哺乳动物组织基因组DNA提取

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分子生物学实验

1000 mL
灭菌备用
灭菌备用
4. 3mol/L NaAc pH5.2
100 mL
先用50mL水溶解固体NaAc 再用3mol/L乙酸调pH至5.2，最
后定容
同时灭菌备用：枪头： 1mL 、200uL 各一盒小指管: 研磨棒: 2.0、0.5mL各20个 20支
无菌水：250ml X 2瓶
四、实验步骤
可能的结果：
由于基因组DNA比较难溶、且容易被降解，电泳时经常会出现弥散的或不均一的条带（如左图）。所以实验时一定要注意机械力对大分子DNA的破坏作用，如避免振荡、使用扩口枪头等。另外要适当的延长溶解时间。
实验的常见问题、关键问题及难点：
基因组DNA的断裂、蛋白和色素去除不干净基因组DNA难溶、电泳时凝胶易碎
10mmol/L Tris-HCl
25mmol/L EDTA
100mmol/L NaCl
2. 酶解液
100 mL （灭菌后再加蛋白酶K和SDS)
pH 8.0
20mmol/L Tris-HCl
50mmol/L EDTA
200mmol/L NaCl 200ug/mL蛋白酶K 1％SDS
3. 生理盐水(0.7%)
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。本实验以动物肝脏为材料,学习基因组DNA提取的g/mL，370C保温60min）

哺乳动物组织基因组DNA提取

DNA等。
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二、核酸分离纯化的一般步骤

破碎细胞→去除蛋白质、多糖、脂类等生物大分
子→沉淀核酸→去除盐类、有机溶剂等杂质→纯
化干燥→溶解。

核酸提取方案，应根据具体生物材料和待提取核酸分子的特点而定。对于某特定细胞器中富集的核酸分子，采用先提取细胞器后再提取目的核酸
分子的方案，可获得完整性和纯度两方面质量均
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四、实验步骤(Experimental
（二）破碎、酶解细胞（过夜）
冰浴处理生理盐水玻璃匀浆器
Procedures)
冰冷的生理盐水清洗（3次）
配制工作液
组织匀浆液
称取0.2g肝脏
剪碎
酶解液
2ml匀浆液
玻璃匀浆器匀浆离心
组织细胞液
移至1.5ml离心管无菌水
吹散加400ul
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7
核酸的分离纯化、测定及研究方法
一、分离核酸的一般原则
因为遗传信息全部贮存在核酸的一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基础。
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（一）核酸的分离和纯化时应遵循两个原则
① 保证核酸一级结构的完整性；
② 排除其它分子的污染。
（二）核酸的纯度要求
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溶液的配制
摩尔质量的计算:
质量(g) 分子量 ÷体积(L) ＝摩尔体积（mol/L） 5 mol／L NaCl 分子量58.44 x ÷0.05(L) ＝5（mol/L） x＝ 14.61（g） 58.44 (1) 5mol/L氯化钠（NaCl）：
通过紫外透射仪检测凝胶，然后获取图片。并将产物条带与已知分子量的标淮条带进行比较，便可以对合适分子量大小的产物进行鉴定。

实验一-哺乳动物基因组DNA的提取及纯化

二、实验原理基因组DNA的特性：分子量较大、易断
如何保证DNA分子的完整性
DNA抽提思路：
破碎组织细胞去除细胞内杂质
匀浆或液氮研磨蛋白、多糖、脂类、RNA和小分子物质
所提取的DNA片段的大小：100 ～150kb
纯化DNA
、实验原理
细胞裂解
上层溶液
干燥溶解
鲁东大学生命科学学院四、操作步骤
基因组DNA的提取：
School of Life Sciences
0.1g猪肝，冰冷生理盐水洗3次，剪碎转入玻璃匀浆器中，加入1mL匀浆液，匀浆至无组织块（冰上操作）将匀浆液转入1.5 mL小指管，加入蛋白酶K20 uL（20mg/mL），颠倒混匀 650C 恒温水浴锅中水浴30min 12000rpm，离心5min，取上清移入另一离心管
超净台中干燥后加 100～200uL TE, 40C溶解过夜，-200C保存（可进一步通过凝胶电泳检测所获取基因组DNA质量）
鲁东大学生命科学学院
五、注意事项
1.肝的处理时间不宜过长；
School of Life Sciences
2.加入细胞裂解液前，细胞需均匀分散，以减少DNA团块形成； 3.提取的DNA不宜过分干燥，否则会导致DNA溶解困难。
DNA纯化
加等体积氯仿/异戊醇，慢慢颠倒混匀，冰上平倒静置10min 40C，12000rpm离心10min，用扩口枪头取出上清
鲁东大学生命科学学院
School of Life Sciences
上清加等体积氯仿/异戊醇，慢慢颠倒混匀 40C,12000rpm，离心10min，用扩口枪头取上清上清加1/10体积的3mol/L NaAc（pH5.2)和加2倍体积的无水乙醇慢慢混匀，-200C静置20min 12000rpm离心10min，弃上清沉淀用1mL 70%冷乙醇洗两次，每次12000rpm离心10min，弃上清

动物基因组DNA的分离和琼脂糖凝胶电泳

每组取1 μL 、2 μL DNA样品，加1 μL电泳上样缓冲液（含溴酚蓝），少量的水（9、8 ul），混匀后加样于琼脂糖凝胶孔内。电泳（小胶100-120V，大胶150-180V）：使DNA移入琼脂糖胶内。一般为溴酚蓝迁移至中间即可停止电泳。用短波紫外线（254 nm）进行拍照，比较样品DNA与 DNA标准品（marker）的荧光强度（一般最亮的条带为 750bp，上样5 ul约100 ng），并计算出待测样品中DNA 的浓度。如果DNA已经降解，DNA的带就会拖尾巴，或出现弥散性分布，而不能形成清晰、紧凑的带纹，这样的DNA样品不能用于进一步研究。
ห้องสมุดไป่ตู้

每小组取1.5 ml EP管，加入上述消化细胞液600ul ，加入等体积酚／氯仿／异戊醇，缓慢颠倒离心管使两相均匀混合形成乳浊液，12000 r/min，4℃离心10 min。小心吸出EP管中的上层液体，即为含DNA的水相，注意不要吸中间界面上一层厚的白色物质（蛋白质沉淀）。然后加入等体积氯仿／异戊醇，12000 r/min，4℃离心10 min。(如果界面或水相中含蛋白质沉淀较多，可重复操作) 小心吸出上层含DNA的水相，加入1/10体积NaAc，充分混匀，然后加入2倍体积的无水乙醇，充分混匀，置-20℃ 冰箱约2 h。 12000 r/min，4℃离心10 min，弃上清液，得到的白色沉淀。加入1 mL 70％冷乙醇洗涤，继续离心，获得沉淀，室温干燥。加入50 L TE缓冲液溶解，即可得到基因组 DNA。-20℃冰箱保存。如果要对提取的DNA进行完整性鉴定，可通过琼脂糖凝胶。方法是取1 l溶解的DNA样品，在1％的琼脂糖凝胶中进行电泳，用溴化乙锭（或Goldenview）染色观察结果。

两种动物组织DNA提取方法的比较

从表３以看出，无论全舍饲试验组还是半可舍饲试验组，尿石舔砖的采食量都不大，而且尿
３结论
尿石舔砖营养全面，使用方便，尤其是可以
避免尿石现象发生，可作为饲养管理绒山羊生产
石舔砖价格适中，不会明显提高生产成本，可以
满足生产实际需要。
的营养补充料，具有广阔的应用前景。
畜牧兽医
试验综逋
两种动物组织Ｄ取方法的比较ＮＡ提
王春艳 ’ ，郑旭’ ，高月，刘玉英 ’ 。许桂华 ’ ，黄超’
（．１辽宁省畜牧科学研究院，辽宁辽阳１１０；１００２辽宁省辽宁绒山羊原种场有限公司，辽宁盖州１５０）．１２０
中图分类号￥５８１文献标识码Ｂ文章编号１７ — ６２２１）００５＂３６２９９（０２１— ０７０
【要】摘本试验以猪耳组织为试验样本，采用酚一氯仿抽提方法“ Ｎ提取试剂盒方法进行ＤＡＡ和ＤＮ
提取的对比试验，并通过核酸蛋白定量仪测量了ＤＡＮ浓度和纯度，并进行了ＰＲＣ扩增实验。试验表明，
２１．００２７
畜牧兽医
试验综述
业ＤＡ提取试剂盒，作者就这两种ＤＡ提取方室温状态下） ①取５ｇＮＮ０ｍ耳组织剪碎放入１ｌ．ｍ５
法进行了对比试验，试验证明，试剂盒方法提取离心管中，加入２０ｔ组织裂解液Ｔ，２ｌ０ｌｘＬＯ的
柱型）蛋白酶Ｋ、２ＰｗｒａＣｓｅＭｉ，、ｘｏｅｑＰＲＭａｔｒｘＴ

DNA提取方法

D N A提取方法-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1从动物组织提取基因组DNA一、材料哺乳动物新鲜组织。

二、设备移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。

三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L Tris·Cl , 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA 。

2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶K (20mg/ml 或粉剂)，乙醚，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1) ，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。

四、操作步骤:1. 切取组织5g 左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。

2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml 分离缓冲液。

3. 加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。

4. 加50ul 或1mg 蛋白酶 K, 37 ℃保温1-2 小时, 直到组织完全解体。

5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm 离心数秒钟。

6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1) 抽提。

待分层后,3000rpm 离心5 分钟。

7. 取上层水相至干净离心管, 加2 倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。

8. 移去上层乙醚,保留下层水相。

9. 加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2 倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。

室温下静止10-20 分钟， DNA 沉淀形成白色絮状物。

10. 用玻棒钩出DNA 沉淀,70% 乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE 中,-20℃保存。

11. 如果DNA 溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm 短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃保温30 分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10 重沉淀DNA。

2。

基因组DNA提取

基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。

实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。

置于液氮中冻结。

2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。

3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。

4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。

如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。

如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。

5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。

6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。

7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。

二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。

实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。

将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。

2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。

3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。

实验一-哺乳动物基因组DNA的提取及纯化

细胞裂解缓冲液（核酸酶抑制剂）、蛋白质酶K、TE缓冲
液（pH8.0）、酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）抽提液、氯仿：异戊醇（24:1）抽提液、5.2mol/L醋酸钠、异丙醇、无水乙醇、70%（V/V）乙醇、灭菌水
移液枪的使用
样品准备设定体积装枪头
吸液
放液使用完毕
将刻度调至最大量程，让弹簧恢复原形，延长移液枪的使用寿命
二、实验原理基因组DNA的特性：分子量较大、易断如何保证DNA分子的完整性 DNA抽提思路：
破碎组织细胞
匀浆或液氮研磨蛋白、多糖、脂类、RNA和小分子物质所提取的DNA片段的大小：100 ～150kb DNA
二、实验原理真核生物DNA以染色体形式位于细胞核内，因此，制备DNA的原是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA的完整。 SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白质与DNA分离，
DNA纯化
加等体积氯仿/异戊醇(24:1)，慢慢颠倒混匀，冰上平倒静置10min(40C 冰箱) 40C，12000rpm离心10min，用扩口枪头取出上清
பைடு நூலகம்
上清加等体积氯仿/异戊醇(24:1)，慢慢颠倒混匀 40C,12000rpm,5min，用扩口枪头取上清上清加1/10体积的3mol/L NaAc（pH5.2)和加2倍体积的无水乙醇慢慢混匀，-200C静置一周 12000rpm离心10min，弃上清沉淀用1mL 70%冷乙醇洗两次，每次12000rpm离心5min，弃上清超净台中干燥加 100～200uL TE, 40C溶解过夜，-200C保存（可进一步通过凝胶电泳检测所获取基因组DNA质量）
【实验流程】材料蛋白酶K 醇沉淀

哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告

小白鼠基因组DNA的电泳条带图
2．对实验现象、实验结果的分析及其结论：
（1）对实验现象的分析及其结论：从上述所示的DNA电泳条带图可以看出：小鼠基因组DNA的电泳条带都在同一条水平线上，但同时条带也有些暗淡，形状不佳。

（2）对实验结果的分析及其结论：
①本次实验抽提所得到的小白鼠肝脏细胞基因组DNA样品不纯，可能含有其他的一些杂质；
②本次所用的凝胶浓度为0.3％，浓度过低，也有可能是导致电泳条带形状不佳的原因之一。

3．对本次实验的自我总结：
①本次试验各个组员都积极参与，合作有序，按时按质完成了本次实验；
②通过本次实验进一步认识了作为分子生物学实验重要研究手段之一琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术；
③由于本次哺乳动物组织基因组DNA提取实验未在电泳时向凝胶中加入相对分子质量标准物Marker作为标准对照，故不好进行进一步的分析。

教师评语及评分：
签名：年月日。

DNA提取 Protocol

DNA提取是将生物体中的DNA分子从细胞或组织中分离出来，并将其纯化成为一个可进行分析的过程。

下面是DNA提取的实验原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。

一、实验原理DNA提取的实验原理是基于DNA分子的特性，它具有以下几个特点：1.DNA分子是细胞核中的主要遗传物质，它与蛋白质等其他物质结合成染色体。

2.DNA分子具有极性，即亲水基团和疏水基团。

在细胞中，DNA分子的疏水基团与蛋白质结合，亲水基团暴露于水中。

3.在一定浓度的氯化钠溶液中，DNA分子会从细胞中释放出来，并与蛋白质等其他物质分离。

4.通过加入一些化学试剂，如苯酚、氯仿等，可以将DNA分子进一步纯化，去除蛋白质等杂质。

二、所需试剂和耗材1.试剂：o氯化钠：用于溶解细胞中的DNA分子。

o苯酚：用于沉淀DNA分子。

o氯仿：用于去除蛋白质等杂质。

o乙醇：用于沉淀和洗涤DNA分子。

o氢氧化钠、盐酸：用于调整pH值。

2.耗材：o移液器及枪头：用于精确加样。

o离心管和盖子：用于混合和离心溶液。

o过滤器：用于过滤溶液中的杂质。

o无菌水：用于稀释和配制溶液。

o无菌塑料袋：用于保存样品。

三、实验仪器1.实验室搅拌器：用于混合溶液。

2.高速冷冻离心机：用于离心和分离DNA分子。

3.水浴锅：用于加热溶液。

4.无菌工作台或超净工作台：用于进行无菌操作。

5.分光光度计：用于测量DNA浓度和质量。

6.电泳仪和电泳槽：用于分析DNA样品。

7.显微镜：观察细胞生长状态和DNA提取过程。

四、准备工作1.仔细阅读实验步骤和注意事项，了解所需的试剂和耗材及其使用方法。

2.准备好所需的试剂和耗材，并确保它们处于保质期内。

3.检查实验室内是否具备上述实验仪器，并确保其正常运行。

4.用70%乙醇擦拭实验台面，以确保无菌环境。

5.用高压蒸汽灭菌法灭菌所有的实验器具，包括离心管、移液器等，需在适当的压力和温度下进行灭菌处理，以消除所有潜在的污染源。

分子生物学实验讲义

《生化与分子生物学》实验讲义天津医科大学生物医学工程系2005年实验一自抗凝血中提取哺乳动物细胞基因组DNA一、实验目的1、了解核酸的基本特性。

2、掌握DNA提取和鉴定的方法。

二、实验原理核酸的分离与提取是分子生物学研究中很重要的基本技术，核酸样品的质量可能直接关系到后续实验的成败。

核酸包括DNA、RNA两种分子，在真核细胞中都是以与蛋白质相结合的状态存在（DNA与组蛋白形成核小体，再折叠缠绕成染色体），真核生物基因组DNA 为双链线性分子，存在于细胞核内。

基因组DNA的提取需经过DNA的释放（破膜）、DNA与蛋白质的分离，DNA的沉淀等过程。

分离纯化核酸的总原则：1、保证核酸一级结构的（核苷酸序列）的完整性，全部的遗传信息均储存在一级结构中。

2、排除其它分子的污染。

a)对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子。

b)生物大分子：蛋白质、多糖和脂质。

c)其它核酸分子：RNA.三、实验试剂1、TKM缓冲液10 mmol/L Tris-HCl pH 7.6 （Tris 三羟甲基氨基甲烷）10 mmol/L KCl2 mmol/L EDTA4 mmol/L MgCl22、TE缓冲液10 mmol/L Tris-HCl1 mmol/L EDTA pH 8.03、10％SDS4、饱和氯化钠四、实验步骤1、取0.5ml EDTA抗凝的全血于清洁的1.5ml Eppendorf离心管中。

2、加入0.5ml TKM缓冲液，13μl Triton X-100（终浓度为1.2％），颠倒混匀。

在台式离心机上离心，5,000rpm×10分钟。

（低渗破红细胞膜）。

3、倾去上清液，在离心管中加入1.0ml TKM缓冲液，混匀后离心，5,000rpm ×10分钟，重复步骤3两次。

（清洗）4、于沉淀中加入200μl TKM缓冲液和15μl 10％SDS（终浓度为0.7％），混匀后于55℃保温20分钟。

（破白细胞膜）注：此步中可加入少量蛋白酶K。

哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告

哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告实验目的：
实验原理：
本实验采用了离心提取法，将细胞破裂并使DNA高度纯化。

实验步骤：
1.将肝脏样本放在冰上并迅速离心5分钟，将上清液移至50ml离心管中。

2.加入10ml EDTA-Triton X-100 Buffer，彻底混合。

3.离心15分钟，室温25°C，10000转/分钟。

4.用管钳将上清液倒入新的50ml离心管中。

6.将上清液倒出，加入70%的乙醇混悬液中。

8.将上清液倒出，将离心管底部置于吸水纸上20秒钟。

9.加入DEPC水，在室温25°C下彻底溶解DNA。

实验结果：
实验分析：
1. 相比较其他方法，离心提取法是一种较高质量的DNA提取方法。

2. 在实验中，我们需要密切注意样本放在冰上的时间，以确保样本不被污染。

3. 在实验中，我们需要适当地离心时间，以保证DNA的纯化程度。

4. 在提取后，我们需要用DEPC水进行溶解DNA，以确保DNA完全溶解。

基因组DNA提取步骤

基因组DN‎A提取步骤‎1.从无水乙醇‎中取出少许‎组织（约50mg‎）加入干净灭‎菌的E P管‎中，剪碎；2.加入400‎ul 1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K‎，充分浸润，入55℃摇床（100转/分），期间振荡助‎溶至澄清（5-6h）；3.取出消化液‎，加入6mo‎l/L的NaC‎l300u‎l，氯仿200‎u l，轻柔正反颠‎倒，使其充分乳‎化，4℃13000‎转/分离心30‎m in；4.取出上清（约400u‎l），加入等体积‎氯仿抽提一‎次，轻柔颠倒后‎，4℃13000‎转/分离心10‎m i n；5.上清加入5‎μl RNase‎A(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA‎(RNA对D‎N A的操作‎、分析一般无‎影响，可省略该步‎骤）。

6.取上清加入‎等体积异丙‎醇，轻柔混匀后‎-20℃沉淀10m‎i n；7.4℃13000‎转/分离心15‎m i n，弃上清；8.用75％乙醇洗涤1‎-2次（1000u‎l，11000‎转/分离心2m‎i n），弃上清；9.冰冻无水乙‎醇洗涤1-2次（1000u‎l，11000‎转/分离心4m‎i n）弃上清，自然晾干或‎烘干，DDW溶解‎，30-50ul。

基因组DN‎A的提取通‎常用于构建‎基因组文库‎、South‎e rn杂交‎(包括RFL‎P)及PCR分‎离基因等。

利用基因组‎D NA较长‎的特性,可以将其与‎细胞器或质‎粒等小分子‎D NA分离‎。

加入一定量‎的异丙醇或‎乙醇，基因组的大‎分子DNA‎即沉淀形成‎纤维状絮团‎飘浮其中, 可用玻棒将‎其取出，而小分子D‎N A则只形‎成颗粒状沉‎淀附于壁上‎及底部, 从而达到提‎取的目的。

在提取过程‎中,染色体会发‎生机械断裂‎,产生大小不‎同的片段,因此分离基‎因组DNA‎时应尽量在‎温和的条件‎下操作,如尽量减少‎酚/氯仿抽提、混匀过程要‎轻缓, 以保证得到‎较长的DN‎A。

基因组DNA抽提操作流程

基因组DNA抽提操作流程
1.收集样本：首先需要从待测样本中收集细胞。

这可以是任何包含细胞核的生物组织，如血液、组织样本或细菌培养物。

选择合适的样本类型根据具体的研究目的和实验要求。

2.细胞裂解：将收集到的样本进行细胞裂解，使细胞内部的DNA释放出来。

这可以通过一系列方法实现，如物理破碎、化学裂解或酶的作用。

具体使用哪种方法取决于待测细胞的特点和实验室的设备条件。

3.蛋白质去除：在细胞裂解的过程中，细胞核中的DNA会与蛋白质连接在一起形成复合物，需要进一步去除蛋白质。

可以使用蛋白酶对DNA溶液进行处理，将蛋白质降解分解，并使用盐溶液或酒精进行去除。

4.DNA沉淀：将去除蛋白质的DNA溶液中加入盐溶液或酒精，使DNA 沉淀下来。

这可以通过离心的方法加快DNA的沉淀速度。

离心操作常常需要根据DNA溶液的体积和设备的转速进行优化。

5. 溶解DNA：将沉淀下来的DNA溶于适当的缓冲液中，使其稳定并易于后续的分析和实验。

常用的溶解液包括TE缓冲液（含有Tris-HCl和EDTA）或纯化水。

6.检测DNA浓度和纯度：使用光谱分析仪或比色法等方法检测DNA的浓度和纯度。

这可以帮助确定DNA样本的适用性和是否需要进一步纯化。

需要注意的是，基因组DNA抽提的操作步骤可能会因实验目的和样本类型的不同而有所差异。

在具体操作过程中，应该根据实验室的设备和实验条件进行优化和调整。

同时，实施基因组DNA抽提操作的人员还需要注意安全规范，避免对人体和环境造成潜在的危害。

DNA提取纯化注意事项

基因组DNA提取纯化注意事项●组织样本DNA 纯化大多数动物组织可以用裂解缓冲液和蛋白酶/蛋白酶K 进行高效裂解。

在加入裂解液之前需要将组织切成小块，有条件的话建议使用TissueLyser或研钵等提前进行均质化。

骨骼肌，心脏，皮肤等组织含有收缩蛋白，结缔组织和胶原蛋白，所以利用蛋白酶/ 蛋白酶K 进行充分消化是必须的。

FFPE 样本进行DNA 纯化时需要预裂解。

福尔马林可由PBS 洗涤除去，石蜡可由二甲苯和乙醇进行去除。

在蛋白酶消化后提高孵育的温度有助于逆转交联，以便更好的从FFPE 组织中释放DNA，从而有助于提高DNA 产量和改善下游检测性能。

从FFPE 中得到的DNA 通常比从新鲜或冻存样本中得到的DNA 分子量小；DNA 降解的程度则取决于样本类型，储存时间和固定的条件。

●从微量样本中纯化DNA微量样本中DNA 的含量很低，通常小于5 ng DNA, 通常需要使用carrier RNA 来提高产量（不会影响下游分析检测）。

如果需要使用carrier RNA，那么在测量OD 的时候会因为使用carrier RNA 造成浓度测量有偏差（因为RNA 在260 nm 也有吸收）。

推荐使用QIAamp DNA Micro Kit 从微量样本中进行DNA 纯化，该试剂盒采用MinElute 硅胶膜柱，洗脱体积可以低至20 μl，同时通过两步洗涤去除PCR 抑制剂等污染物，最大程度从微量样本中纯化DNA。

●从血液样本中纯化DNA血液样本可以是新鲜或冻存全血或干血片，由于血液样本在采集后会迅速凝固，所以通常在采血时使用EDTA，柠檬酸盐或肝素进行抗凝。

经过抗凝处理的血液样本可以直接用于DNA 纯化，需要注意的是使用的DNA 纯化方法需要能够去除上述抗凝剂，以免干扰下游PCR 检测。

全血也可以在DNA 纯化前先进行白细胞富集等再进行DNA 纯化。

从血液中纯化DNA 的产量很大程度上取决于血液中的白细胞数量，而白细胞数量则和血液的供体情况有很大关联（如贫血或感染都会造成白细胞数量变化）。