拮抗尖孢镰刀菌的芽孢细菌的筛选

玻 璃 珠 的无 菌 水 中 ，充 分振 荡 混 匀 ，用 滤 纸 过 滤 ， 收集 滤 液 。 以 血 球 板 计 数 （ 约 １ ｏ ７ 个／ ｍ１ ） 。将 ５ ｍ１ 孢 子 悬液 加 入 １ ０ ０ ｍｌ ４ ５℃左右 的 Ｐ ＤＡ培 养 基 中 ， 充 分振 荡均匀 后倒 平板 ［ １ １ 】 。 Ｉ ． ２ ． ４ 尖 孢镰 刀 菌拮 抗细 菌 的初筛 。挑取 分离 得 到 平 板上 ，进 行生 长对 峙试 验 ，观 察是 否有 抑菌 圈 出 现 ，筛选 产 生抑菌 圈的拮抗 细菌 。 １ ． ２ ． ５ 尖 孢镰 刀 菌拮 抗细 菌 的复筛 。将初 筛得 到 的
单 菌 落 转 接 至 ＮＡ 培 养 基 斜 面 上 ，３ ７ ℃恒 温 培 养 ２ ４ｈ ，４℃冰 箱保 存备 用 。
镰 刀 茵有 显 著拮 抗 作 用 的 菌株 ６株 ，其 中 ｚ Ｈ一１ ５
菌株 拮抗 作 用 最显 著 ，为 尖孢镰 刀 茵 ；拮 抗 ；芽孢 细茵 ；筛选
由尖 孢镰 刀菌 （ Ｆ ｕ ｓ ａ ￣＇ ｕ ｍｏ ｘ ｙ ｓ ｐｏ ｍｍ） 侵染 引起 的 植 物枯 萎 病 是 一种 世 界 性 的土 传 真 菌病 害 【 】 。病 菌 从 根 部 为 害 植 物 ， 引起 维 管 束 病 害 ，造 成 植 株 枯 死 ，在植 株 的全 生育 期均 可 发生 ，对 生产 造 成 了具 大 的损 失［ ２ － ３ ］ 。 国 内外 已报 道 的被 严重 为 害 的作 物 有 棉 花 、甘 蔗 、香蕉 、番 茄 、黄 瓜 、 哈 密瓜 、西 瓜 、 大豆 、豇 豆 等［ ４ － ５ ］ 。 目前 防治枯 萎病 的主要 方法 是 培 育抗 病 品种 、使 用化 学药 剂 和利 用农 业措 施等 ，但 由于枯萎 病 属于 土传 病 害 ，这些 措施 在 防治 中往往 效 果都不 太 理想 ， 因此 ，尖孢 镰 刀菌 的生 物 防治越 来越 引起 人们 的关 注旧 。 芽孢杆 菌（ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓｓ ｐ ｐ ． 是 一 类 好 氧 或 兼 性 厌 氧 、产 芽孢 的革 兰 氏阳性 菌 ，对 人畜 无毒 无害 ，不 污染 环境 ，能产 生 多种抗 菌 素和 酶 ，具有 广谱 抗菌 活性 和极 强 的抗逆 能 力 ，不仅 可 以在 土壤 、植 物根 际 体表等 外 界环 境 中广泛 存在 ，同时 还是 植物 体 内 常 见 的 内生 细 菌【 ７ 】 。芽 孢 杆菌 最 突 出 的特 征 是 生长 快 、营养 简单 ，能产 生耐 热 、抗逆 的芽孢 ，这 有利 于 生 防菌 剂 的 生产 、剂 型加 工及 在环 境 中的 存 活 、 定 殖 与 繁 殖 ，而 且批 量 生产 工 艺 简 单 ，成 本 也 较 低 ，施用 方便 。 田间应用研 究 己经 证 实芽孢 杆 菌 生 防菌 剂在 稳定 性 、与 化学 农药 相容 性和 在 不 同植物
稀释 和 涂布 平板 法 。从 土样 中分 离不 同 茵落形 态 的 芽孢 细 菌 ３ ２株 。 通过 十 字 划线 法 进 行初 筛 ，获 得
对 尖孢镰 刀 茵有拮 抗作 用的 茵株 ２ １株 ，其 中 １ ３株
拮 抗作 用显 著 。通 过打 孔 法进 行复 筛，获得 对 尖孢
分别取各梯度稀释液涂布于 Ｎ Ａ培养基平板，然后 于３ ７℃培 养箱 中倒 置 培 养 ２ ４ ｈ 。挑 取 不 同形 态 的
表 １ 分 离 的 芽 孢 菌 的 形态 特征
的不 同形态 的细菌 单 菌落 ，分别转 接 在尖 孢镰 刀 茵 ０ 狙 ４ 脚 罐 珊珊脚 邶 小ｍ 脚 珊珊 舶
菌株号
菌落形态特征 边缘有不规则刺状 ，表面有皱褶，近中心处有突起 。 边缘不规则 ，表面有皱褶，干燥 ，乳白色 。 边缘较整齐 ，圆形 ，表面有皱褶，微黄色 。 表 面有微皱褶 ，圆形 ，黄色，干燥。 菌落较厚 ，近 圆形 ，乳 白色，中心突起 。 菌落成 同心 圆状 。乳 白色 ，粘稠状。 菌落较小 ，中心凹陷，乳 白色。 边缘整齐 ，圆形 ，表面粗糙， 白色。 边缘有不规则刺状 ，表面有细皱 褶，近 中心处有突起 。 圆形，边缘整齐 ，金黄色 ，粘稠。 树枝状 ，不规整 ，中心有一微黄色深点。 边缘整齐 ，表面光滑 ，干燥， 白色。 圆形 ，有皱摺 ，干燥， 白色稍发黄色。 近 圆形 ，表面有点状突起 ，白色，干燥 。 边缘整齐 ，同心圆状，中心有突起，表 面皱褶 。 边缘不整齐 ，中心有皱褶 ，表面湿润，污白色。 边缘整齐 ，表面光滑 ，圆形 ，中间较薄，橘黄色。 菌落 呈同心 圆状 ，中心突起， 白色，边缘整齐 。 菌落 中心平坦 ，成辐射状 ，干燥， 白色。 边缘不整弄 ，成树状 ，有微皱摺，中间发黄色 。 中心有皱褶 ，由中心 向外呈辐射状，干燥 ，乳 白 色。 菌落成花瓣状 ，较湿润 ，有突起， 白色稍 发红。 菌落表面有突起 ，边缘辐射状，微黄色 ，粘稠状。 有深 浅不 同的沟 ，边缘不整齐，较湿润，乳 白色。 菌落成花瓣状 ，较湿润 。有突起， 白色稍发红。 表面平整光滑 ，干燥，边缘不整齐，扩散状，乳白色 。 中心 凹陷 ，干燥 ，颜色较深，近 圆形。 表 曲皱褶较多，边缘不规整，乳 白色。 边缘呈树枝状 ，表面湿润 ，中性微微凹陷，微黑色 。 辐射状 ，不规整 ，中心有一微黄色深点。 边缘整齐 ，干燥 ，皱褶突起较高，污 白色 。 ’ 边缘整齐 ，同心圆状皱褶，有突起 。
不 同年份 防效 的一 致性 等方 面 ，明显优 于 非芽 孢杆 菌和 真菌 生 防菌［ ８ － ９ ］ 。
１ ． ２ ． ３ 尖孢镰刀菌平板的制作。刮取尖孢镰刀菌菌 落上的孢子接种到新鲜 Ｐ Ｄ Ａ培养基斜面 ，２ ６℃活 化培 养 ７ ｄ ，之 后 转接 到 Ｐ Ｄ Ａ斜面上培养 ７ ｄ ，用 接 种铲 从 病 原菌 菌落 表 面刮 取 孢子 ，放 入 ｌ ０ ｍｌ 带
拮 抗 尖 孢 镰 刀 菌 的 芽 孢 细 菌 的 筛 选
摘 要 ：通 过 ８ ０℃ 水 浴加 热 ２ ０ｍｉ ｎ 、 系列 梯 度
１ ． ２ Ｉ ２ 产 芽 孢 细 菌 的分 离 。取 １ ． ０ ｇ土 样 放 入装 有 ９ ． ０ ｍｌ 无 菌水 的试 管 中，混匀 后 ８ ０℃ 水 浴 加 热 ２ ０ ａｉ ｒ ｎ ，取 １ ． ０ ｍｌ 进行 １ ０ 、１ ０ 一 、１ ０ － ６ 梯度 稀释 ，