小鼠骨髓染色体制备及观察

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动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告

实验目的：

本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。

实验原理：

染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。

为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。

实验步骤：

1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。

2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。

3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。

4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。

5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。

实验结果：

制备的染色体标本在显微镜下观察。通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。

结论：

本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。

实验二、骨髓细胞染色体制片与观察

（注：6为肱骨，14即股骨）
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。
取骨髓细胞：用剪刀剪开股骨的两端使骨髓露出。用注射器抽取3 ml生理盐水，从一头插入骨髓腔缓慢冲洗，冲洗液接入10ml离心管内，洗至骨髓腔变灰白色。
滴片：视末次离心后获得细胞的多少留固定液0.2-0.4 ml。用细头滴管轻轻打匀。取冰浴中的载玻片一张，甩掉载玻片上的冰水后，迅速用吸管吸取细胞悬液，从35-40cm的高度滴到载玻片上，每张载片滴2-3滴，滴面不要重复，立即用嘴向一个方向轻轻吹开，使细胞染色体散开，但避免将细胞吹到一端。在酒精灯上过火2-3次，自然干燥备用。每只动物滴3-5张标本。
实验二、骨髓细胞染色体制片与观察
同济大学生命科学与技术学院
一、实验目的
❖ 学习活体小鼠骨髓细胞染色体标本的制片技术；
❖ 观察小鼠有丝分裂中期的染色体数目、结构及其特征。
二、实验原理
❖骨髓存在于长骨（肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如骼骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织。骨髓中存在造血多能干细胞，具有高度自我更新的能力（即有丝分裂），并能分化为各血细胞系统的祖细胞（如淋巴系干细胞、粒系干细胞）。
❖ 试剂：干酵母粉、葡萄糖、无水甲醇、冰醋酸、氯化钾、0.9% 氯化钠、0.02﹪ 秋水仙素、Giemsa原液等。

小鼠骨髓细胞染色体标本制备和核型分析

四、实验步骤 (续)
3. 收集细胞：剪去股骨两头，用生理盐水冲洗股骨髓于离心管
中，反复数次，至骨髓发白，1500~2000r/min离心8 min，弃上清。
4. 低渗处理：将约7ml预热37º C的低渗液加入离心管中，吸管混匀，再置于37º 恒温水浴锅中保温15min(中途用吸管混匀 C 一次)。 5. 预固定：取出离心管，向管底加入1ml新配制的固定液(甲醇：冰乙酸=3：1)，混匀，平衡，800~1000 r/min离心10 min，弃上清。 6. 固定：向沉淀物中加入新鲜固定液5ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温静置15min，平衡后800~1000 r/min离心10 min，弃上清。 7. 再固定：方法同步骤6。
快速法：注射秋水仙素-低渗-固定-滴片-染色
一、目的要求
1. 掌握小鼠骨髓细胞染色体标本的制备方法； 2.掌握染色体分组特征, 对染色体核型进行分析; 3.了解并制备小鼠染色体核型图。
二、实验原理

染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。骨髓细胞是一种增殖细胞，利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠骨髓细胞的染色体。

实验七-动物骨髓细胞染色体的制备与观察.

[实验目的]

1. 通过青蛙或小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。

2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。

[实验原理]

骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。其次是要能够清楚的观察染色体的形态。为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。制备优良的标本可获得满意的观察效果。利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。

[实验用品]

1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。

2. 试剂：﹪秋水仙素、l氯化钾 (kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。

3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察

试验目的

把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理

试验原理

小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

试验原理

制备方法包括以下几个要点:

1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处

2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上

3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象

试验用品

1．材料：小白鼠

2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅

3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红

试验步骤

预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看

1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。

2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净

3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中

4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清

5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清

小鼠骨髓染色体实验报告

实验课名称遗传学实验实验名称小鼠骨髓细胞染色体的制备与观察成绩________________

姓名王大锤实验报告系列年级学号组别时间温度

实验原理及目的

实验目的

1、学习小鼠骨髓细胞染色体制片程序；

2、掌握空气干燥法制片方法；

3、观察了解小鼠的端着丝粒染色体的形态。

实验原理

1、染色体标本

制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是其它技术（如显带、原位杂交等）的先决条件。

2、骨髓细胞染色体

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。动物染色体制备最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数很高，可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞或其它组织需要经过体外培养。

3、空气干燥法

指细胞经过秋水仙素处理、低渗处理、充分固定和滴片等步骤之后，使载片在空气中自然干燥的方法。

实验材料、仪器及试齐U

仪器：

光学显微镜，2mL注射器，5号针头，10mL刻度离心管，吸管，试管，试管架，载玻片，盖片，离心机，光学显微镜，解剖器具（解剖盘，剪子、镊子）。

材料：

小白鼠（Mus musculus 2n=40 ）,体重约18-20g （65-90日龄），雌雄皆可。

试剂及其他：

秋水仙素溶液（100卩g/mL）, 2%柠檬酸钠溶液，0.075M KCl，冰醋酸，甲醇，Giemsa原液, 0.01 M 磷酸缓冲液（PBS, pH 7.4）1•预处理生命与环境科学学院实验报告

进行秋水仙素处理。取骨髓前3-4h给小鼠经腹腔注入秋水仙素（100卩g/ mL）0.3-0.4mL。

小鼠骨髓细胞染色体标本制备

7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打，使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟，弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干。预冷载玻片的作用： 12、染色：10% Giemsa染液染色30分钟。 13、镜检：低倍———高倍。
二实验原理10ml四倍体荞麦体细胞中期染色体2n32二倍体荞麦体细胞中期染色体2n16
实验九
小鼠骨髓
细Leabharlann Baidu染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始细胞，具有高度的分裂增殖能力。
五、作业
1 、选择染色体清晰，分散好的并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
中期分裂相，计数染色体，显微摄影、
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
2、适当浓度秋水仙素处理分裂增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色体不分裂成为子染色体，使细胞不向后期过渡，从而收集到更多的中期分裂相。同时秋水仙素作用能使染色体缩短、变粗。

遗传学实验报告：小鼠骨髓染色体标本制备

小鼠骨髓染色体标本制备实验报告

一、实验目的

掌握实验动物骨髓染色体标本的一般制备方法；识别有丝分裂中期相的染色体形态；了解小鼠染色体的形态特征及其数目。

二、实验原理

用于染色体制备的细胞系需要是分裂增殖旺盛的。一般临床采用外周血细胞培养，利用植物血凝素刺激淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞。动物骨髓细胞是另一种具有旺盛分裂增殖能力的细胞。在骨髓细胞中处于分裂相的细胞数目较多。为了有效积累更多的有丝分裂中期细胞，可在收集骨髓细胞前用秋水仙素对其进行处理，其作用是抑制细胞分裂过程纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂停止于中期，可以积累中期分裂相细胞，以便于染色标本的制备。

制备过程中用KCL低渗处理，可使细胞体积膨大，染色体分散。低渗后，需要用固定液固定染色体。高位滴片和吹散滴液，可使染色体进一步分散。用预冷的载玻片滴片后，迅速过火，可使染色体进一步扩散和固定，以便于制片和观察分析。

通过制备小鼠骨髓染色体标本，可以评价毒性物质对动物细胞染色体的影响。本法可应用于环境致突变剂的检测，具有简单、直接、利于掌握的特点，普通实验室均可应用。因此本法是检测有害物质对机体遗传物质损伤的常用实验方法之一。

三、实验步骤

1、取材：小鼠股骨骨髓细胞

取材前4小鼠于小鼠腹腔内注入0.04%的秋水仙素（0.01ml/10g）以积累中期分裂相。颈椎脱臼法处死小鼠，取其两侧股骨。将处死后的小鼠腹面朝上，用酒精棉球将皮毛擦拭干净，从外生殖口剪开皮肤，剃净肌肉及内脏，用酒精纱布清除其上粘附的肌肉及结缔组织。剔除干净后，用剪刀剪去股骨两端少许骨垢及骨皮质，暴露出红骨髓，用5ml预温37℃的0.075M KCL分两次分别从股骨两端冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到同一5ml刻度离心管中。

小鼠骨髓细胞染色体标本的观察

第9页
年11月（生技101班）
年11月（生技101班）
小鼠骨髓细胞染色体标本的观察
第10页
几个动物染色体形态特征
动物名称染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙小白鼠
26
中央、亚中央着丝粒染色中央着丝粒染色体，中央着丝粒染色体，
体
介于6～7号
介于8～9号
40
全部为近端着丝粒染色体大小介于5～6号大小介于19～20号
小鼠骨髓细胞染色体标本的观察
第4页
三、试验用具
1.材料：小白鼠 2.试剂：0.01﹪秋水仙素,0.4%氯化钾
(KCl),固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa染液, 0.01M磷酸缓冲液(pH 6.8)，2%柠檬酸钠。 3.器材：离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻片和盖玻片、染色缸、玻片盒
制得好标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞因为低渗和固定处理，细胞膜和质已被去掉，镜下看到仅为膨胀后呈圆形细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细胞膜包裹，染色体之间无重合，易分辨，臂长度适中。但最主要是分裂相要多。
小鼠骨髓细胞染色体标本的观察
第8页
小鼠骨髓细胞染色体标本的观察
8.离心：1000rpm离心6分钟，弃上清液。

实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察PPT课件

细胞传代
在细胞生长到一定数量后，进行传代培养，保持细胞的活性。
染色体制备
细胞固定
使用固定剂将培养的骨髓细胞固定在培养瓶中，防止细胞移动。
细胞解离
使用解离液将细胞从培养瓶壁上解离下来，形成单细胞悬液。
染色
将单细胞悬液染色，以便观察染色体。
染色体观察
制备载玻片
高倍镜观察
将染色后的细胞悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片。
染色体结构异常特征
染色体结构异常是指染色体内部结构的改变，包括易位、倒位、缺失和重复等。这类异常可能导致遗传性疾病如唐氏综合征、威廉姆斯综合征等，以及生长发育异常、智力障碍和生育障碍等症状。
03
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
麻醉小鼠
脱臼处死
切开皮肤和骨骼
抽取骨髓
使用麻醉剂将小鼠麻醉，确保其在整个实验过程
了解小鼠骨髓细胞的染色体特征
染色体数目
小鼠骨髓细胞具有特定的染色体数目，通过观察可以了解其正常的染色体组成为什么。
染色体形态
不同物种的染色体形态具有特异性，通过观察可以了解小鼠骨髓细胞的染色体形态特征。
分析染色体异常对小鼠骨髓细胞的影响
染色体变异
在某些情况下，小鼠骨髓细胞的染色体可能会发生变异，如缺失、重复、倒位等。这些变异可能会对细胞的生长、发育和功能产生影响。

实验六小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

实验六小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
杭州师范大学刘姬艳
一、实验目的
1. 通过小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法 2.熟悉染色体的形态、种类及小白鼠等动物染色体的数目及特点
二、实验原理
骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。
制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长度适中。但最重要的是分裂相要多。
几种动物染色体形态特征
动物名称染色体数
染色体类型
三、实验用品
1.材料：小白鼠 2.试剂：0.01﹪秋水仙素,0.4%氯化钾 (KCl), Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa 染液，0.01M磷酸缓冲液(pH 6.8)，2%柠檬酸钠。 3.器材：离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻片和盖玻片、染色缸、玻片盒
旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察的细胞周围，没有离散的单个或多个染色体存在，以免影响计数。
七、实验报告与思考题
实验报告
1.记录所观察小白鼠骨髓细胞染色体的数目和形态。 2.绘制一个你所观察到的小白鼠骨髓细胞染色体分裂相图。

实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备

实验目的：

通过制备小鼠骨髓细胞染色体标本，了解染色体结构、形态和变异等方面的知识，为

后续核型分析、染色体异常检测等实验打下基础。

实验原理：

小鼠骨髓细胞染色体标本制备是指将小鼠骨髓组织中的细胞进行处理后制备成适合观

察的染色体标本。该标本制备方法包括细胞处理，染色体制备和染色体观察等环节。

1.小鼠骨髓细胞处理

将小鼠放入固定夹，使用无菌注射器向小鼠腹腔注入适量的钾盐缓冲液（KCl，

0.074mol/L）。

钾盐缓冲液的功能是使细胞发生肿胀，探头区别正常细胞和异常细胞。此外，钾盐缓

冲液也有不利的作用，可以导致一些染色体脱落或断裂。

接下来，在小鼠固定夹上进行剖腹，取出骨髓。骨髓组织放置在一滴含有10%甘露醇

的氯仿中进行易位。

在显微镜下观察细胞的形态结构，进行可行性检测。

2.染色体制备

取干净的药片，滴入细胞悬液，热外片变性塔。

药片的材料使用高价值玻璃药片，这样可以保证药片平整和染色体不能和药片表面黏附。

加入甘醇一定要多加就能快速促进水分的蒸发，避免液体反应产生气泡而影响结果。

不需要太用力，在药片的表面轻轻涂抹，使液体均匀分布。接下来，将药片吸入液、95%甲醇，以及3%乙酸中每个5分钟，直到药片完全干燥。

3.染色体观察

将药片上的细胞标本置于显微镜上，根据染色体数目和形态等信息进行染色体分析。

在显微镜下观察染色体的特征，包括染色体数量、形态、大小、位置以及异常情况等。对观察到的染色体进行记录和描述。

实验结果：

通过对小鼠骨髓细胞进行染色体制备和检测，我们可以观察到染色体的结构、形态等方面的特征。

试验六小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察

6．加Giemsa染液染色8－10min，流水冲去染液（注意水流不可急，细流冲去即可），干燥（晾干），观察，可见分散良好的染色体。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果：（1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上
传图片1幅）。（2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论：（1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块分散，静置10min，再离心10min，弃上清液，重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液（取悬液前吸打均匀），单向吹气展开，酒精灯上文火烘干。
步会怎样？（2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和对二氯苯。
• 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
试验六小白鼠骨髓
细胞染色体制备及观察
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理，可得到清晰的中期染色体标本。

大学课程遗传学实验小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察 JC课件

载玻片（冰片）
• 实验动物
健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，体重约18～20g，雌雄不限。
• 试剂
秋水仙素、生理盐水、KCl 、甲醇、冰乙酸、 Giemsa染液
【实验原理】
1.动物预处理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种
血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本 2.取材及收集细胞实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定
• 临用时用pH 6.8的0.025mol/L磷酸盐缓冲液稀释10倍。 • 磷酸盐缓冲液配制： • KH2PO43.4克，溶于800mL蒸馏水中，用5%~10%的NaOH调pH至6.8，加蒸馏水
定容至1000mL。
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理
• 4.预固定：现配固定液甲醇、冰
2.取材及收集细胞醋酸（3：1）1ml，打匀，离心8分
3.低渗
钟（1000r/min），弃上清。
4.预固定
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色 10.镜检
使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期，便于观察
1.动物预处理：
实验前2～4小时注射秋水仙素，按小鼠体重4微克/克腹腔注射。
2.取材及收集细胞：颈椎脱臼法处死小鼠，剪开后肢皮肤和肌肉，取出完整股骨，剔除肌肉、肌腱，生理盐水洗净；剪去少许股骨头，吸取4ml37℃预温 0.075mol/L KCl低渗液冲洗两个股骨的骨髓细胞至同一试管。

小鼠骨髓细胞染色体

此时给动物注射一定剂量的秋秋水仙素水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中可使许多处于分裂的细胞停滞于中秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装然后采用常规空气干燥法制备染色体即然后采用常规空气干燥法制备染色体即可得到大量可供分析的染色体标本
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察
实验目的：
结果与讨论：绘制染色体图：（小鼠骨髓细胞染色体）
பைடு நூலகம்
对于小鼠骨髓细胞染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：（重点） 1．用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在分裂中期，使中期染色体停留在赤道面处。 2．用低渗法使将细胞膨胀，以至于在滴片时细胞被胀破，使细胞的染色体铺展到载玻片上。 3．空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa 染色后便可观察到染色体的图像。 4．倒置染色法：在玻璃板上用牙签做支架，使标本载玻片的标本面向下放置到支架上，然后用滴管在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液，在操作时应注意，滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。此法一是可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防止染色颗粒沉淀，影响观察。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中期（秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装），然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可供分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作。

实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察

一、实验目的

了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。利用显微照相技术对所得切片进行照相。二、实验原理

染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。

三、实验用具及材料

实验材料：体重20克左右的小鼠一只

实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯

实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸

光学显微镜、带数码相机的光学显微镜

四、实验步骤

1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。

2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。