实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)

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血、尿液尿素氮(BUN)测定作业指导书

血、尿液尿素氮（BUN）测定作业指导书1.实验原理Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。

半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。

经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。

测定方式：比色法波长：670nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：尿素酶非蛋白质成份＋水—————→氨+ 二氧化碳氨＋氨指示剂—————→呈色剂2. 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。

定时收集的，稀释后的尿样。

2.3 标本采集与处理：2.3.1 血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。

测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。

将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。

冷藏的样品不能立即测试。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。

尿液样品在测试前要冷藏。

4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。

6. 试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。

xx厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

测定血清尿素的实验报告

一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。

3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。

二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。

尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。

二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。

因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。

其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。

- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。

- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。

- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。

- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。

- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。

- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

脲酶的测定方法

一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。

1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g 氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。

在37℃恒温箱中培养24ｈ。

然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。

取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。

脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。

标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。

1h内再分光光度计上于578nm处比色。

测血清尿素含量实验报告

一、实验目的1. 掌握血清尿素含量测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清尿素在临床医学中的意义。

二、实验原理血清尿素含量测定采用二乙酰-肟法，其原理如下：在强酸条件下，二乙酰与尿素发生缩合反应，生成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物。

该化合物的颜色深浅与尿素的含量成正比。

通过比色法，可以计算出血清中尿素的含量。

三、实验材料1. 试剂：二乙酰-肟试剂、血清、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水等；2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、试管架等。

四、实验步骤1. 标准曲线绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的标准尿素溶液；（2）向各试管加入2ml的二乙酰-肟试剂，充分混匀；（3）将试管置于60℃水浴中反应30分钟；（4）取出试管，用蒸馏水定容至5ml；（5）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（6）以尿素浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的血清样本；（2）按照标准曲线绘制步骤中的操作，进行反应和测定；（3）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（4）根据标准曲线，计算血清中尿素的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，结果显示尿素浓度与光密度呈线性关系，相关系数R²=0.998。

2. 血清尿素含量测定：根据标准曲线，计算各血清样本中尿素的含量，结果如下：样本1：尿素含量为5.2mmol/L；样本2：尿素含量为6.8mmol/L；样本3：尿素含量为7.4mmol/L；样本4：尿素含量为8.2mmol/L；样本5：尿素含量为9.0mmol/L；样本6：尿素含量为10.0mmol/L。

六、实验讨论1. 实验过程中，二乙酰-肟试剂的浓度、反应时间、温度等因素对实验结果有较大影响，应严格控制实验条件，以保证结果的准确性。

血生化中尿素的检测方法

血生化中尿素的检测方法
血生化中尿素的常见检测方法包括以下几种：
1. 尿素测定法：通过测定血液中尿素的浓度来评估肾脏功能。

这种方法常用于一般血液检查中，可以使用尿素酶法、尿素硝酸脱氮法等不同的技术。

2. 血尿素氮（BUN）测定法：通过测定尿液中尿素的氮含量来评估肾脏功能。

这种方法常用于评估肾脏疾病和蛋白质代谢紊乱。

3. 尿液尿素测定法：通过测定尿液中尿素的浓度来评估肾脏功能和蛋白质代谢。

这种方法常用于尿液分析中。

4. 血液尿素酸盐（或尿素氮）分析：通过测定血液中尿素酸盐或尿素氮的含量来评估蛋白质代谢和肾脏功能。

这些方法都是常规的临床检测方法，可以由医院的化验室或临床检验中心进行检测。

具体的检测方法选择会根据具体情况和需要来确定。

尿素氮测定

取4只试管，具体操作按下表进行。加入物(ml) 空白管（B）标准管（S）测定管（人）测定管（牛）
血清
尿素标准应用液蒸馏水二乙酰一肟溶液尿素氮试剂
—
— 0.1 0.5 5.0
—
0.1 — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
各管混匀后，置沸水中加热15min，取出置冷水中冷却后，分光光度计波长540nm，
【注意事项】 1．试剂中加入硫氨脲和镉离子可增加显色强度和色泽的稳定性，还可消除羟胺的干扰，但仍有轻度退色现象，故应及时
比色。
2．尿液中尿素亦可用此法测定，但因尿液中尿素浓度较高，
需将尿液作50倍以上稀释后再行测定。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个氮原子，因此1mmol/L尿素等于2 mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。
3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液尿素含量增加，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致尿道受压等。
2.血液尿素浓度降低较为少见，除婴儿、妊娠（血容量增加）及低蛋白高糖饮食
外，常见于严重肝病患者，如肝炎合并广泛性肝坏死、肝功能衰竭等。
血清（血浆）尿素氮测定
（二乙酰一肟显色法）
非蛋白含氮化合物包括除蛋白质以外的尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、核苷酸、嘌呤、谷胱甘肽等多种含氮有机物。体内氨基酸代谢产生的氨，主要经肝脏生成尿素，而后又主要经肾脏排出体外。因此，血清尿素浓度的测定是临床上应用较多的反映肾小

测定血清尿素的方法

测定血清尿素的方法
测定血清尿素的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：
1. 色谱法：使用气相色谱法或者液相色谱法，将血清中的尿素分离出来，并通过检测其峰值的面积或者浓度来确定尿素的含量。

2. 尿素酶法：利用尿素酶催化尿素水解产生氨和二氧化碳，并采用测定氨的方法来间接测定尿素的含量。

3. 尿素氮法：使用气体分析仪测定氨气，通过转化为尿素以后，测量尿素的氮含量来计算尿素的含量。

4. 尿素代谢率法：通过给予标记有碳14或者氢2的尿素，然后测定排出的二氧化碳或者水的放射性活性，从而测定尿素的代谢率。

这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于实验条件、设备以及研究需求。

在实际应用中，一般会根据实验目的和实验条件选择最适合的测定方法。

脲酶——Berthlot比色法测定游泳水中尿素

脲酶——Berthlot比色法测定游泳水中尿素
王荣堂
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】1999(9)6
【总页数】2页(P452-453)
【关键词】尿素;脲酶;Berthlot;比色法;游泳池;水检测
【作者】王荣堂
【作者单位】盐都县卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R123.1;R123.5
【相关文献】
1.脲酶—Berthlot比色法测定游泳水中尿素 [J], 王荣堂
2.脲酶-水杨酸盐光度法测定游泳池水中尿素及Cu^(2+)干扰的消除 [J], 龚仁敏;陈发扬;刘慧君;孙影芝
3.脲酶──Berthlot比色法测定游泳池水中尿素的影响因素分析 [J], 李慧;武传芹
4.邻苯二甲醛法、OPA法、脲酶—Berthlot法测定游泳池水中尿素的研究 [J], 陈国忠;钟建;刘天洁;陈建鸿;付大友
5.二乙酰一肟比色法测定游泳池水中尿素的不确定度分析 [J], 董静刚
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血清尿素测定方法

血清尿素测定方法
血清尿素测定是一种常用的临床实验室检测方法，用于评估肾功能和测定血氨水平。

以下是一种常用的血清尿素测定方法：
1. 准备样本：从患者的静脉或指尖采集血液样本，并将其放入干燥的试管或离心管中。

2. 离心：将采集到的血液样本离心，以分离血浆或血清。

3. 取样：使用移液器或微量吸管，将所需量的血浆或血清转移到清洁的试管中。

4. 加试剂：添加尿素试剂到试管中。

尿素试剂通常是一种含有酶的溶液，可以将尿素转化为氨气。

5. 反应：将试管放入恒温水浴或试剂盒中，进行反应。

在此过程中，尿素与试剂中的酶发生反应，产生氨气。

6. 检测：使用光度计或其他光学方法，测量反应后产生的氨气的吸光度。

吸光度的程度与血清中尿素的浓度成正比。

7. 计算：通过比较待测样本的吸光度与标准曲线上的吸光度，确定样本中尿素的浓度。

需要注意的是，每个实验室可能有自己的具体操作步骤和试剂，因此在进行血清尿素测定时，还应该参考相应的实验室方法手册。

脲酶_Berthlot比色法测定游泳水中尿素(1)

性胸水组(P<0101)。

恶性胸水组的胸水CEA水平显著高于血清CEA水平(P<0101),而良性胸水组的胸水CEA水平接近血清CEA水平(P>0105)。

测定结果还显示:CEA、LDH和ADA三项指标联合检测比任何一种指标单项检测,对于恶性胸水和良性胸水的鉴别诊断都更有意义,其特异性和敏感性都显著增高。

3　讨论迄今为止,临床上鉴别良恶性胸水仍主要依赖于细胞学检查。

徐文亭(1988)采用胸水pH,何浩明等(1994)采用葡萄糖和ADA,盛裕芬等(1994)采用胸水血清胆固醇比值,李琳等(1997)采用脱落细胞学等8项指标检测以提高恶性胸水的诊断阳性率,但仍未获得满意的效果。

因此良恶性胸水的鉴别诊断目前仍然是临床上的难点问题。

临床工作者多主张采取联合检测以提高临床诊断的准确性〔3,4,9〕。

已有文献报道:恶性胸水中CEA、LDH水平高于良性胸水,而ADA水平却低于良性胸水〔6-9〕。

一些学者试图把它们作为鉴别良恶性胸水的标志物。

但由于大量吸烟的患者血清及胸水中的CEA含量可以显著增高,非恶性的血性胸水中LDH活力可以大大增高,而非结核的良性胸水中的ADA水平和恶性胸水中的ADA水平差异不明显,特别是在先发现胸水后出现临床症状的患者,要通过鉴别胸水的性质来进一步寻找病因就更加困难。

因而单凭CEA、LDH或ADA一项指标来鉴别胸水的良恶性是不能满足临床需要的。

本文采用CEA、LDH和ADA三项生化指标联合检测,结果表明可以提高良恶性胸水鉴别诊断的特异性和敏感性,最大限度地排除误诊和漏诊。

本文结果还表明:恶性胸水中CEA值明显高于血清值,若以CEA≥15Λ L为切割值,其诊断符合率为6813%,曾有文献报道高达83%〔3〕。

而血清CEA诊断符合率仅为4115%,这可能是因为胸膜恶性细胞分泌大量的CEA,容易在胸水中聚积沉着,而CEA分子量较大,不易进入血液循环所致。

所以测定胸水CEA比测定血清CEA值更有临床意义。

尿素氮的测定方法是

尿素氮的测定方法是
尿素氮的测定方法有很多种，下面列举几种常用的方法：
1. 尿素酶法：采用尿素酶将尿素水解为氨和二氧化碳，然后使用比色法、比滴定法或电化学法测定产生的氨含量，进而计算尿素氮含量。

2. 衍生化反应法：将尿素与试剂（如乙酰乙酸酐、四氟乙酸或硝酸）反应生成化合物，然后通过比色法或高效液相色谱法测定化合物的含量，从而间接测定尿素氮含量。

3. 比滴定法：将尿素与酸或碱反应，产生酸碱滴定反应，通过酸碱滴定的计算，测定尿素氮含量。

4. 气相色谱法：将尿素以蒸气的形式通过气相色谱柱，利用柱上填充物（如聚硅氧烷）对尿素进行分离和测定。

以上仅列举了一些常用的方法，实际上还有其他一些方法如电化学法、荧光法等都可以用于测定尿素氮含量。

具体选择哪种方法取决于需要测定的样品性质、设备的可用性以及实验室的实际需求。

血清尿素氮测定(

ห้องสมุดไป่ตู้
加入物(ul)
血清尿素标准液
蒸馏水尿素测定液
显色剂| 显色剂‖
空白管
－－
10 1000 1000 1000
标准管
－
10
－
1000 1000 1000
测定管
10
－－
1000 1000 1000
按顺序操作各管混匀，37℃水浴箱中15分钟，以空白管调零，在550nm波长下读取各管吸光度。
【计算】
测定管吸光度标准管吸光度
×
7.14mmol/L标准液浓度
=尿素mmol/L
血清尿素氮测定（脲酶-波氏比色法）
【实验目的】 1．掌握脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮的
基本原理。 2．熟悉脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮的
操作过程。 3．了解脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮的
影响因素。
【实验原理】
尿素经脲酶催化水解生成氨和二氧化碳。氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸钠反应，生成蓝色的吲哚酚，此过程需要用亚硝酸铁氰化钠催化反应。在630nm波长下进行比色，蓝色吲哚酚的吸光度与尿素含量成正比。
【实验用品】
（一）器材试管，恒温水浴箱，分光光度计。
（二）试剂试剂 1：脲酶试剂 :6000u/L,稳定剂适量试剂 2：磷酸盐溶液：PH8.0，0.1mol/L磷酸盐. 试剂 3：显色剂|：亚硝基铁氰化钠、苯酚10ml/L 试剂 4：显色剂‖：次氯酸钠40ml/L
【实验操作】
脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮操作步骤

脲酶的测定方法

一、脲酶测定（比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。

1、试剂配制：（1）pH6。

7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水,再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62。

5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL(A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前,取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0。

9％,(1。

9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。

（4）10％尿素溶液:10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0。

4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL)。

2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理，加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ；往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ6.7)，仔细混匀。

在37℃恒温箱中培养24ｈ。

然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上）,摇荡，将悬液过滤。

取滤液1mL置于50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至10mL，然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液,加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。

脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差，根据标准曲线求出氨态氮量。

标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中,加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀,20min后显色，定容。

1h内再分光光度计上于578nm处比色。

尿素测定方法的概述

尿素测定方法的概述【摘要】尿素是人体内蛋白质代谢的最终产物，由肝脏合成主要通过肾脏排出。

血清尿素的测定是临床上用于诊断和观察各种肾脏疾病的一项重要指标。

尿素浓度处于各个不同的医学决定水平有着不同的临床意义。

并且尿素的检测对慢性肾脏疾病的病程、病情观察及预后判断均有意义，但它并不是肾功能损伤的特异性指标[1]。

以往测定尿素采用尿素氮报告结果，但无论在生理或病理情况吓，能够确切反映肾功能、体液渗透压等有效成分实为尿素而非为尿素氮。

固现推荐统一采用尿素报告结果。

换算公式为：1mmol/L尿素氮=1/2mmol/L[2]。

【关键词】尿素;脲酶;比色法1 标本血清和肝素抗凝血浆在二乙酰一肟法，脲酶/GLDH，离子导电法中均可应用。

氟化物能抑制脲酶反应，故不能用氟化物作为血清的抗凝剂，肝素铵抗凝剂也不能在脲酶法中使用。

尿标本按照1：20到1：50稀释后，可用以上三种方法测定。

由于尿素易于被细菌降解，故血清和尿样品在分析前应放置在4—8℃。

2 测定方法血清尿素的测定是临床上用来诊断和观察各种肾脏疾病的重要生化指标，尿素的测定方法包括：氨电极法、脲酶-波氏法，脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法，脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法等等[3]2.1 化学法2.1.1 二乙酰一肟显色法：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热条件下，生成粉红色的二嗪化合物，在540nm比色，因二乙酰不稳定，常用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。

反应式如下：此法专一性差，线性范围狭窄，且试剂中含有烈性化学物，易腐蚀仪器和污染环境。

2.1.2 邻苯二甲醛比色法：尿素在强酸性环境下，与邻苯二甲醛缩合产生橙红色产物，比色测定之。

2.1.3 二苯吡喃醇比浊法：尿素与二苯吡喃醇结合形成不溶性沉淀，比色测定之。

[5]采用化学法检测尿素，特异性均不高，如瓜氨酸对二乙酰反应有正干扰；甘氨酸、精氨酸、瓜氨酸及磺胺类药物对邻苯二甲醛反应有正干扰。

加之要用强酸或强碱环境，或需要较高温度（90℃）反应，较难实现自动化，故这类方法已经较少使用[5] 。

实验十三血清尿素的测定（二乙酰一肟法）

实验十七血清尿素的测定（二乙酰一肟法）【目的】1. 掌握血清尿素的测定原理和方法。

2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。

【原理】尿素（urea ）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon 反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。

与同样处理的标准液在540nm 处比色，求得尿素含量。

由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。

其反应式如下：CH 3C CCH 3O O +H 2OH +CH 3CCCH 3O N OH +NH 2OH二乙酰一肟二乙酰羟胺CH 3CCCH 3O O 二乙酰+C ON H 2NH 2尿素H +CH 3C C CH 3N N C O+H 2O2二嗪衍生物【器材】试管、试管架、微量加样器及吸量管、沸水浴、分光光度计。

【试剂】 1．酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml ，然后缓慢加入浓硫酸44ml 、85%磷酸66ml ，冷至室温，加入氨基硫脲50mg 及硫酸镉(CdSO4·8H 2O)2g ，溶解后移入1L 容量瓶中，加去离子水至1L 。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

2．二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g 溶于去离子水中并定容至1L 。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

3．尿素标准贮存液(100mmol/L)精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素(MW 为 60.06)0.6g ，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml ，加0.1g 叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。

4．尿素标准应用液(5mmol/L)取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。

【操作】取试管3支，按下表操作：表3-19 血清尿素测定加入物 (ml) 空白管标准管测定管血清－－0.02尿素标准应用液－0.02 －去离子水0.02 －－二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5酸性试剂 5.0 5.0 5.0混匀，置沸水浴加热 12分钟，取出置冷水中冷却 5分钟，以空白管调零，在 540nm 波长处读取各管吸光度。

尿素尿酸测定实验报告

一、实验目的1. 学习和掌握尿素和尿酸测定的原理和方法。

2. 了解尿液成分分析在临床诊断中的重要性。

3. 培养实验操作技能和数据处理能力。

二、实验原理1. 尿素测定：尿素酶-吲哚酚法。

该法利用尿素酶将尿素分解为氨和二氧化碳，氨与吲哚酚试剂反应生成吲哚酚氨，在特定波长下测定其吸光度，从而计算尿素的含量。

2. 尿酸测定：磷钨酸比色法。

该法利用磷钨酸与尿酸形成稳定的蓝色络合物，通过测定其吸光度，从而计算尿酸的浓度。

三、实验材料1. 试剂：尿素酶、吲哚酚试剂、磷钨酸试剂、尿素标准液、尿酸标准液、尿液样本等。

2. 仪器：分光光度计、移液管、比色皿、振荡器等。

四、实验步骤1. 尿素测定：a. 将尿液样本充分混合，取适量加入比色皿中。

b. 加入适量的尿素酶试剂，混匀后放入振荡器中振荡5分钟。

c. 加入适量的吲哚酚试剂，混匀后静置5分钟。

d. 使用分光光度计在特定波长下测定吸光度。

e. 根据标准曲线计算尿素的含量。

2. 尿酸测定：a. 将尿液样本充分混合，取适量加入比色皿中。

b. 加入适量的磷钨酸试剂，混匀后静置5分钟。

c. 使用分光光度计在特定波长下测定吸光度。

d. 根据标准曲线计算尿酸的浓度。

五、实验结果1. 尿素测定结果：本实验中，尿液样本的尿素含量为XX mmol/L。

2. 尿酸测定结果：本实验中，尿液样本的尿酸浓度为XX μmol/L。

六、实验讨论1. 尿素和尿酸是人体代谢废物，通过尿液排出体外。

测定尿液中的尿素和尿酸含量，有助于了解肾脏功能，诊断肾脏疾病。

2. 尿素酶-吲哚酚法和磷钨酸比色法是常用的尿素和尿酸测定方法，操作简便，准确度高。

3. 本实验中，尿液样本的尿素和尿酸含量均在正常范围内，表明受试者的肾脏功能正常。

七、实验总结1. 通过本次实验，我们学习了尿素和尿酸测定的原理和方法，掌握了实验操作技能。

2. 我们认识到尿液成分分析在临床诊断中的重要性，为今后从事相关领域的工作打下了基础。

3. 在实验过程中，我们发现了以下问题：a. 尿素酶和吲哚酚试剂的浓度对测定结果有较大影响，需要严格控制。

血清尿素氮的测定

血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。

2.复习尿素的生成机理及其意义。

【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。

其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。

【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。

分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。

计算及结果分析Array尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。

本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。

3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。

4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。

5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。

由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。

如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。

【思考题】血清尿素氮测定的方法及临床意义。

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血清尿素浓度实验报告

1. 熟悉血清尿素浓度测定的原理和方法。

2. 掌握生物化学实验的基本操作技能。

3. 了解血清尿素浓度与肾功能、蛋白质代谢的关系。

二、实验原理尿素是人体蛋白质代谢的终末产物，主要由肝脏合成，通过血液运输至肾脏排泄。

血清尿素浓度可以反映肾脏的滤过功能。

本实验采用二乙酰法测定血清尿素浓度，其原理是：在强酸条件下，二乙酰与尿素缩合成红色的二甲基氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料1. 血清标本：收集患者空腹静脉血，分离血清。

2. 试剂：二乙酰试剂、硫酸、生理盐水、标准尿素溶液等。

3. 仪器：分光光度计、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 准备工作：将试剂、仪器等实验用品准备齐全，并校准分光光度计。

2. 标准曲线制作：取一系列标准尿素溶液，分别加入二乙酰试剂，室温反应一定时间后，用分光光度计测定吸光度。

以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定：取血清标本，加入二乙酰试剂，室温反应一定时间后，用分光光度计测定吸光度。

4. 计算血清尿素浓度：根据标准曲线，查得样品的吸光度对应的尿素浓度，即为血清尿素浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线：制作的标准曲线线性良好，相关系数R²大于0.99。

2. 样品测定：按照实验步骤对血清标本进行测定，得到吸光度值。

3. 血清尿素浓度计算：根据标准曲线，查得样品的吸光度对应的尿素浓度。

1. 实验过程中，要注意避免试剂污染，保证实验结果的准确性。

2. 标准曲线的制作要保证足够的浓度梯度，以便在测定过程中有足够的准确度。

3. 血清尿素浓度受多种因素影响，如肾功能、蛋白质摄入量、代谢分解情况等。

本实验测定的血清尿素浓度仅供参考，具体病情需结合临床综合判断。

七、实验结论通过本次实验，我们成功掌握了血清尿素浓度测定的原理和方法，了解了血清尿素浓度与肾功能、蛋白质代谢的关系。

在实验过程中，我们要严格遵守实验操作规程，确保实验结果的准确性。

八、实验建议1. 在实验过程中，加强实验室安全管理，防止意外事故发生。