035.00 10泌尿外科869424.83 11男科800.00 12内分泌科5135.88 13普通外科1477664.47 14烧伤整形外科7745.19 15神经内科800.00 16神经外科458183.93 17肾科7556.67 18疼痛科100.00 19消化内科1030545.24 20心胸外科665375.56 21心血管内科1317.69 22血管外科182105.49 23血液内科1121715.18 24中医科17211.76 25肿瘤科4424.55 26重症医学科7122.82 2.3聚类分析利用最长距离法对表2中的所有临床科室的血小板抗体阳性率进行聚类分析㊂依照血小板抗体阳性率将样本分成两类,第一类是血小板抗㊃462㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3体阳性率高的科室,包括风湿免疫科㊁血液内科和中医科;第二类为其他科室,即这些科室血小板抗体阳性率较低㊂比较第一类样本的血小板抗体阳性率,结果显示差异无统计学意义(χ2=3.447,P>0.05);比较第二类样本的血小板抗体阳性率,结果显示差异无统计学意义(χ2=14.536,P>0.05)㊂说明聚类后,每一类中的各科室血小板抗体阳性率无显著差别㊂聚类后对两类样本的阳性率进行比较,利用均值t检验,差异有统计学意义(t=3.0276,P<0.05),表明第一类科室(3个)和第二类科室(23个)聚类后两类间存在明显差异,即第一类科室风湿免疫科㊁血液内科和中医科的血小板抗体阳性率显著高于其他科室,同时也表明聚类是有意义的㊂见图1㊂注:图中两个矩形内的科室分别归类为两类样本,数字代表科室编号㊂图1不同科室血小板抗体阳性率的聚类树状图3讨论血小板表面存在着复杂的抗原系统,一般可分为血小板相关抗原与血小板特异性抗原㊂血小板相关抗原主要有红细胞血型抗原和人类白细胞抗原(H L A)㊂红细胞血型抗原包括A B H抗原,此外还有其他血型抗原,如L e a㊁L e b等㊂血小板膜表面表达的H L A主要为H L A-Ⅰ类抗原,包括H L A-A㊁H L A-B 和少量的H L A-C㊂而血小板特异性抗原由血小板特有的抗原决定簇组成,表现出血小板独特的遗传多态性㊂血小板特异性抗原主要分布于血小板膜糖蛋白上,构成血小板膜结构的一部分,同时还分布于血管内皮细胞㊁结缔组织和平滑肌细胞等㊂妊娠㊁骨髓移植和反复输血都会刺激机体产生同种血小板抗体㊂这些抗体引起机体产生一系列血小板抗原抗体免疫反应[6],当患者进行血小板输注治疗时就可能导致血小板输注无效㊂特别是有些反复多次接受血小板输注的患者,血小板输注无效发生率明显增高,呈正比关系[1,7]㊂根据原卫生部颁布的‘临床输血技术规范“[8]中成分输血指南的规定,临床输注单采血小板必须进行A B O同型输注,因此,避免了因为A B O血型抗体导致的血小板输注无效,但H L A-Ⅰ类抗体与血小板特异性抗体导致的输注无效尚无法避免㊂固相凝集法中的血小板筛检细胞上同时有H L A抗原和人类血小板抗原,可以及时检测出患者体内对应的血小板同种抗体,从而提示可能出现的血小板输注无效㊂本次试验选取8250例住院患者检测体内血小板抗体,临床科室基本覆盖㊂结果显示,血小板抗体阳性率在不同的临床科室分布有显著差异,风湿免疫科㊁血液内科和中医科血小板抗体阳性率明显高于其他临床科室,这与临床科室患者疾病有关㊂本次研究中血液内科患者均为血液肿瘤患者,其血小板抗体阳性率为15.18%,略高于董晓锋等[9]报道的血液肿瘤患者的阳性率(10.02%)㊂究其原因可能与患者治疗原发病反复输注血液制品有关,输注的血液制品(包括血小板)刺激自身免疫系统产生除A B O血型抗体外的抗-H L A或抗-H P A等同种抗体[10]㊂血小板输注次数越多,血小板抗体阳性率越高[11-12]㊂有研究报道,当患者免疫力低下时抗原抗体反应减弱,即便抗体筛查阳性的患者输注血小板后也会有效果[13]㊂在本研究中,风湿免疫科患者血小板抗体阳性率达25.37%,高于血液病患者,其中血小板抗体阳性率排在前3位的疾病为系统性红斑狼疮㊁干燥综合征㊁类风湿关节炎㊂其他自身免疫系统性疾病也有阳性患者,如抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎㊁弥散性(混合性㊁未分化)结缔组织病及系统性硬皮病等,但这些病例数较少㊂国内较少见对风湿免疫科患者血小板抗体的研究,此类患者自身免疫系统功能紊乱,容易导致存在抗血小板的自身抗体,使其血小板数量低下,引起出血风险,应引起重视㊂中医科患者样本例数少,在此不作讨论㊂女性患者血小板抗体阳性率高于男性患者,与女性患者妊娠史密切相关㊂妊娠是女性患者产生血小板抗体的主要原因[14]㊂在我国二孩政策下,妊娠次数的增加会使血小板抗体阳性率也增高[15]㊂另外,也有研究表明,女性患者血小板抗体阳性率高与女性患者流产也有相关性,随着流产次数增加,血小板抗体阳性率也会相应升高㊂在统计数据时,男科㊁神经内科和疼痛科这3个科室的样本量很小,而样本量的大小可能会影响血小板抗体阳性率的估计㊂如删掉样本量低于30例的临床科室数据,重新考虑上述问题,总体结论与之前一致,即临床科室之间的血小板抗体阳性率存在显著差别,而性别依然会影响血小板抗体阳性率㊂血小板抗体的存在会导致临床患者出现血小板输注无效㊁输血后紫癜㊁新生儿血小板减少性紫癜等多种免疫反应,当患者发生血小板输注无效后,可通过血小板抗体检测判断输注无效的原因是否由免疫因素引起[16]㊂女性,风湿免疫疾病㊁血液病的患者在进行血小板输注治疗前应考虑进行血小板抗体筛查,如果条件允许可以进一步做血小板交叉配型试验,从而选择最适合患者的供者血小板,达到临床治疗的目的㊂(下转第269页)㊃562㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3内的高凝状态影响了胎盘的正常血供,从而导致不良的结局㊂R O C曲线分析结果显示,H c y单独检测预测难免流产的灵敏度最高,为96.70%,但是其特异度较低,仅为55.70%,所以H c y单独检测用于难免流产的预测价值较低㊂C A125单独检测预测难免流产的灵敏度和特异度均较高,分别为88.69%和88.66%,其A U C为0.946㊂但是β-H C G㊁C A125㊁H c y㊁D-D㊁F I B联合检测预测难免流产的灵敏度和特异度分别为96.50%和98.50%,A U C为0.997,均显著优于各指标单独检测㊂参考文献[1]毕艳慧.先兆流产孕妇同型半胱氨酸㊁叶酸及凝血功能与妊娠结局的相关性研究[J].锦州医科大学学报,2018,39(5):22-25.[2]廖琪.凝血功能㊁同型半胱氨酸㊁B族维生素与早期先兆流产相关性[J].中国计划生育学杂志,2019,27(12): 1600-1603.[3]黄烨,陈纬,刁军成.C A125㊁H C G和P对早期先兆流产患者妊娠结局预测的比较[J].重庆医科大学学报,2016, 41(3):253-258.[4]林涛,沈晓露,潘豪杰,等.D-二聚体在孕早期不明原因复发性流产患者中临界值的探讨[J].生殖医学杂志,2018, 27(4):339-344.[5]谢幸.妇产科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013: 48-49.[6]W A D A H.P r e-t h r o m b o t i c(h y p e r c o a g u l a b l e)s t a t e/h y p e r c o-a g u l ab l e d i s e a s e[J].R i n s h o B y o r,2015,63(5):1405-1411.[7]WA N G Y,L I N X,WU Q,e t a l.T h r o m b o p h i l i a m a k e r s i n p a t i e n t s w i t h r e c u r e n t e a r l y m i s c a r i a g e[J].C l i n L a b, 2015,61(8):1787-1794.[8]N E L E N W L,B U L T E N J,S T E G E R S E A,e t a l.M a t e r-n a l h o m o-c y s t e i n e a n d c h o r i o n i c v a s c u l a r i z a t i 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血小板聚集试验(PAgT)检测的临床意义
血小板聚集试验（PAgT)检测的临床意义一、概述血小板聚集是指血小板与血小板之间相互黏附，聚集成团的特性。
血小板黏附于胶原纤维后，就启动了血小板聚集反应。
参与血小板聚集的物质主要有血小板膜表面受体GPIIb/IIIa(为Fg受体)Fg和Ca2+，同时vWF、Fn 也可与GPIIb/IIIa和Ca2+或其他二价离子发生聚集反应。
能够诱导血小板发生聚集的物质称血小板聚集诱导剂。
血小板聚集是血小板进一步活化和参与二期止血、促进血液凝固的基础。
二、检测方法血小板聚集试验 (PAgT) 的测定方法较多，包括 PRP 透射比浊法、全血电阻抗法、剪切诱导法、光散射比浊法、微量反应板法和自发性血小板聚集试验等。
PRP 透射比浊法最常用，对鉴别和诊断血小板功能缺陷最有价值，但其不足是制备 PRP 时可因离心作用激活血小板，对小的血小板聚集块不敏感，高脂血症可影响 PRP的透光度。
三、临床意义1. 血小板聚集率降低：反映血小板聚集功能减低、有出血倾向，或抗血小板药物服用过量。
常见于血小板无力症、贮藏池病及低(无)纤维蛋白原血症、尿毒症、肝硬化、Wilson病、维生素 B12缺乏症、服用血小板抑制药物(如阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫等)。
2. 血小板聚集率增高：反映血小板聚集功能增强，常见于血栓前状态和血栓疾病等，或抗血小板药物对其效果不明显。
常见于血栓性疾病，如急性心肌梗死、心绞痛、糖尿病伴血管病变、脑血管病变、高β-脂蛋白血症、抗原-抗体复合物、人工瓣膜、口服避孕药等。
四、临床应用血小板功能检测的临床应用主要有三点：预测血栓风险，预测出血风险以及指导个体化治疗。
1. 急诊：怀疑血栓（心梗、脑梗）患者应立即实施血小板功能及凝血功能检测。
有助于筛查出症状或病灶不明显早期血栓患者，提早血栓诊断时间。
2. 心内科：对一些长期服用抗血小板药物(氯吡格雷或阿司匹林等)的高血压病人，进行检测，及时的发现“药物抵抗”的患者，针对这些患者进行“个体化”的抗血小板治疗，调整用药方案，将显著提高治疗效果。
JC-临床血液学检验-22血小板检验及疾病【44页】
由于检测结果的变异较大，临床上很少使用。
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七、血小板自身抗体
（platelet associated immunoglobulin，PAIg）
在某些免疫性疾病中，血小板膜表面存在着抗体（IgG、 IgA、IgM）或补体，导致血小板破坏过多， 检测PAIg和补 体的含量有助于判断血小板减少的原因
B:正常人血小板对低浓度ADP呈可逆性聚集
C:正常人血小板对中浓度ADP呈双峰、不可逆性聚集
D:正常人血小板对高浓度ADP呈单峰、不可逆性聚集
E：VWD患者血小板对瑞斯托霉素无反应
F:正常人血小板对瑞斯托霉素有反应
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PAgT参考值
最大聚集率 1分钟聚集率 聚集曲线斜率
不同仪器、不同诱导剂及浓度参考值有别 各实验室应建立自己实验室的参考值
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（5）其他检测
网织血小板↑，血小板生成素正常。
血小板寿命↓
ITP患者的实验室诊断主要根据： PLT、骨髓象、血小板相关抗体和补体
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3.ITP诊断
（根据2009年中华医学会血液学分会制定的标准）
至少2次化验检查血小板减少，血细胞形态无异常 脾脏一般不增大 骨髓检查显示巨系增生或正常，有成熟障碍 须排除继发性血小板减少症
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2.ITP检验
（1）ITP 血 象
计数：血小板数持续下降或↓↓，急性ITP ＜20×109/L，
慢性ITP为（30～80）×109/L，MPV及PDW↑。RBC数、
Hb及WBC数一般正常，严重出血或慢性反复出血者可
贫血
形态：血液涂片上可见大血小板、巨大血小板、畸形血小板、
血小板检查项目
血小板检查项目血小板检查项目介绍：血小板检查项目是对血液中的血小板进行定量与定性分析，用于诊断血小板异常。
血小板的基本功能是黏附、聚集、分泌、促凝血、血块回缩。
通过这些功能维持着正常人体的初期止血作用。
由于这些功能异常而导致的出血疾病包括遗传性和获得性两类，在有些疾病同时会有血小板功能异常和数量减少。
血小板检查项目正常值：100×109～300×109/L血小板检查项目临床意义：异常结果：(1)PLT-血小板计数血小板减少：生成减少，如再障、急性白血病等。
破坏过多：如原发性血小板减少性紫癜等。
消耗过多：见于弥散性血管内凝血，血栓性血小板减少紫癜等。
血小板分布异常导致的血小板减少，如脾大时，血液中可达90%以上的血小板储存在脾脏，导致血液中血小板轻至中度减少。
假性血小板减少：血样采用EDTA抗凝剂可诱导少数人(0。
1%)的血小板显著减低;血液中存在巨大血小板时，由于不能将其计数而假性减少。
这两种病例可见于巨血小板综合症。
注意：静脉血计数血小板结果稳定，干扰因素少。
末梢采血易导致血小板活化、聚集等。
(2)MPV-平均血小板体积血小板减少症的鉴别：脊髓造血功能受损时，MPV和PLT均减低：血小板破坏增多如ITP，MPV可增大;若脾切除，MPV和PLT均可升高。
骨髓造血功能评价：造血功能抑制时，MPV和PLT呈持续减低趋势，功能抑制严重，MPV越小;造血功能恢复时，MPV增高先于PLT升高。
MPV增大：巨血小板综合症等。
反应性血小板增多，如感染、手术等，MPV正常。
(3)PCT-血小板比容凡是PLT和(或)MPV增高，均可导致PCT增大，如原发性与继发性血小板增多症。
(4)PDW-血小板体积分布宽度增大有意义，血小板体积大小越是不均一，PDW越大。
临床意义待进一步研究。
(5)P-LCR-大型血小板比率血小板可分为小、中、大、巨型四种。
大血小板增多主要见于特发性血小板减少性紫癜;巨血小板增多见于巨血小板综合症。
血小板功能检测在抗血小板治疗中的应用
血小板功能检测在抗血小板治疗中的应用朱青贤【摘要】双联抗血小板治疗可显著改善急性冠状动脉综合征患者的预后,但在治疗过程中,仍有一定比例的患者发生血栓或者出血事件.这些个体化差异,提醒在临床工作中有必要进行血小板功能检测,用于评估患者对抗血小板药物的反应性,以进一步指导治疗方案的调整.现有的血小板聚集功能检测方法多种多样,需要从中选择适合可在临床推广应用的检测方法.本文对目前临床使用的血小板功能的检测方法做一简单介绍,并简要分析其检测结果对临床抗血小板治疗个体化的指导意义.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2018(031)012【总页数】3页(P1747-1749)【关键词】血小板功能检测方法;个体化差异治疗;检测方法选择【作者】朱青贤【作者单位】湖北省襄阳市襄州区人民医院 441100【正文语种】中文【中图分类】R446.11抗血小板治疗急性冠状动脉综合征(ACS)疾病和经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后预防血栓事件的治疗中扮演着关键的角色，尤其阿司匹林联合ADP受体(P2Y12)抑制剂(如氯吡格雷等)在临床广泛应用。
然而不同个体对抗血小板药物表现出个体化多样性差异，这些差异与再发血栓或出血等不良事件的发生显著相关。
基于血小板功能检测指导下的个体化抗血小板治疗在临床上已经被应用，近年来大量的临床研究也得出了循证医学的证据。
另外，2011年《美国心脏病学会基金会(ACCF)/美国心脏协会(AHA)/美国心血管造影和介入治疗学会(SCAI)PCI指南》也对其适应证给出了具体的指导意见。
血小板功能检测可以了解个体对抗血小板药物的反应性，帮助临床制定抗血小板治疗策略，提高治疗的疗效和安全性。
由于血小板功能检测方法众多且标准不一，目前国内还没有专门的指南(共识)来规范血小板功能检测，且临床医生和实验室人员对血小板功能检测的认识参差不齐，结合实际情况，共同探讨血小板功能检测在抗血小板治疗中的应用及个体化差异治疗方案。
血小板功能与抗体检查
血小板功能与抗体检查血小板功能与抗体检查包括血小板聚集试验(PAgT)、血块收缩试验(CRT)、血小板黏附试验(PAdT)、血小板膜α颗粒膜蛋白-140测定(GMP-140)、血小板第Ⅲ因子有效性测定(PF3aT)、血浆β-血小板球蛋白(β-TG)测定、血小板第Ⅳ因子(PF4)测定、血栓素(烷)B2测定(TXB2)、血小板钙流测定、血浆纤维连结蛋白(Fn)测定、血小板表面相关抗体IgG、IgM、IgA和补体C3测定、血小板膜糖蛋白自身抗体(GPⅡb／Ⅲa)测定、抗心磷脂抗体(ACA)测定、血小板寿命测定等。
1.血小板聚集试验血小板之间互相聚集的特性称血小板聚集功能。
当血管壁受损后，血小板应立即黏附于受损血管壁的创面处，继之血小板发生聚集反应，形成白色血栓，以利止血。
在体外，将二磷酸腺苷(ADP)、肾上腺素、凝血酶、胶原等血小板聚集诱导剂加入富含血小板的血浆内，通过肉眼、显微镜或血小板聚集仪观察血小板聚集反应，称为血小板聚集试验(PAgT)。
血小板聚集性增高见于动脉硬化、冠心病、急性心肌梗死、糖尿病、血栓性疾病、肾炎、肾病综合征、家属性高脂血症Ⅲ型、脑血管病、外科大手术(如门脉高压行脾切除术)后等。
血小板聚集性降低见于血小板无力症、巨球蛋白血症、骨髓增生异常综合征、先天性低纤维蛋白原血症、肝硬化、肿瘤、坏血病、尿毒症、真性红细胞增多症、维生素B12缺乏症、细菌性心内膜炎、使用影响血小板聚集性的药物(如阿司匹林、双嘧达莫、右旋糖酐、保泰松、苯磺唑酮)等。
2.血块收缩试验(CRT)血液完全凝固后，由于血小板收缩蛋白的作用，使纤维蛋白网收缩，将网隙中的血清挤出，出现血块收缩现象，其收缩的程度取决于血小板的量和质、纤维蛋白原的浓度、凝血因子的水平、血细胞比容及试验时的温度。
观察血清量占原有全血量的百分比例，反映血块收缩的程度。
3.血小板黏附试验(PAdT)血小板具有黏附于伤口或异物表面及互相黏附的生理功能，称为血小板黏附性。
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富集血小板法：
1）800r/min*15min,取上清，
2）加4－5ml鞘液，2000r/min*3min,弃上清，重复一次。
3)分别向试管中加入准备好的10u1含血小板的PBS（血小板的量约为106）（血小板若在正常范围，稀释到原量直接取10u1。）。
4)分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
采集部位静脉采血
抗凝剂EDTA或肝素抗凝血
要求1．样本量2ml。
2．样本应在采集后6小时内完成，冷冻的标本或已固定的标本不能用。
3．样本血小板计数应在150-450×109/L之间。若>450×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<150×109/L，应多采集进行富集达到流式检测的细胞数。
4．溶血样本不能用。
C：多聚甲醛液体14ML室温
3：鞘液液体20L室温
4：清洗液液体5L室温
5：荧光微球液体10ML2-8℃
质控品BEKAMANCOULT，稀释的试剂于2-8℃可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。
仪器
BeckmanCoulterEPICSXL/FC500/Altra
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
成分1：一抗冻干0.2mg-20℃
小鼠抗IgD(No.IM0284)IgG(No.IM0279)IgM(No.IM0285)
二抗：山羊抗小鼠IgG(H+L) (No.IM0819)
冻干1mg-20℃
2：全血溶血试剂液体
A：甲酸液体70ML室温
B：碳酸钠等液体32ML室温
方案（Protocol）
5)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
6)洗或不洗，上机测样
全血法：
1）加4－5ml鞘液，1500r/min*15min,弃上清，后同上3）－6）
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.98% IgG<3.04%
IgM<3.0% IgD<2.91%
临床意义
为免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断、治疗、预后估计的重要指标，在ITP、胶原性疾病时升高。
血小板膜表面抗体测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
间接免疫荧光法。FITC标记的各型多克隆抗体，加到经离心富集的血小板中，与血小板膜上的相应的IgG-Fc片段结合，经过洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析。
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。