沙门氏菌快速检测方法
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门⽒菌基本知识及检测⽅法
沙门⽒菌基本知识及检测⽅法
沙门⽒菌属(Salmonella)是肠杆菌科的⼀个⼤属,有2000多个⾎清型,我国发现的约有100个。沙门⽒菌⼴泛存在于猪、⽜、⽺、家禽、鸟类、⿏类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth⾸先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的贡献较⼤,遂定名为沙门⽒菌属Salmonella 。本属细菌绝⼤多数成员对⼈和动物有致病性,能引起⼈和动物的败⾎症与胃肠炎,甚⾄流产,并能引起⼈类⾷物中毒,是⼈类细菌性⾷物中毒的最主要病原菌之⼀。
根据沙门⽒菌的致病范围,可将其分为三⼤类群。第⼀类群:专门对⼈致病。如伤寒沙门⽒菌、副伤寒沙门⽒菌(甲型、⼄型、丙型)。第⼆类群:能引起⼈类⾷物中毒——⾷物中毒沙门⽒菌群,如⿏伤寒沙门⽒菌、猪霍乱沙门⽒菌、肠炎沙门⽒菌、纽波特沙门⽒菌等。第三类群:专门对动物致病,很少感染⼈,如马流产沙门⽒菌、鸡⽩痢沙门⽒菌。致病性最强的是猪霍乱沙门⽒菌(Salmonella cholerae),其次是⿏伤寒沙门⽒菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门⽒菌(Salmonella enteritidis)。
⼀、沙门⽒菌属的⽣物学特征:
1.形态染⾊特性:G-⽆芽孢杆菌。⼤⼩通常为0.7~1.5µm ×
2.0~5.0µm,菌端钝圆,散在,偶有短丝状,⽆荚膜,除鸡⽩痢沙门⽒菌和鸡伤寒沙门⽒菌外均有周⾝鞭⽑,能运动,绝⼤多数菌株有菌⽑。需氧或兼性厌氧菌,⽣长温度范围为10~42℃,最适⽣长温度为37℃,适宜pH为6.8~7.8,对营养要求不⾼,在普通培养基中⽣长旺盛,胆盐可促进其⽣长。
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤:
1.样品采集:从待检测的食品中采集适量样品,确保样品的代表性。
2.样品处理:将采集的样品进行适当处理,如破碎、研磨等,以便后续的
检测操作。
3.增菌培养:将处理后的样品接种到选择性培养基中,进行增菌培养。选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长,促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养:将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上,进行分离培
养。鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌,并对其进行鉴别。
5.生化鉴定:对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定,以确定其是否为
沙门氏菌。常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定:对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定,以确定其
具体血清型。常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验:对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验,以确定其对不同药物
的敏感性,为临床治疗提供参考。
需要注意的是,食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。因此,在实际操作中,应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
沙门氏菌国标检测方法
沙门氏菌国标检测方法
一、样本采集
在采集样本时,应确保采集的样本具有代表性,且无菌操作。通常采集食品、动物粪便、环境样本等。对于食品,应采集不同种类,如肉类、禽类、奶制品等。对于动物粪便,应采集新鲜样本,避免受到污染。环境样本应采集可能存在沙门氏菌的表面或水样。
二、增菌培养
增菌培养是沙门氏菌检测的重要步骤,目的是增加细菌的数量,使其更容易分离和检测。常用的增菌培养基有肉汤培养基和缓冲葡萄糖胨水培养基等。将采集的样本接种到培养基中,在37℃下培养18-24小时。
三、分离培养
将增菌培养后的培养物划线接种于选择性培养基(如SS 琼脂、麦康凯琼脂等)上,在37℃下培养18-24小时。选择性培养基可以抑制其他细菌的生长,有利于沙门氏菌的分离。
四、初步鉴定
对分离培养得到的单个菌落进行初步鉴定,包括菌落形态、染色特性、镜下形态等观察。同时进行革兰氏染色和氧化酶试验,以初步判断是否为沙门氏菌。
五、生化试验
生化试验是确定分离菌株是否为沙门氏菌的关键步骤。常用的生化试验包括赖氨酸脱羧酶试验、尿素试验、靛基质试验等。根据试验结果,对分离菌株进行初步分类。
六、血清学分型
为了确定分离菌株的具体血清型,需要进行血清学分型。通过与已知抗血清进行反应,确定细菌的特异性抗原,从而确定其血清型。血清学分型对于追踪沙门氏菌的来源和传播途径具有重要意义。
七、报告结果
根据以上各步骤的检查结果,综合分析并得出最终结果。对于疑似沙门氏菌的样本,应进行复核和确认。最终结
果应以书面形式报告给相关单位或个人,报告应包括样本来源、检测方法、检测结果等内容。同时,应对检测结果进行解释和说明,提供相应的建议和措施。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病,可能会导致严重的胃肠道感染。为了保障食品安全,确保公众的健康,我们需要进行沙门氏菌的国标检验。下面是一份生动、全面且有指导意义的文章,详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步:样品准备
在进行沙门氏菌检验之前,我们首先需要准备样品。常见的样品包括食品、水、动物排泄物等,可能携带沙门氏菌。样品应该收集自具有代表性的地点,并采取无菌采样容器进行收集。收集样品时要注意避免污染,并确保样品的数量足够进行检验。
第二步:样品处理
样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来,并进行后续的检测。可以采用不同的方法进行样品处理,常见的方法包括富集培养和选择性培养。富集培养是将样品放入富集培养基中,利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长,从而使沙门氏菌生长出来。
第三步:菌落鉴定
在样品处理后,我们需要对培养基上的菌落进行鉴定,确认是否为沙门氏菌。常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特
征来判断细菌的种类。生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的
代谢情况来确定细菌的种类。分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列
来识别沙门氏菌的基因,通常使用PCR技术进行检测。
第四步:抗菌药敏试验
沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。通过抗菌药敏试验,我们可以选择合适的药物来治疗感染。可以使用
沙门氏菌的鉴定流程
沙门氏菌的鉴定流程
沙门氏菌的鉴定流程一般如下:
1. 根据临床病例的表现和样品来源等信息,初步判断可能为沙门氏菌感染。
2. 采集患者样品,包括血液、尿液、粪便、呕吐物等,或者食品、水等环境样品。
3. 进行细菌分离和培养,采用通常的细菌培养基,如MacConkey培养基、血液琼脂培养基等,在37℃下培养24小时以上。
4. 进行生化鉴定,根据沙门氏菌的生化特性进行鉴定,常用的包括氧化氢酶试验、半胱氨酸脱脲酶试验、甲基红反应等。
5. 检测血清学指标,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)或血凝试验(Widal试验)等,检测患者血清中抗体水平的变化和滴度。
6. DNA分型鉴定,通过PCR技术扩增沙门氏菌的特定片段进行分型鉴定。
综合上述方法,结合临床表现和病史等信息,可以初步确认是否为沙门氏菌感染,进一步确定病情和治疗方案。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等,能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查:感染沙门氏菌时,多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况,大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象,该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查:感染沙门氏菌以后,部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况,通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查:检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况,有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外,沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等,如果自身的病情比较严重,建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗,以免延误病情。
沙门氏菌的检验方法与注意事项
沙门氏菌的检验方法与注意事项
在日常微生物检验中,沙门氏菌比较常见,是一种致病性细菌,国家规定在
每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌,所以在检验沙门氏菌时,对试剂与培
养基有很高的要求,下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍!
一、沙门氏菌检测的原因和意义
根据相关统计显示,我们国家因细菌性食物中毒的人中,有70%-80%左右的
人是通过沙门氏菌造成的。人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物,就
会造成细菌性感染,以此在毒素的影响下产生食物中毒,造成伤寒、胃肠炎及副
伤寒。而且沙门氏菌的传播途径较多,肉、蛋和其他食物,从加工至销售的整个
过程当中都极易引发感染情况,所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。
二、沙门氏菌的检验
(一)前增菌(无选择性)
BPW(缓冲蛋白胨水)属于一种比较常见的增菌培养基,不包括任何抑制物质,有助于修复受损的沙门氏菌。促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生
理状态。
(二)选择性增菌
TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液)内含有硫代硫酸钠,结合四硫磺酸钠,能够
对肠道共生菌进行有效抑制,而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌,可以在这一培养
基当中生长繁殖;煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖,而伤寒
沙门氏菌依旧可以生长。SC(亚硒酸盐胱氨酸增菌液)能够对其他和伤寒沙门氏
菌进行选择性增菌,其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸,促使亚硒酸与
硫的复合物生产,对细菌硫的代谢产生干扰,进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠
埃希氏菌的繁殖生长。
(三)分离培养基(选择性)
①BS(亚硫酸铋琼脂)内含亚硫酸铋指示剂,可对大肠菌群、革兰氏阳性菌
沙门氏菌检测方法及实验关键点
沙门氏菌检测方法及实验关键点
食物作为维持人类健康生活的基础,与人民群众的生命健康有直接联系。据统计,我国的食物中毒案例70%以上都是由沙门氏菌引起的。沙门氏菌不仅会引起细菌感染,还会引发肠胃炎等慢性疾病,给患者的生活质量带来较大的负面影响。本文主要介绍沙门氏菌的检测方法与实验关键点。
什么是沙门氏菌
沙门氏菌并不是指一种细菌,而是一群寄居在人和动物肠道内的相似细菌的统称(是一个菌属),隶属于肠杆菌科,显微镜下的形态呈短棒状。目前已经发现的沙门氏菌有一千多种,它们不仅能使动物发病,还能使人类发生伤寒、胃肠炎,甚至败血症。人们在日常饮食中如果不慎摄入沙门氏菌,其会在人的肠道内大量繁殖,随后通过淋巴进入血液,引发中毒症状。初期的临床症状一般为发热、呕吐、恶心、腹泻及腹痛等。
沙门氏菌主要存活在动物或者人类的肠道内,引发沙门氏菌感染的不仅有动物性食品感染(动物肉、内脏、鸡蛋、生奶),而且有人类卫生感染(便后不洗手等卫生行为)和植物传染感染。研究显示携带沙门氏菌的人类也是主要的传染源之一。
沙门氏菌的检测方法
(一)分离培养法
沙门氏菌的检测不仅是食品安全的基础保证,也是人们身体健康和生命安全的基础保障。分离培养法是沙门氏菌检测的基础,要遵循以下流程。
1.前增菌。使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌。在含选择性抑制剂的促生长培养基中,样品进一步增菌。此培养基允许沙门氏菌持续增殖,同时阻止大多数其他细菌
的增殖。
3.选择性平板分离。这一步采用固体选择性培养基,抑制非沙门氏菌的生长,提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
沙门氏菌菌检测方法
沙门氏菌菌检测方法
沙门氏菌(Salmonella)是一类常见的食源性致病菌,可以引起人类各种疾病,如食物中毒、胃肠炎等。因此,对食品中的沙门氏菌进行检测是非常重要的。下面我将详细介绍几种常用的沙门氏菌检测方法。
1. 培养法
培养法是最常用的沙门氏菌检测方法之一。该方法需要将样品(如食品、水)在适当的培养基上进行培养,并观察是否有沙门氏菌的生长。具体步骤如下:(1)将样品接种于含有选择性成分的培养基上;
(2)将接种的培养基培养在适当的温度下,通常为37摄氏度;
(3)观察培养基上是否有典型的沙门氏菌的形成,一般表现为黑色斑点;(4)进行进一步的确认试验,如生化试验和血清学试验。
2. PCR法
PCR法是一种快速、准确且高度灵敏的沙门氏菌检测方法。PCR法通过扩增样品中沙门氏菌的特定基因片段来检测其存在。具体步骤如下:
(1)提取样品中的DNA;
(2)使用特定引物扩增沙门氏菌的基因片段;
(3)通过电泳将扩增产物分离,并观察是否有目标片段的出现。
3. ELISA法
ELISA法是一种常用的快速筛查大量样品的沙门氏菌检测方法。该方法利用特异
性抗体与沙门氏菌抗原结合,并通过酶催化反应来检测沙门氏菌的存在。具体步骤如下:
(1)将样品涂覆在固相酶标板上;
(2)添加特异性抗体与沙门氏菌抗原结合;
(3)洗涤去除非特异性结合的成分;
(4)添加辣根过氧化物酶标记的二抗,并形成酶标复合物;
(5)通过酶催化反应产生显色物质,观察是否有颜色的出现。
4. 质谱法
质谱法是一种高分辨率、高灵敏度的沙门氏菌检测方法。该方法通过检测样品中沙门氏菌的特定代谢产物来判断其存在与否。具体步骤如下:
沙门氏菌的检测PPT课件
1.四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液
• 基础液 900 mL • 硫代硫酸钠溶液 100 mL • 碘溶液 20.0 mL • 煌绿水溶液 2.0 mL • 牛胆盐溶液 50.0 mL • 临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每
加入一种成分,均应摇匀后再加入另 • 一种成分。
2021
2021
TTB培养基使用方法和注意事项
•
• 1.使用方法:称取本品93.55g,溶解于1050ml蒸馏水中, 加热溶解,临用前加入20%碘液20ml,0.5g煌绿2ml。
• 2.注意事项:TTB培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。 加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙 沉淀为正常现象。
增菌液内,36±1℃培养18~24h。
➢ SC更适合伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌增菌,最适增 菌温度为36℃ ±1℃ ,时间为18—24h。
➢ TTB更适合其他沙门氏菌增菌,最适增菌温度为42℃ ±1℃ , 时间为18—24h。
2021
(3)分离---选择性平板分离
• 分别用接种环取增菌液一环,划线接种于选择性培养基上 ,分离培养 – 一个亚硫酸铋(BS)琼脂平板, 36±1℃培养40~48h – 一个木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂平板(或HE琼 脂平板或沙门氏菌属显色培养基), 36±1℃培养18~ 24h 。
沙门氏菌检测方法
沙门氏菌快速检测方法
1 试剂与仪器
1.1所用器具
三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针
1.2 仪器:分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅
1.3 所用试剂和培养基
1.3.1缓冲蛋白胨水(BPW)培养基
称取BPW培养基20.1g,加入蒸馏水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,以90mL/瓶分装到各锥形瓶,并于121℃灭菌15 min,冷至常温。
1.3.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液
取TTB增菌液基础93.6g,加入蒸馏水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于锥形瓶中,每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中,121℃灭菌20min;冷至30℃,每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支(开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面),混合均匀。
2、操作步骤
2.1 配制BPW培养基(第一天)
2.2培养基冷却至室温后,对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟, 关灯60 min后使用。(第一天)
2.3 预增菌(第一天)
称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶,并及时盖上盖子,150rpm下振荡10min,于36℃±1℃培养18h左右。
2.4配制TTB增菌液(第一天)
2.5增菌(第二天)
2.5.1接种和培养
轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于9mL TTB增菌液内,于42℃±1℃培养18h~24h。
2.5.2
2.6配制沙门氏菌显色培养基平板(第二天)
2.6.1 取瓶内干粉4.75g,用100mL蒸馏水溶解,可按比例扩大或者缩小。
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌是一类常见的食源性病原微生物,引起的沙门氏菌感染会导致沙门氏菌病,
主要症状包括腹泻、发热、恶心呕吐等。为了确保食品安全,对食品中沙门氏菌的检验及
分析显得尤为重要。
沙门氏菌的检验方法主要有传统培养法和分子生物学方法。传统培养法是将食品样品
转移到含有适当营养物质的培养基上进行培养,通过观察形状、颜色及生长情况来鉴别沙
门氏菌的存在。分子生物学方法则是借助PCR技术,通过特定引物扩增沙门氏菌的DNA片段,进而进行检测与鉴定。
沙门氏菌的分析主要包括对菌株的鉴定与分型。鉴定主要通过形态学、生理特性及生
化试验等方法,确定该菌株是否为沙门氏菌。分型则是通过分子生物学方法,如多重引物
随机扩增多态性DNA分析(MLVA)、多重引物PCR分型(MLST)等,对沙门氏菌进行分型,进一步了解其遗传多样性及流行病学相关信息。
沙门氏菌的检验标准主要参考国家标准或行业标准,如《食品安全国家标准沙门氏菌检验》(GB 4789.4-2016)、《食品微生物学沙门氏菌检验方法 GB/T 4789.5-2013》等。这些标准明确了样品的采集方法、培养条件及检测指标等,确保了检验结果的准确性。
在食品安全监测中,沙门氏菌的检验通常应用于肉制品、蛋制品、禽肉及水产品等食
品中。在取样时,应注意避免污染或交叉感染,同时需确保样品代表性。样品取回后,应
尽快送达实验室进行检测,避免菌落生长过于旺盛,影响检验结果。
沙门氏菌的检验结果的解读需要参考相关标准。通常来说,如果样品中沙门氏菌的检
出数目超过规定标准,则判定为阳性,表示该样品存在沙门氏菌污染,不符合食品安全要求。反之,如果检测结果未能检出沙门氏菌,则判定为阴性,表示该样品符合食品安全要求。
沙门氏菌几种检测方法简介与比较
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应得 树枝
组合 编码
沙 门 菌
6
7
0
4
7
5
2
API 20E
沙门菌检测显色培养基
沙门氏菌在海博公司显色培 养基上的菌落特征(红)
沙门氏菌在CHROMagar 显色培养基上的菌落特(紫)
每个平板选5个菌落
无典型菌落再培养18~24h
营养琼脂纯化可疑菌落 35℃ or 37℃ 18~24h TSI,尿素酶,赖氨酸脱羧酶,ONPG,VP,吲哚 血清学试验 (O抗原,Vi抗原,H抗原) 报告结果 送参考实验室分型
加拿大HPB方法
MFHPB-20
食品中沙门菌的分离和鉴定
25g样品 营养肉汤or缓冲胨水or煌绿 水溶液 or胰蛋白酶大豆肉汤
35±1℃ 20-24h 0.5 ± 0.05mL 0.1 ± 0.02mL +10mL mRV +10mL TT 42± 0.5℃ 22~24h BGS & 42± 0.5℃ 22~24h DMLIA or XLT4
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验 商业生化试剂盒或自动鉴定系统 or 传统生化鉴定(AOAC Official Method 967.27 or "Edwards and Ewing's Identification of Enterobacteriaceae") 报告结果
沙门氏菌的检验原理
沙门氏菌的检验原理
沙门氏菌是一种常见的致病菌,可引起食物中毒和肠道感染等疾病。为了准确快速地检测沙门氏菌的存在与否,科学家们开发了各种检验方法。本文将介绍沙门氏菌的检验原理及相关方法。
一、沙门氏菌的检验原理
沙门氏菌的检验原理主要是通过寻找沙门氏菌特有的生物学特征来进行检测。沙门氏菌属于革兰氏阴性菌,具有杆状形态,并具有一根或两根鞭毛,能以鞭毛运动。沙门氏菌还能产生气泡,使培养基表面形成膜状薄层。此外,沙门氏菌还具有一定的抗酸性,在酸性环境中能存活,并具有较强的耐热性。
二、沙门氏菌的检验方法
1. 培养法:将样品(如食物、水等)接种在含有沙门氏菌生长所需营养物质的培养基上,经过一定的时间后,观察培养基上是否出现沙门氏菌的生长,如有则判断样品中存在沙门氏菌。
2. 蛋白质检测法:沙门氏菌中存在一种特殊的蛋白质,称为抗原,可与特异性抗体结合形成免疫复合物。通过将待测样品与特异性抗体接触,然后加入试剂,观察是否出现颜色变化或荧光信号,从而判断样品中是否存在沙门氏菌。
3. 分子生物学方法:通过提取样品中的DNA或RNA,利用PCR扩
增技术或实时荧光定量PCR技术,检测样品中是否存在沙门氏菌的特定基因序列,从而判断样品中是否存在沙门氏菌。
4. 快速检测法:近年来,科学家们开发了一种名为免疫层析试纸法的快速检测方法。该方法利用特异性抗体与沙门氏菌的抗原结合,形成可见的颜色条纹,可以在短时间内迅速判断样品中是否存在沙门氏菌。
三、沙门氏菌的检验应用
沙门氏菌的检验在食品安全、公共卫生等领域具有重要的应用价值。通过快速检验沙门氏菌的存在与否,可以及时采取相应的控制措施,防止食品中毒事件的发生。此外,沙门氏菌的检验还可以用于监测水源、环境卫生等方面,保障公众健康。
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点
.检验沙门氏菌的原因和意义:
据统计我国细菌性食物中毒中70%~80%是由沙门
氏菌引起的,人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105~
(106
个/g)的动物性产品,就会引起细菌性感染,
进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多,肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。
因此对沙门氏菌的检验事关重大。
二、检测及鉴定:
沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。
沙门氏菌典型菌落形态:
生化鉴定显示:
API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法,广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。
限值要求:
参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区
的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定,
《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采
样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定,
具体为n=5,c=0,m=0(即在被检的5份样品中,不允许任一样品检出沙门氏菌)。
三、沙门氏菌传统检测方法
的关键控制点
1、样品处理
尽可能缩短解冻时间,使竟争菌群生长最少,并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性(蛋黄蛋清混匀取样)。
2、培养基及培养方面
(1)没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌,必须选择多种选择性培养基同时筛选,只能说显色培养基综合选择性更强。
(2)试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置,是否需要高压灭菌,添加剂用量及培养基保存条件。
沙门氏菌检测操作步骤
沙门氏菌检测操作步骤
沙门氏菌是一种常见的细菌,其存在于许多环境中,包括食物、水源和动物体内。由于沙门氏菌可能引起严重的食物中毒症状,因此对其进行检测和控制非常重要。在本文中,我将介绍沙门氏菌检测的操作步骤,以帮助您了解如何进行有效的沙门氏菌检测。
1. 选择适当的检测方法
在进行沙门氏菌检测之前,首先需要选择适当的检测方法。常见的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。传统培养法需要将样品在富含营养物的培养基上培养并观察有无沙门氏菌生长。分子生物学方法利用PCR技术检测沙门氏菌的DNA,而免疫学方法则使用抗体来检测沙门氏菌的存在。根据您的需求和实验条件,选择合适的检测方法非常重要。
2. 样品采集
在进行沙门氏菌检测之前,需要采集样品。这些样品可以是食物、水源、表面物体或动物组织。确保在采集样品之前,正确消毒采样工具以避免任何污染。确保将样品收集到干净、密封的容器中,以避免污染和交叉感染。
3. 样品准备
收集样品后,需要进行适当的样品准备以便于后续的沙门氏菌检测。
对于食物样品,可以使用均匀悬浮液方法将样品与适当的缓冲液混合
均匀。对于水样或表面物体样品,可以使用封闭的容器直接收集样品。对于动物组织样品,需要先将样品进行处理,如挤压、切割或研磨,
以获得足够的样品量进行检测。
4. 样品分析
根据选择的检测方法,进行相应的样品分析。如果使用传统培养法,
可以将样品转移到含有适当培养基的培养皿中,并进行孵育。培养过
程中,需要注意培养皿的环境条件,如温度、pH值和氧气含量。如果使用分子生物学方法,可以提取样品中的DNA,并使用PCR技术进
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沙门氏菌快速检测方法
1试剂与仪器
1.1所用器具
三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针
1.2仪器:分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅
1.3所用试剂和培养基
1.3.1缓冲蛋白胨水(BPW)培养基
称取BPW培养基20.1g,加入蒸馏水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,以90mL/瓶分装到各锥形瓶,并于121℃灭菌15min,冷至常温。
1.3.2四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液
取TTB增菌液基础93.6g,加入蒸馏水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于锥形瓶中,每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中,121℃灭菌20min;冷至30℃,每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支(开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面),混合均匀。
2、操作步骤
2.1配制BPW培养基(第一天)
2.2培养基冷却至室温后,对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min 后使用。(第一天)
2.3预增菌(第一天)
称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶,并及时盖上盖子,150rpm下振荡10min,于36℃±1℃培养18h左右。
2.4配制TTB增菌液(第一天)
2.5增菌(第二天)
2.5.1接种和培养
轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于9mLTTB增菌液内,于42℃±1℃培养18h~24h。
2.5.2培养现象
菌名菌号生长状况 TTB培养特征
静置后浑浊CMCC(B)50071 伤寒沙门氏菌良好
静置后浑浊良好鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115
静置后清亮不生长大肠埃希氏菌 ATCC25922
2.6配制沙门氏菌显色培养基平板(第二天)
2.6.1取瓶内干粉4.75g,用100mL蒸馏水溶解,可按比例扩大或者缩小。
2.6.2混合加热至100℃,搅拌加热至完全溶解,冷却至50℃倒平板。
小时。24℃培养37样品用画线或者涂布法接种,2.6.3.