夏枯草提取物体外诱导EL-4细胞凋亡的实验研究

四 甲基 偶 氮 唑 蓝 （ Ｔ ） Ｍ Ｔ ．德 国 Ｓｇ ａ公 司 ；灭 菌 胎 牛 血 清 ｉ ｍ
２１ ．２ 绘 制 生 长 曲 线 ｌ 取 对 数 生 长 期 Ｅ 一 ． ５ ｌ Ｌ ４细 胞用 含 １ ％ ０ 胎 牛 血 清 的 Ｒ Ｍ 一 ６ ０培 养 液 配 成 １ ｘ Ｏ 个 ／ Ｌ的 单 细 胞 Ｐ Ｉ １４ ． ｌｓ ｍ Ｏ 悬液接种 于 ９ ６孔 板 中 ． 孔 １ ０ Ｌ 实 验 组 加 夏 枯 草 提 取 物 每 ８Ｉ ｘ
效 ｌ 现 已有 其 抗 肿 瘤 方 面 的 临 床 报 道 ， 应 用 夏 枯 草 治 疗 胃 ｌ １ 如
癌 、 肠 癌 、 癌 等 恶 性 肿 瘤 都 有 很 好 的效 果 。 治 疗 淋 巴 大 肺 在
性 对 照 组 加 长 春 新 碱 ２ Ｉ ，使 药 物 最 终 浓 度 分 别 为 ８ 、０ ０Ｌ ｘ ０４ 、
外抗肿瘤活性 ． 并绘 出其 生 长 曲线 ： 置 显微 镜 和 Ｈ 染 色观 察 细 胞 用 药前 后 形 态 学 变化 ； 脂 糖 凝 倒 Ｅ 琼
胶 电 泳 法及 Ｔ Ｎ Ｌ法检 测 夏枯 草提 取 物 对 Ｅ － Ｕ Ｅ Ｌ ４细 胞 的 诱 导 凋 亡 作 用 。 结果 ： 枯 草 提 取 物 对 Ｅ 一 夏 Ｌ４ 细 胞 有 显 著 的增 殖 抑 制 作 用 ， ５ Ｉ ０值 为 ２ ．７Ｌ ｍＬ Ｃ ３ Ｌ ６ ｄ ；琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 结 果 显 示 实 验 组 出现 明 显 的 Ｄ Ａ梯 形 凋 亡 带 而 空 白对 照 组 没 有 出现 ：Ｕ Ｅ Ｎ Ｔ Ｎ Ｌ结 果 显 示 夏 枯 草 组 Ｅ － Ｌ ４细 胞 经 染 色后 胞 核 中 出现
近年 来 ． 中 医 中药 已逐 渐 成 为 恶 性 肿 瘤 综 合 治 疗 中 的一 部 分 ． 不 仅 可 以抑 制 肿 瘤 增 殖 ， 防 肿 瘤 复 发 转 移 ， 且 对 它 预 而
放疗 、 疗 有 减 毒 、 敏 、 效 的作 用 。 枯 草 为 唇 形 科 夏 枯 草 化 增 增 夏 属植 物夏 枯 草 的干 燥 成 熟 果 穗 ． 有 清 火 明 目、 坚 散 结 的功 具 软
２ 、０ Ｌ／ ； 白 对 照 组 加 ２ Ｉ ０ １ Ｌ ｍＬ 空 ｇ ０ Ｌ生 理 盐 水 。 组 设 ４个 平 行 ｘ 每
瘤 的许 多传 统 方 剂 上 ． 枯草 也 处 于很 重要 的 地 位 ， 而 现 在 夏 然
关 于 夏枯 草对 恶 性 淋 巴瘤 的抗 肿 瘤 研 究 非 常 少 ， 因 而很 有 必
细 胞 生 长 抑 制 率＝ 对 照 组 Ｏ 均 值 一 （ Ｄ 实验 组 Ｏ 均值 ）对 Ｄ ／
照 组 ０Ｄ 均 值 ｘ Ｏ ％ ｌ０
１１ 试 药 夏 枯 草 于 ３月 份采 自河 南 省 确 山县 ． 其 干 燥 成 ． 将 熟的果穗经 醇煎及一系列萃取 、 馏 、 燥 等过程提取 而成 ： 蒸 干
２１１ Ｍ Ｔ 法 ｑ 取 对 数 生 长 期 Ｅ 一 ．． Ｔ ＿ Ｌ ４细 胞 ， 含 １％胎 牛 用 ０ 血 清 的 Ｒ ＭＩ １４ Ｐ 一 ６ ０培 养 液 配 成 １ ｘ ０ 个／ ． ｌ ｍＬ的单 细 胞 悬 液 ０
接种于 ９ ６孔 板 中 ， 孔 １ ０ Ｌ 实 验 组 加 夏 枯 草 提 取 物 水 溶 每 ８Ｉ 。 ｘ 液 ２ Ｌ ．使 药 物 最 终 浓 度 分 别 为 ８ 、 ０ ２ 、 ５ １ Ｉ ／ Ｌ 阳 ０Ｌ Ｌ ０ ４ 、 ０ １ 、 ０ ｇｍ ； ｘ
孔 ．另 设 本 底对 照孔 （ 体 积 含 相 应 浓 度 药 物 的无 细 胞 培 养 等 液 ） 置 于 ３ ℃含 ５ Ｏ 培 养 箱 中培 养 ４ ｈ 每 孔 加 入 ＭＴ ． ７ ％Ｃ ， ８。 Ｔ液 ２Ｉ ． 养 ４ ０ Ｌ培 ｘ ｈ后 离 心 （０ ０／ ｉ）０ ｉ， 去 上 清 液 ， 孔 加 １ ０ｒ ｎ １ ｒｎ 弃 ａ ｒ ａ 每
Ｄ Ｏ ２０ Ｌ ＭＳ ０ Ｉ ．振 荡 ｌ ｍ ｎ 置 于 ５ ０ ｍ 波 长酶 联 免 疫检 测 ｘ Ｏ ｉ后 ７ｎ
要对 其在 恶性 淋 巴瘤 的抗 肿 瘤 活 性 上 加 以研 究 。本 实 验 观 察
夏 枯 草 对 小 鼠 Ｔ细 胞 性 淋 巴 瘤 白血 病 细 胞 株— — Ｅ 一 Ｌ ４细 胞 体 外 抗增 殖 活性 的影 响 ．并 运 用 细 胞 生 物 学 方 法 对 其 提 取 物
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夏枯草提取物体外诱导 Ｅ 一 Ｌ ４细胞 凋亡 的实验研 究
张 明智 郑 晓珂 刘宏 民 张雁 冰
（ 州大 学第一 附属 医院 ， 南郑 州 ４ ０ ５ ） 郑 河 ５ ０ ２
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
摘 要 目的 ： 测 夏枯 草提 取 物 对 Ｅ 一 检 Ｌ ４细 胞 （ 鼠 Ｔ细 胞 性 淋 巴瘤 白血 病 细 胞 株 ） 外 抗 肿 小 体 瘤 活 性 并探 讨 其 诱 导 Ｅ 一 Ｌ ４细胞 凋 亡 的 特 点 方法 ： 用 Ｍ１ ＇ 应 １ 法检 测 夏 枯 草 提 取 物 对 Ｅ ＿ Ｌ ４细 胞 的 体
棕 黄 色颗 粒 或 核 周 出现 棕 黄 色半 月形 深 染 区 ． 空 白对 照 组 则 仅 有 个 剐 细胞 出现 胞 核 棕 黄 色深 染 。 而 结 论 ！ 枯 草提 取 物 对 Ｅ ＿ 夏 Ｌ ４细 胞 有 显著 的 体 外抗 肿 瘤 活性 ， 导 凋 亡 可 能是 其 抗肿 瘤 的主 要 机 制之 一 。 诱 关 键 词 夏枯 草提 取 物 中 图分 类 号 Ｐ ８ ．１ ． ２７ ２ Ｅ一 Ｌ ４细 胞 细 胞 凋 亡 文 献 标 识码 Ａ 体 外 实验 文 章 编号 １ ７ － ９ Ｘ（ ０ ８ ０ — ０ ０ ０ ６ ２ ３ ７ ２ ０ ）４ ０ ８ — ４
仪测定 Ｏ Ｄ值 ， 以 下 公 式 计 算 生 长 抑 制 率 ， Ｉ 值 。 上 按 求 Ｃ 以
实 验 重 复 ５次
诱导 Ｅ － Ｌ ４细 胞 凋 亡 的 特 点 及 可 能 的 分 子 机 制 进 行 探 讨 ． 为
夏 枯 草 的 临床 应 用 提 供 实 验 依 据
１ 实 验材 料