高效液相色谱测定生鲜乳及乳制品中三聚氰胺的方法研究
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。
三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。
本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。
1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。
1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。
根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。
取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。
1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。
高效液相色谱测定牛奶中的三聚氰胺
高效液相色谱测定牛奶中的三聚氰胺的成功案例
摘要：建立了浊点萃取法（CPE）对牛奶样品进行净化和浓缩后用高效液相色谱（HPLC）检测的方法。
本实验采用酸（CCl3COOH）结合非离子型表面活性剂Triton X-100对牛奶进行破乳，以非离子表面活性剂聚乙二醇600（PEG 600）作为萃取剂，研究牛奶中三聚氰胺的萃取行为。
实验确定的破乳方法和CPE方法的优化条件：Triton X-100的浓度为 2 %（W/V），CCl3COOH的浓度为2 %（W/V），100 ℃水浴加热10 min；PEG 600的浓度为13 %（W/V），Na2CO3和Na2SO4的浓度分别为0.5 %（W/V）和26 %（W/V），平衡温度70 ℃，平衡时间30 min。
在上述实验条件下，牛奶样品的加标回收率80 %以上，相对标准偏差为2.1 % ，定量限为0.9 μg/kg，小于国家规定的定量限(2.5 μg/kg)。
该方法简便、快速、灵敏度高、污染少。
关键词：三聚氰胺；浊点萃取；表面活性剂；高效液相色谱
1.仪器配置
2.色谱图
1三聚氰胺的标准色谱图
2加标牛奶样品色谱图
3.方法使用范围
南京科捷分析仪器应用研究所研发本方法——高效液相色谱法，主要用于乳制品中三聚氰胺的检测，具有灵敏度高，操做简单等特点。
此方法显示图谱清晰明了，结果准确，可广泛用于对乳制品的质量监控等领域。
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。
2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。
二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。
2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。
反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。
但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。
三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。
若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。
测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。
奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。
加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。
脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。
反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。
对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。
但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。
通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。
近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。
三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。
固相萃取-高效液相色谱法测定牛奶中的三聚氰胺
用 高效 液 相 色谱 法 测 定 ． 结 果 表 明 ， 三 聚 氰 胺 的标 准 曲 线 为 ｙ － ４ ４ ７ ７ １ ． ２ ｘ ＋ ４ ５ ６ ３ ． ８ ，相 关 系数 ｒ － － ０ ． ９ ９ ９ ５ ，检 测 限 为 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ 。 回收率 ） ０ ９ ７ ． ６ ％ 一１ ０ ０ ． ４ ％。该 方法操 作 简单 ，精 密度和 回收率 高，可 满足 奶粉 中三聚氰胺 的准确 定性和 定量
１ ． ５ 样 品的制备
称取新 鲜牛 乳５ ｇ ，加 入２ ０ ｍ１ ０ ． １ ％三氯
乙酸提 取液 ，充 分 混匀 ，加入 ５ ｍ１ ２ ％乙酸铅 溶液 ，均质 ｆ ２ ｍｉ ｎ ） 或超声２ ０ ｍｉ ｎ ，Ｉ Ｏ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ／ ｍｉ ｎ 离心 １ ０ ｍｉ ｎ ，取上清液 ５ ｍｌ 过混合 型 阳离子 交换 小柱 （ Ｐ Ｃ Ｘ ） 。待样 液完全 流 出后 分 别用３ ｍｌ 甲醇 和３ ｍｌ 水活 化 固相萃取 柱 ，取 上述 提取液 ５ ｍｌ 过 固相萃 取柱 ，使提 取液 以不低 于 １ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ 的流速通
（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） ［ 、液相色谱 一质谱法（ ＨＰ Ｌ Ｃ． ＭＳ ） ｔ 、气相 色谱 一
质谱法（ ＧＣ ． ＭＳ ） ｔ 】 、毛 细管 电泳法 （ ｃ Ｅ ） 、胶体 金免 疫层 析法 和酶 联免 疫法 等 。２ ０ ０ ８年 １ ０月 ， 国 家 标 准
液 并将小柱抽干 。用５ ｍ １ ５ ％氨化 甲醇（ ｖ ／ ｖ ，５ ｍ ｌ 氨水＋ ９ ５ ｍ ｌ
蛋白质，每１ ０ ０ ｇ 牛奶中添加Ｏ ． １ ｇ 三聚氰胺 ，就能提 高０ ． ４ ％ 蛋白质 ，因此三聚氰胺 也被 人称为” 蛋 白精” 。 三 聚氰胺 被摄 入人 体 内遇到 胃酸 时会 溶解 ，但 是排 到尿 中会 再次结 合形 成结 晶 ，可能堵 塞 肾小 管 ，随着结 晶在 体 内含量 的增 多，如 果不 能排 除 ，积累 到一 定的程 度 后形成 结石 ，给肾功 能 带来极 大 的损害 甚 至肾衰竭 而 死亡 。蛋 白精给奶制 品业带来 了巨大 的冲击 。卫生部等 ５ 部 门关于三聚氰 胺在食 品中 的限量值 的公 告（ 卫 生部公 告
实验一 原料乳与乳制品中三聚氰胺的HPLC检测
实验一原料乳与乳制品中三聚氰胺的HPLC检测一、实验目的掌握HPLC检测乳及其制品中三聚氰胺含量的原理与方法。
’二、实验原理样品中的三聚氰胺经三氯乙酸一乙腈提取，阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。
三、仪器与试材1．仪器与器材高效液相色谱仪岛津LC-20AT(带有紫外检测器)、离心机、超声波水浴、固相萃取装置、氮气吹干仪、涡旋混合器等。
2．试剂除特别说明外，实验所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。
(1)常规试剂及其他：甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、氨水(25％～28％)、三氯乙酸、柠檬酸、辛烷磺酸钠(色谱纯)、定性滤纸、海砂[化学纯，粒度为0．65～0．85m m，二氧化硅(Si O2含量为99％]、0.2μm 微孔滤膜、氮气(纯度≥99．999％)。
(2)常规溶液：甲醇水溶液(1+1，体积比)、三氯乙酸溶液(1％)、5％氨水一甲醇(1+19，体积比)、离子对试剂缓冲液(取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约980mL水溶解，调节pH至3.0后，定容至1L)。
(3)阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯一二乙烯基苯高聚物，60mg，3mL，或相当者。
使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。
(4)三聚氰胺标准储备液(1mg／mL)：称取100．0mg三聚氰胺标准品(纯度大于99．0％)于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，于4℃避光保存。
3．实验材料4～5种液态奶、奶粉、酸奶、冰激凌或奶糖，各50g。
四、实验步骤1．样品提取(1)称取2．00g样品于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以4000r／min离心10min。
(2)上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，以三氯乙酸溶液定容至25mL。
(3)取5mL滤液，加入5m L水混匀后用作净化液。
高效液相色谱法测定乳制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺的含量1（华南师范大学化学与环境学院，广州510006）2（华南师范大学化学与环境学院分析化学研究所，广州510006）摘要为建立液态奶中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法，通过超声提取，离心，有机滤膜净化，结合高效液相色谱进行样品测定。
色谱柱：依利特C18液相色谱柱（4.6×150mm，5 µm）。
流动相：A液：离子对试剂缓冲液（0.9508g辛烷磺酸钠+1.0640g柠檬酸，配成1L溶液）；B液：甲醇；色谱条件：70%A+30%B。
流速：1.0mL/min。
柱温：40℃。
波长：239 nm。
进样量：2μL。
结果表明：三聚氰胺标准曲线为y=58093x+1060.1，相关系数R2=0.9986，在0.0156~1.0mg/mL范围内线性关系良好。
样品在三氯乙酸和乙腈（体积比=3：1）的提取条件下的加标回收率最高，为101.63%。
关键词高效液相色谱，三聚氰胺，液态奶1 引言1.1 三聚氰胺仪器检测方法概述三聚氰胺(melamine)是一种重要的氮杂环有机化工原料[1]，俗称蜜胺。
因其含氮量大于66%，且我国通常采用“凯氏定氮法”估测食品和饲料中的蛋白含量，三聚氰胺常被不法商人掺杂进食品或饲料中，以提升食品或饲料检测中的蛋白质含量指标，因此三聚氰胺也被称为“蛋白精”。
但三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的。
国家质量监督检验检疫总局与国家标准化管理委员会联合发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》，即国标GB/T 22388-2008[2]。
这一新标准制定了高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）及气相色谱-质谱联用法（GC-MS）三种检测方法与标准。
三聚氰胺的检测方法还包括酶联免疫吸附(ELISA)法等。
1.1.1 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法的定量限为2.0mg/kg，具有操作简单、灵敏度高，测定周期短等优点。
试论用高效液相色谱（HPLC）检测原料乳与乳制品中三聚氰胺的原理和方法
科技文苑December 2017 CHINA FOOD SAFETY 75高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法，被广泛应用于保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等方面。
针对近年来一些不法商家在牛奶中添加三聚氰胺的案例，笔者所在单位加强了乳制品中三聚氰胺的检验工作，在执行标准GB/T 22388和GB/T 22400的基础上，摸索出另一种使用HPLC 检测原料乳和乳制品中三聚氰胺的方法，通过一段时间的实验，效果显著，现将该方法总结归纳如下，供业界参考。
1 基本原理用50%甲醇和乙酸铅溶液作为原料乳和乳制品的蛋白质沉淀剂与三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱—紫外检测皿/二极管阵列检测皿检测，外标法定量。
2 试剂与材料水：GB/T 6682规定的一级水；乙腈（CH 3CN）：色谱纯；磷酸（H 3PO 4）；磷酸二氢钾（KH 2PO 4）；三聚氰胺溶液标准物质：1.00mg/mL；乙酸铅溶液：称取22g 乙酸铅（准确至0.01g），加水800mL 完全溶解后，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用；磷酸盐缓冲液：0.05mol/L（称取6.8g 磷酸二氢钾，加水800mL 完全溶解后，用磷酸调节pH 至3.0，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用）；一次性注射皿：5mL；滤膜：水相，0.45μm；针式过滤皿：有机相，0.45μm；具塞刻度试管：50mL；移液枪：2~20μL、5~50μL、20~200μL、100~1000μL。
3 仪皿高效液相色谱仪：配有紫外检测皿/二极管阵列检验皿；分析天平：感量0.0001g 称0.01g；pH 试纸：pH 0.5~5.0；溶剂过滤皿；离心机；涡旋混合皿；超声波清洗皿。
4 测定步骤4.1 试样的制备称取混合均匀的15g 乳制品样品（准确至0.01g），置于50mL 具塞刻度试管中，加入5mL 乙酸铅溶液，在加入25mL 甲醇/水（1:1），涡旋混匀，加水至50mL，涡旋振荡6min，离心10min，转速为3000r，静置后用一次性注射皿吸取上清液，用针式过滤皿过滤，作为分析试样。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种有机化合物，化学式为C3H6N6，是一种白色结晶性固体，可溶于水和乙醇，主要用作工业生产中的原料，如氰酸酯树脂、氰酸脂和脲醛树脂等。
但由于其高氮含量，三聚氰胺还可以在一定条件下成为一种良好的氮肥料。
三聚氰胺在奶制品中的使用引起了广泛的争议。
2008年，中国发生了因三聚氰胺被加入奶粉中而导致大量儿童发生尿路结石的事件，震惊了全国。
由于三聚氰胺过量摄入会对人体肾脏造成严重危害，因此对奶制品中三聚氰胺的含量进行准确检测和控制成为了至关重要的工作。
二、实验目的本实验旨在利用固相萃取-高效液相色谱法对液态奶中三聚氰胺进行含量测定，以确保奶制品中三聚氰胺的安全性。
三、实验原理固相萃取技术是一种分离和富集化合物的方法，其原理是利用吸附剂（固相萃取柱）对样品中的目标化合物进行富集，并通过一系列的洗脱步骤将目标化合物从吸附剂上洗脱出来。
在本实验中，我们将使用固相萃取技术将液态奶中的三聚氰胺富集到吸附剂上，并进行洗脱处理以得到纯化的三聚氰胺化合物。
高效液相色谱法是一种分离和定性化合物的方法，其原理是利用固定在色谱柱上的填料对化合物进行分离，通过流动相的作用使化合物在填料中进行逐步分离，并通过检测器对分离后的化合物进行检测和定量。
在本实验中，我们将使用高效液相色谱法对洗脱后的三聚氰胺进行检测和定量分析。
四、实验步骤1. 样品准备：将液态奶样品装入适当的容器中，以备后续的固相萃取处理。
2. 固相萃取：将样品经过预处理后注入固相萃取柱中，利用固相萃取柱对三聚氰胺进行富集。
3. 洗脱处理：使用洗脱液将固相萃取柱中富集的三聚氰胺进行洗脱处理，得到纯化的三聚氰胺化合物。
4. 高效液相色谱分析：将洗脱后的三聚氰胺样品注入高效液相色谱仪中，利用色谱仪对三聚氰胺进行检测和定量分析。
5. 数据处理：根据高效液相色谱仪得到的检测结果，计算出液态奶中三聚氰胺的含量。
五、实验结果根据实验数据分析，我们得到了液态奶中三聚氰胺的含量为x mg/L。
高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量-分析设计实验方案
高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量实验部分高效液相色谱法（HPLC）1、试剂与材料（除非另有说明，所有试剂均为分析纯。
）1.1 甲醇：色谱纯，200ml1.2 乙腈：色谱纯,10ml1.3 乙酸铅:0.5g1.4 柠檬酸:1.0640g1.5 辛烷磺酸钠：色谱纯,0.9508g1.6 三氯乙酸：2.5g1.7 三聚氰胺：0.2500g试剂配制⏹三氯乙酸溶液（1％）：准确称取2.5g三氯乙酸用水溶解后转移至250mL容量瓶中，定容至刻度，混匀后备用。
⏹离子对试剂缓冲液：准确称取0.9508 g 辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640g柠檬酸（pH=3-4）用蒸馏水配制1L溶液，备用。
⏹三聚氰胺标准储备液：准确称取0.2500g（精确到0.1 mg）三聚氰胺标准品于100mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（20%）溶解并定容至刻度，配制成浓度为2.5 mg/mL的标准储备液，低温避光保存。
2、仪器和设备2.1 高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
2.2 分析天平：感量为0.0001 g。
2.3 离心机：转速不低于4000 r/min。
2.4 超声波水浴。
2.5 具塞塑料离心管：50mL。
3、样品处理分别称取3份5 g（精确至0.0001g）奶粉于50mL具塞塑料离心管中，各加入5mL配制好的2.5g/L的三聚氰胺溶液，编号1、2、3，往1号试管中加入20mL 三氯乙酸溶液，往2号试管中加入15mL三氯乙酸和5mL乙腈溶液，往3号试管中加入20ml乙酸铅的三氯乙酸溶液，超声提取10 min，后以4000 r/min离心10 min。
各取三支试管中上清液10mL于3个25mL容量瓶中用水定容，待测。
4、高效液相色谱测定4.1 HPLC条件a) 色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm）b) 流动相：A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。
高效液相色谱测定生鲜乳及乳制品中三聚氰胺的方法研究
Ｏ．１０
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ｏ ０．０６ 《
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时间（ｍｉⅡ）
图８未过柱的样品溶液的色谱图 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ；ｆｌｅｓｈ ｍｉｌｋ；ｄａ时ｐｒｏｄｕｃｔ；ｍｅｌａｍｉｎｅ
中图分类号：ＴＳ２０７．３
文献标识码：Ａ
文章编号：１００２—６６３０（２００８）１０—０５３１．０５
Ｏ．０８
Ｏ．０６
ｏ 《０．０４
Ｏ．０２
０．ｏｏ
２００
２５０
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３５０
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波长（衄）
图２ 三聚氰胺的光谱图
Ｆｉｇ．２ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ
０．０８ ０．０６
暑ｏ．０４
０．０２ ０．ｏｏ
Ｆｉｇ．３
时『日Ｊ（ｒｎｍ） 图３ 标准溶液的色谱Ｉｌｑ（２０３ｎｍｌ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（２０３ ｎｍ）
小柱５００ｍｇ／３ｍｌ。 １．２ 色谱条件
色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ．Ｃ Ｊ８色谱柱（２５０ｍｍ Ｘ ４．６ｍｍ， ５ ｕｍ ｉ．ｄ．）；柱温为４０℃；流速为０．８ｍｌ／ｍｉｎ＝流动相为 硫酸铵（Ｏ．０２ｒｅｅｌ／Ｌ）：甲醇＝９４：６（Ｖ，ｖ）；检测波长为２０３ｎｍ＝ 进样量１０Ｉ．ｔｌ。 １．３ 标准溶液的制备
２４．１ 干扰因素的评价 分别对上样溶液过柱后的溶液、水洗溶液、甲醇
高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺的分析
2009.6D a i r y I n d u s t r y □ 乳品加工奶酪中的钙、磷的营养亲密度分别为1.3~7.0以及2.6~5.7（表5）。
从表5中可以发现，同一种类的奶酪，其脂肪含量越高，钙、磷的含量越低；而使用凝乳酶生产的奶酪中，钙含量通常要高于用酸法生产的干酪。
干酪中的钙、磷以及其它矿物质元素可被人体利用，这一点和乳中的这些矿物质元素没有区别。
奶酪的生生素也都进入了凝乳，相反，大部分水溶性维生素都在凝乳过程中随着乳清析出而排出（表6）。
2 结论奶酪营养成分丰富，主要为蛋白质和脂肪，其脂肪和蛋白质含量较原料奶中的蛋白质和脂肪提高了10倍。
此外，所含的钙、磷等无机成分，除参考文献[1]Walstra P . Dairy Technology.New York ：Marcel Dekker Inc,1999[2]张和平，张列兵. 现代乳品工业手册（第一版）. 北京：中国轻工业出版社，2005[3]郭本恒.奶酪. 北京：化学工业出版社，2003[4]董幕莹，任发政.世界干酪文化鉴赏. 北京：化学工业出版社，2004[5]郭本恒.现代乳品加工学. 北京：中国轻工业出版社，2001[6]赵新淮，于国萍，张永忠，李铁晶. 乳品化学. 北京：科学出版社，2007■ 孙宇霞 呼伦贝尔市产品质量计量检测所【摘要】本文采用国家标准法中高效液相色谱法检测了乳及乳制中的三聚氰胺，经过反复使用和多次试验，从样品处理、净化、仪器测定3个方面，对国家标准中要求不详之处，进行了补充和改进。
对用液相色谱法检测三聚氰胺所用色谱柱和流动相进行了优选，将乳及乳制品中与三聚氰胺出峰时间重叠的组分进行了完全分离。
关键词：高效液相色谱法；三聚氰胺；检测分析高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺的分析在“三鹿牌婴幼儿奶粉事件”发生后，国家标准化管理委员会紧急启动了标准制定程序，开展了原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法研究[1]，在第一时间制定并颁布了国家标准GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》[2]，从标准实施之日起，质量检验机构和乳品企业开始采用此标准进行乳及乳制品中三聚氰胺的检测。
高效液相色谱法测定奶制品中的三聚氰胺
5μm)；流动相为乙腈 - 缓冲液(7.5:92.5)；流速 1.0ml/ min；柱温 2 0 ℃；进样量 20μl；流动相和试样液使用 前过 0.45μm 滤膜。
1.3.3 试样液提取、净化 称取 5g(称准至 0.1mg)样品于 50ml 具塞比色管中，
2.4 样品中三聚氰胺的提取与净化 三聚氰胺呈弱碱性，可溶于甲醇和乙腈，三氯乙
酸能使其转化成盐。用三氯乙酸 - 乙腈为提取剂，通过 超声和离心，制得的提取液较浑浊，因为样品基质复 杂。本研究用三聚氰胺含量较高的三鹿奶粉为提取样 品，以加 2ml 醋酸铅溶液作沉淀剂和不加醋酸铅溶液作 对比实验，发现加醋酸铅沉淀剂，所得提取液清亮， 但测定结果偏低 22.92%，说明加沉淀剂尽管能使提取液
9.96
0.034
三
0.032
聚
0.030
氰
0.028
胺
0.026
0.024
0.022
0.020
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 时间(min)
图 ４ 三聚氰胺标样色谱图(1μg/ml) Fig.4 HPLC chromatogram of melamine standard (1 μg/ml)
ion exchange column, followed by HPLC determination. Melamine was separated by a DBS-C8 column (4.6 × 150 mm, 5μm,
Thermo) using acetonitrile–cushion solution (1-pentan esulfonic acid sodium salt – citric acid monohydrate) as mobile phase
高效液相色谱法测定乳粉中三聚氰胺的方法优化
高效液相色谱法测定乳粉中三聚氰胺的方法优化作者：卢竹阳沈蕾陈丹莹柏宁来源：《中国食品》2021年第04期三聚氰胺含氮量高，俗称“伪蛋白”，几乎无味，微溶于水，可溶于甲醇、乙酸、甲醛等，经常被用作化工原料，对健康有害，我国明确规定三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加。
“三鹿奶粉”事件影响恶劣，也给食品检验机构敲响警钟，三聚氰胺参数在乳品检测中成了必检指标，研究其检测方法尤为重要。
GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》明确规定，测定三聚氰胺有三种方法，即液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法。
前两种方法涉及的仪器高端精密，费用昂贵，后续维护保养较为繁琐，不具备普遍性，本文对高效液相色谱法检测乳粉中三聚氰胺的前处理和色谱条件进行了优化。
一、材料和方法1.仪器。
Agilent-1200高效液相色谱仪（VWD），多功能氮吹仪，高速冷冻离心机，数控超声波清洗器，电子天平（Ⅰ级），固相萃取联用仪，SPE小柱：Poly-Sery MCX，60mg/3mL。
2.试剂。
三聚氰胺标样（1.0mg/mL），甲醇、乙腈、正己烷均为色谱纯，柠檬酸、辛烷磺酸钠、氨水、三氯乙酸均为分析纯。
3.样品前处理。
（1）提取。
准确称取1g乳粉置于50ml具塞离心管中，加入8ml三氯乙酸溶液（1%）和2ml乙腈，超聲提取约10min，涡旋提取约10min，9500r/min离心8min，取上清液于50ml离心管中；残渣重复提取一次，合并两次提取液，加入10ml三氯乙酸溶液和饱和的正己烷溶液，涡旋振荡1min，9500r/min离心6min，取下层清液，待净化。
（2）净化。
依次用3ml甲醇和5ml水对SPE小柱进行活化和平衡，抽至近干；将待净化的清液转至SPE 小柱中，用3ml水和3ml甲醇进行淋洗，抽至近干；用6mL氨化甲醇溶液（5%）洗脱，洗脱液于50℃氮气吹干，残留物用1ml流动相定容，涡旋混合1min，过0.22μm微孔水相滤膜后，供测定。
乳与乳制品三聚氰胺检测方法的探讨——高效液相色谱法
（ ：１ 、 离 子 对 试 剂 缓 冲 液 １ ）
（ 确 称 取 ２ １ 准 ０ｇ柠 檬 酸 和
素 均 可 导 致 食 品 中 可 能 含 有 微 量 三 聚 氰 胺 。 三 聚 氰 胺 不 ２１ ６ｇ辛 烷 磺 酸 钠 ， 加 入 约 ９ ０ｍ Ｌ水 溶 解 ，调 ｐ ３０， ８ Ｈ ． 是 食 品 原 料 ，也 不 是 食 品 添 加 剂 ，严 禁 人 为 添 加 到 食 品 定 容 至 １Ｌ备 用 ） 三 聚 氰 胺 标 ； 、 隹品 （ 度 大 于 ９ ％ ） 纯 ９ 、
０ ｍ ｎ离 ／ ０ｍｉ。 括 原 料 乳 ） 奶 粉 、 其 他 配 方 乳 粉 中 三 聚 氰 胺 的 限 量 值 为 ８０ ０ ｒ ｉ 心 １ ｎ 上 清 液 经 三 氯 乙 酸 溶 液 湿 润 的 、 ５ｍＬ ２５ｍｇ ｋ 。 目 前 ， 我 国 对 三 聚 氰 胺 检 测 规 定 了 ３种 方 滤 纸 过 滤 后 用 三 氯 乙酸 溶 液 定 容 至 ２ ，再 移 取 ５ｍ Ｌ ． ／ｇ 法 ，分别 是 高 效 液相 色谱 法 （ Ｌ 、 气 相 色 谱 一质 谱 滤 液 ，加 入 ５ｍＬ水 混 匀 后 做 待 净 化 液 。 ＨＰ Ｃ） 一 质 谱 ／质 谱 法 净 化 ：将 待 净 化 液 转 移 至 已活 化 的 固相 萃 取 小 柱 中 。 ຫໍສະໝຸດ ３ ．样 品 前 处 理
方 法 一
原 理 ：试 样 用 三 氯 乙 酸 溶 液 一 乙 腈 提 取 ， 经 阳 离 子
响 也 不 同 。 婴 幼 儿 比 较 容 易 引 起 泌 尿 系 统 结 石 ， 而 成 人 交 换 固 相 萃 取 柱 净 化 后 ， 用 高 效 液 相 色 谱 进 行 测 定 ， 外
２ ．主 要 仪 器 设 备
运用高效液相色谱法检测生鲜乳中的三聚氰胺
畜禽养殖Livestock Breeding三聚氰胺是一种有机化合物，是化工企业在生产加工工作当中常用的基本原料。
这种化学物质对人体有害，不能在食品加工时使用。
基于此，在食品安全检测工作当中，检测机构的重点任务就是检测食品当中是否存在三聚氰胺。
由于现阶段可以使用的检测方法有很多，而不同的方法有不同的应用优势及操作流程。
为了分析高效液相色谱法在新时期的检测优势，明确检测技术的发展方向，现将实际的检测工作流程及注意事项报告如下。
1材料与方法1.1材料在实际应用高效液相色谱法开展生鲜乳的检测工作时，必须要做好充足的前期准备工作。
要从实验专用的机械设备方面进行分析，需要准备色谱仪、超纯水处理器、超声清洗器，以及干燥清洁的量杯。
检测人员需要对设备做好试运行操作，及时检查设备的使用寿命和各项功能，必要时引进新设备开展实验操作。
同时，还需要准备三聚氰胺的标准试样，试样要做好密封保存工作，并要保证从正规渠道引进。
准备试样的目的是为了方便与生鲜乳的成分检测结果进行对比，从而科学分析出生鲜乳中是否含有三聚氰胺化合物。
检测机构应当从员工的专业工作能力方面展开培训工作，并进行安全意识教育。
规范实验操作流程，以保证检验结果的真实性和合理性。
1.2方法在进行检测工作时，工作人员首先需要了解三聚氰胺的分子结构式，充分掌握该化合物的主要构成成分和分子的活跃特性，科学拟定合理的检测工作方案。
在生鲜乳的三聚氰胺检测工作过程中，检测人员应当选取适量的三聚氰胺标准样品，对样品进行称重，结合样品克数，加总数量20%的甲醇水，进行溶解并稀释。
然后，对溶液进行过滤操作，利用专业的试纸来进行显色分析。
检测人员需要将生鲜乳进行稀释和成分分解工作。
可以在生鲜乳试样当中，加入1%三氯乙酸超声波提取30min，静置一段时间。
在这个操作环节当中，同样需要进行过滤操作。
最后，检测人员应当依次用3mL甲醇、3mL水活化SCX固相萃取柱，准确移取5mL滤液分次上柱。
高效液相色谱法检测生鲜乳中三聚氰胺
１ ． １ 仪 器与设 备
Ｌ Ｃ 一 ２ ０ Ａ高效液相色谱仪 （ 日本岛津 ） ； 紫外检 测器 ； Ｃ Ｐ １ ５ ３ Ｃ电子 天 平 ： 奥豪 斯 仪 器 （ 上海 ） 有 限公 司； Ｘ Ｗ一 ８ ０ Ａ微型旋涡混合仪 ：上海沪西分析仪器 厂 有 限公 司 ； Ｇ Ｐ 一 １ ２ ５ Ｂ Ｅ干 燥 培 养箱 ：天 津 市 泰斯 特仪器有限公司 ； Ｔ Ｃ １ ６ Ｋ — Ｉ Ｉ 高速离心机 ： 长沙东旺 实验仪器有 限公 司 ； 摩尔原子超纯水 ： 上海摩勒科
１ ． ４色谱 条件
色谱柱 ： Ｃ １ ８ 色谱柱（ ２ ５ ０ ｍ ｍ× ４ ． ６ ｍ ｍ ， ５ Ｉ ｘ ｍ） ； 流 速： １ ． ０ ｍ Ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ； 流动相 ｊ 离子对试剂缓冲液： 乙腈 ＝ ８ ５ ：
作 者简介： 林品 言（ １ ９ ８ ５ ￣ ） ， 女， 硕士， 工程师 ， 研 究方向为畜禽水产品检 测。
采 用 高效 液 相 色谱 法 测 定 。采 用 Ｃ１ ８色谱 柱 ， 以 离子 对试 剂缓 冲液 一 乙腈 （ ８ ５ ： １ ５ ） 为流动相 ， 流速为 １ ． ０ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ ， 检 测
波长为 ２ ４ ０ ｉ ｒ ｍ， 柱 温为 ４ ０ ｑ Ｃ。结果表 明 ， 三聚氰胺在 １ ． ０ ￣ １ ０ ０ ｇ ／ ｍＬ的浓度范围呈 良好 的线性 关系。三聚氰胺的标准
１材 料 与方 法
学仪 器 有 限公 司 ； Ｄ Ｌ － ０ １ 抽滤装置 ； １ ２道 Ｓ Ｐ Ｅ固相 萃取装置； 量筒 ； 容量瓶 ； 具塞离心管 。
１ ． ２药品 与试 剂
三聚氰胺溶液标准 物质 （ １ ． ０ ０ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ） ： 北京海 岸鸿 蒙标准物质技术 有限责任公 司；乙腈 （ 色谱 纯） ： 上海安谱 ； 甲醇 （ 色谱纯 ） ： 天津市科密欧化 学 试剂有 限公 司； 柠檬酸 （ 分析纯 ） ： 湖南汇虹试剂有 限公 司 ； 辛烷磺 酸钠 （ 色谱纯 ） ： 天津市科密欧化学 试剂有 限公司 ； 氨水（ 分析纯 ） ： 重 庆川东化工（ 集 团） 有 限公 司 ； 三氯 乙酸 （ 分析纯 ） ： 国药集 团化学 试 剂有 限公 司 ；
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
三聚氰胺是一种有机化合物，其化学式为C3H6N6。
它在工业中被广泛应用于染料、塑料、纺织品等行业。
三聚氰胺对人体健康有害，因此世界各国都制定了相应的限量标准和
检测方法。
本文将介绍一种利用固相萃取和高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的
方法。
我们需要准备实验所需的试剂和仪器。
试剂包括乙腈、乙酸、醋酸乙酯、四氢呋喃等；仪器包括高效液相色谱仪、气相色谱仪、离子色谱仪等。
我们需要进行样品的前处理。
将液态奶样品与醋酸乙酯混合，并用乙酸进行调节。
然后，用固相萃取柱进行固相萃取。
将样品通过柱子，用乙腈进行洗脱。
将洗脱液进行浓缩，在氮气下吹至干燥。
用四氢呋喃进行重溶解，并进行滤过。
接下来，我们需要使用高效液相色谱法进行检测。
调节高效液相色谱仪的参数，如流速、温度等。
然后，将样品注入色谱仪，并进行色谱分离。
根据三聚氰胺的特性，调节色
谱柱的填料和流动相，使得三聚氰胺的峰形成在适当的位置。
根据标准曲线确定样品中三
聚氰胺的含量。
我们需要对实验结果进行分析。
将测得的样品中三聚氰胺的含量与限量标准进行比较，如果超过限量标准，则样品不合格；如果在限量标准范围内，则样品合格。
固相萃取和高效液相色谱法是目前应用较广泛的液态奶中三聚氰胺含量测定方法。
该
方法具有准确、快速、灵敏等特点，可以满足对液态奶中三聚氰胺含量进行快速检测的需求。
希望本文对读者能有所帮助。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量引言三聚氰胺是一种有机氮化合物，被广泛用作氮肥和杀虫剂。
三聚氰胺在食品中的超标使用会对人体健康造成危害，尤其是对婴幼儿和孕妇。
准确测定液态奶中三聚氰胺的含量对保障食品安全至关重要。
本研究旨在建立一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺含量。
实验方法1. 样品准备将不同来源的液态奶样品分别取样，并冷冻保存以确保样品的新鲜度和完整性。
2. 萃取过程将50ml的液态奶样品加入250ml的锥形瓶中，然后加入20ml的去离子水。
将样品与水充分混合，并进行超声处理5分钟。
接着将样品倒入100ml的固相萃取管中，并采用正向固相萃取法进行样品预处理。
3. 洗脱过程使用10ml甲醇-去离子水（3:1，v/v）进行3次洗脱，用5ml甲醇进行1次洗脱。
将洗脱液合并，并置于50℃水浴中浓缩至干燥。
随后加入2ml的去离子水重新溶解，转移到2ml小瓶中备用。
4. 分析参数采用高效液相色谱法将三聚氰胺化合物在C18色谱柱上分离，采用二极管阵列检测器进行检测，流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腈。
柱温为30℃，流速为0.8ml/min，进样体积为10μl。
5. 样品检测将萃取液用0.22μm滤膜过滤后，进行高效液相色谱分析。
利用标准曲线法定量测定三聚氰胺的含量。
结果分析通过以上实验方法，我们成功建立了一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺的含量。
我们分别采用标准品对该方法进行了验证，在不同浓度下三次测定的相对标准偏差(RSD)均小于3%，符合测定法的要求。
该方法的检出限为0.05μg/kg，定量限为0.2μg/kg，对实际样品的分析结果也表现出较好的准确性和灵敏度。
结论我们成功建立了一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺的含量。
该方法具有操作简便、准确性高、灵敏度好的特点，可以应用于实际液态奶的质量控制和食品安全监测中。
未来，我们还将探索该方法在其他食品中三聚氰胺含量测定方面的应用，并不断优化方法，提高其分析精度和适用范围。
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Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ
ｆｒｅｓｈ ｍｉＩｋ ａｎｄ ｄａｉｒｙ ｐｒｏｄｕｃｅ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｆｅｒｒｉｎｇ ｔｏ ＦＤＡ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ＮＹ厂ｒ ｌ ３７２—２００ｒ７ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｌａｍｉｎｅ．ｔｈｅ
※分析检测
良晶科学
２００８，Ｖ０１．２９，Ｎｏ．１０ ５３１
高效液相色谱测定生鲜乳及乳制品Ｉｐ 三聚氰胺的方法研究
汪辉，彭新凯，李文丽，曹小彦木，黄辉，胡朝晖 （长沙市食品质量安全监督检测中心，湖南长沙４１００１３）
摘 要：建立用高效液相色谱．二极管阵列法测定生鲜乳及乳制品中的三聚氰胺的检测方法。本实验参照ＦＤＡ三 聚氰胺检测方法、ＮＹ，Ｔ １３７２—２００７，探讨检测三聚氰胺的色谱条件和优化生鲜乳及乳制品中的三聚氰胺前处理 方法。最后确立了有效的检测方法，采用硫酸铵（０．０２ｍｏｌ／Ｌ）：甲醇＝９４：６（Ｖ／Ｖ）作为流动相，２０３ｎｍ为检测波长。样 品溶液在０．１～１５０１ａｇ，ｒｎｌ之间均具有良好的线性关系，最低检测限为０．５ｍｇ／ｋｇ，回收率均在９１％以上，回归方程式 为ｙ＝２．３７×１０５ｘ＋１．２１×１０·及相关系数ｒ＝０．９９９８。此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适 于测定生鲜乳及乳制品中的三聚氰胺。 关键词：高效液相色谱；二极管阵列检测器；生鲜乳；乳制品：三聚氰胺
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｆｒｅｓｈ Ｍｉｌｋ ａｎｄ Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＷＡＮＧ Ｈｕｉ，ＰＥＮＧ Ｘｉｎ－ｋａｉ，ＬＩ Ｗｅｎ－ｌｉ，ＣＡＯ Ｘｉａｏ－ｙａｎ＋，ＨＵＡＮＧ Ｈｕｉ，ＨＵ Ｚｈａｏ—ｈｕｉ （Ｃｈａｎｇｓｈａ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ｏｎ Ｆｏｏｄ Ｑｕａｌ时Ｓａｆｅｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１００１３，Ｃｈｉｎａ）
ｓｕｌｆａｔｅ—ｍｅｔｈａｎｏｌ（９４：６，ｗｖ）ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ２０３ ｎｌｎ．Ｔｈｅ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆｆｒｏｍ ０．１
ｔｏ １５０ ｕ ｇ，ｒｎｌ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｉｓ ０．５ ｍｇ／ｋｇ，ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ａＩ｝ｅ ａｂｏｖｅ ９１％，ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ
５３２ ２００８，Ｖ０１．２９，Ｎｏ．１０
良晶不斗学
※分析柃测
物发生肾衰竭并导致死ＬＩ扪。 目前国内外测定食品中三聚氰胺含量的方法很少，
一般采用液相色谱法１３·５１、液相．质谱法肛６１、气相．质谱 法１７．８１、酶联免疫吸附测定法等。本实验结合ＦＤＡ三聚 氰胺检测方法、ＮＹ／Ｔ １３７２—２００７等方法，对色谱条件 及样品处理进行了考察和研究，避开毒性大的乙腈，采 用甲醇和０．０２ｍｏｌ／Ｌ硫酸铵作为流动相，结果令人满意。
最近频频曝光的“三鹿奶粉”被检出含比较高的 三聚氰胺。这是继美国发生了许多猫狗宠物非正常死亡 事件（美国ＦＤＡ经过调查确认是宠物食品的原料受非法添 加的三聚氰胺污染，原料来自中国）以来，我国国内发 生重大的刚婴幼儿食用含三聚氰胺较高的奶粉而产生不 良后果的事件。
三聚氰胺（ｍｅｌａｍｉｎｅ）即蜜胺，又称氰尿酰胺，是一 种白色晶体，熔点３５４℃，难溶于水、乙二醇、甘油 和吡啶，略溶于乙醇，不溶于乙醚、苯和四氯化碳Ｉ¨。
收稿日期：２００８。０９．２５
作者简介：汪辉（１９８３．），男，助理工程师，主要从事食品检验研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｈｕｅｉｌ５８＠１６３．ｃｏｒｎ ·通讯作者：曹小彦（１９７３．），女，高级工程师，硕士，主要从事食品安全分析与评价研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｈｕｅｉｌ５８＠１６３．ｃｏｒｎ
万方数据
１．４．１
提取
准确称取５．０９样品于１００ｍｌ的三角瓶中，加入ｌ％
三氯乙酸超声波提取３０ｍｉｎ，取提取液用滤纸过滤，滤
液待用。
１．４．２
净化
依次用３ｍｌ甲醇、３ｍｌ水活化ＳＣＸ固相萃取柱，准
确移取５ｍｌ滤液分次卜柱，控制过柱速度在ｌｍｌ／ｍｉｎ以
内，再分别用５ｍｌ水、５ｍｌ甲醇淋洗ＳＣＸ固相萃取柱，
Ｏ．１０
０．０８
ｏ ０．０６ 《
０．０４
Ｏ．０２
０．００
Ｆｉｇ．８
２
４
６
８
时间（ｍｉⅡ）
图８未过柱的样品溶液的色谱图 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ
抽干后用１０ｍｌ ５％氨水．甲醇分次洗脱，洗脱液在５０℃
下氮气吹至近干，准确加入５ｍｌ流动柏，在快速混匀器
上混匀１ｍｉｎ，经０．４５ ＩＬｔｍ的滤膜过滤，上机分析。
２ 结果与分析
２．１ 检测波长的选择与定性 取浓度为５ １．Ｊ－ｇ／ｍｌ的三聚氰胺标准使用液及某待榆样
品，在１９０一－４００ｎｍ波长处扫描，发现三聚氰胺在２０３．５ｎｍ 和２３４．１ｎｍ处有吸收峰（图２），实验表明，经过柱后的 样品溶液，在低波长下，几乎无其他物质干扰，且三 聚氰胺在低波长处，吸收较好，从而降低了方法的检 出限，提高了检测灵敏度。故选用２０３ｎｍ为三聚氰胺 的检测波长（图３）。同时，样品测定中可采用二极管阵 列检测器对其进行光谱扫描，并以保留时间和三维光谱 图相似性系数进行定性（图４）。
０．００８ Ｏ．００６毫０．０４Ｏ．００２ Ｏ．０００
Ｆｉｇ．６
２
４
６
８
ｌＯ
时间（ｒａｉｎ）
图６ 甲醇淋洗液的色谱图
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｅｌｕｅｎｔ
１００
９９
９８ 冰 斟 ９７
翟 ９６ 媸
９５
９４
２
４
６
８ １０
１２ １４
１６
洗脱液体积（ＩＩｌｌ）
Ｆｉｇ．７
图７ 洗脱液体积对洗脱率的影响 ＥｆｆｅｃＩｓ ｏｆ ｅｌｕｅｎｔ ｖｏｌｕｍｅ ｏｎ ｅｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ｉｓ ｙ＝２．３７×１０Ｓｘ＋１．２１×１０４ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ０．９９９８．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｅｘａｃｔ ｗｉｔｈ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｓａｍｐｌｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｅａｓｉｂｌｅ．Ｉｔ ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ ｆｒｅｓｈ ｍｉｌｋ ａｎｄ ｄａｉｒｙ ｐｒｏｄｕｅｔ．
２．４．２ 洗脱液浓度的选择 洗脱液５％氨水．甲醇体积对ＳＣＸ柱中吸附的三聚
氰胺的洗脱率有明显的影响。本实验对氨水．甲醇浓度 进行了研究，发现氨水．甲醇浓度小于５％时，洗脱效
１．００
’毫０．５０
０．００
２
４
６
８
１０
时间（ｍｉｎ） 图５ 水淋洗液的色谱图 Ｆｉｇ．５ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｅｌｕｅｎｔ
因为三聚氰胺有三个胺基，易与金属离子络合， 采用２ｍｌ １０６９／Ｌ亚铁氰化钾和２ｍｌ ２１９９／Ｌ醋酸锌沉淀蛋 白质时，三聚氰胺会有损失，回收率仅为５５％。三聚 氰胺是酰胺类物质，是可溶于三氯乙酸溶液的小分子。 三氯乙酸本来就有沉淀蛋白质的功能，因此在实验过程 中用三氯乙酸提取样品时无需再加沉淀剂。样品提取完 成后，用滤纸过滤，便可得到清液。 ２．４ 净化过程的优化
小柱５００ｍｇ／３ｍｌ。 １．２ 色谱条件
色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ．Ｃ Ｊ８色谱柱（２５０ｍｍ Ｘ ４．６ｍｍ， ５ ｕｍ ｉ．ｄ．）；柱温为４０℃；流速为０．８ｍｌ／ｍｉｎ＝流动相为 硫酸铵（Ｏ．０２ｒｅｅｌ／Ｌ）：甲醇＝９４：６（Ｖ，ｖ）；检测波长为２０３ｎｍ＝ 进样量１０Ｉ．ｔｌ。 １．３ 标准溶液的制备
Ｎ
Ｎ
厶么
Ｈ２Ｎ
Ｎ
ＮＨ２
图１ 三聚氰胺的结构式 Ｆｉｇ．１ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ
１ 材料与方法
１．１ 试剂与仪器
三聚氰胺（９９％） Ｓｉｇｍａ公司；甲醇为色谱纯；硫 酸铵、氨水、三氯乙酸均为分析纯。
Ｗａｔｅｒｓ ｌ ５２５高液相色谱仪配２９９６二极管阵列检测
器，７１７Ｐｌｕｓ自动进样器，Ｅｐｏｗｅｒ工作站；超纯水处 理器：超声清洗器；氮吹仪；ｓＫ．１快速混匀器；ＳＣＸ
验。结果发现用乙腈为流动相时，乙腈洗脱能力较 强，三聚氰胺保留时间较小，乙腈正好在三聚氰胺出 峰处有背景吸收，很难分离，且乙腈毒性大。采用 硫酸钱（０．０２ｍｏｌ／Ｌ）：甲醇＝９４：６（Ｖ／Ｖ），甲醇也有背景吸 收，但三聚氰胺与甲醇的背景吸收完全分开，分离度 大于１．５，且峰型对称，出峰时间比较理想。 ２．３ 沉淀剂的选择
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｗｅｒｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ