实验_叶绿素的提取和分离

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叶绿素的提取和分离

加少量SiO2 加少量CaCO3
迅速、充分研磨
使滤液中色素含量高溶解色素研磨充分
保护色素,防止叶绿素被破坏
防止乙醇挥发,充分溶解色素
6 盛放滤液的试管管口加棉塞防止乙醇挥发和色素氧化
分1
滤纸预先干燥处理使层析液在滤纸上快速扩散
离 2 滤液细线要直、细、匀使分离出的色素带平整不重叠
源自文库
色 3 滤液细线干燥后再画－两次使分离出的色素带清晰分明
考点1 绿叶中色素的提取和分离
题组一：考察实验选材、试剂的作用和实验操作：
2013·江苏单科,5 关于叶绿体中色素的提取和分离实验的操作,正
确的是
。
A．使用定性滤纸过滤研磨液 B．将干燥处理过的定性滤纸条用于层析 C．在划出一条滤液细线后紧接着重复划线2～3次 D．研磨叶片时,用体积分数为70%的乙醇溶解色素
一、实验原理：
色素提取色素分离
试剂无水乙醇
层析液
原理
绿叶中的色素溶于有机溶剂无水乙醇,而不溶于水。
各种色素在层析液中的溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸条上扩散得快,反之则慢。
层析液：20份石油醚,2份丙酮和1份苯混合而成,93 号汽油也可做层析液用
二、实验步骤：
三、实验结果：
四、色素种类及吸收光谱：
下 ,与正常叶片相比,实验结果是 A．光吸收差异显著,色素带缺第2条

叶绿素的提取和分离

一、实验过程

1、提取绿色叶片中的色素

将除去叶柄和粗叶脉的5g 左右新鲜绿色叶片（菠菜叶或白菜叶、女贞叶），剪碎，放在研钵中，加入少许二氧化硅和碳酸钙，进行充分的研磨，当研磨成糊状时，再加入5-6ml 丙酮，用杵棒迅速搅动后，静止3-5min，就可看到丙酮提取液为深绿色，再将澄清的提取液直接收集到有色的小广口瓶中（不经过滤）。丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。在进行实验操作时尽量少吸入丙酮，搅动后静止时，用纸或塑料薄膜盖在研钵上。因为叶绿体中的各种色素都是脂类化合物，不溶于水，只溶于酒精、乙烷、丙酮、石油醚等有机溶剂中，且用丙酮的效果较好，加入丙酮就是为了快速提取色素。又因丙酮的化学性质不稳定，极易挥发，所以必须在充分的研磨后加入，而不在研磨前或研磨中加入。在实验过程中，发现在研钵中加入2ml 丙酮，数量不足，色素提取液量不多，如果再经脱脂棉过滤，滤液几乎全被吸走，提取色素困难，所以改成加入丙酮5-6ml。将色素收集到有色的小广口瓶中，目的是避免叶绿体中的色素，在接触空气或光照下遭到破坏。

2、制备滤纸条

取一张预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成8-9cm 长，1cm 宽的滤纸条，再将滤纸条的一端对折剪去两角。

3、画滤液细线

用牙签（或用钢笔尖、六号注射针头等）代替毛细吸管，蘸取有色小广口瓶中滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，划的线条越细越齐（直），而且待滤液干燥后，继续重复画4～5 遍，实验效果越好。

4、叶绿体中的色素分离

将4ml 层析液倒入100ml 烧杯中，再将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微倾斜靠着烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯，滤纸上的滤液细线要与层析液离开一定的距离，即层析液不能没及滤纸条上的滤液细线。

叶绿素的提取和分离

叶绿素是植物和藻类中存在的一种绿色色素，它的提取和分离可以通过以下步骤进行：

1. 鲜叶采集：选择新鲜健康的叶子样品，并尽量避免阳光暴晒和长时间储存。

2. 研磨：将采集的叶子样品用搅拌机或者研钵研磨成细碎的绿色浆状物。

3. 植物组织破碎：将研磨好的样品浆液通过高速离心或搅拌法破碎细胞结构，并释放叶绿素。

4. 提取：将破碎的植物组织样品置于溶剂中，通常可以选择乙醇、丙酮、二甲亚砜或乙酸乙酯等有机溶剂。在室温下浸泡一段时间，使叶绿素溶解到有机溶剂中。

5. 离心：将溶解了叶绿素的有机溶剂进行低速离心，以分

离溶剂和植物残渣。

6. 过滤：将离心后得到的溶剂进行滤过，以去除悬浮的杂质。

7. 浓缩：将过滤后的溶剂用恒温浓缩器或蒸发器进行浓缩，使其体积减小。

8. 纯化：对浓缩后的叶绿素溶液进行进一步纯化，可以使

用柱层析、薄层层析或高效液相层析等技术，以分离和纯

化叶绿素。

9. 干燥：将纯化后的叶绿素溶液进行干燥，可以通过喷雾

干燥、真空干燥或冷冻干燥等方法。

10. 得到叶绿素提取物：经过上述步骤后，叶绿素提取物便可以得到，并可以用于进一步的分析和应用。

需要注意的是，以上步骤仅为提取和分离叶绿素的一种常用方法，具体操作步骤和参数可根据实际情况进行调整。同时，对于更为复杂的样品和目的，可能需要选择其他提取和分离技术进行操作。

叶绿素的提取和分离实验

叶绿素的提取：称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。

准备过滤纸条：将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。

画滤细线：用毛细管吸取少量滤液，并沿铅笔线均匀划出一条细线，待滤液干后再画1~2次。

叶绿素分离：在试管中倒入适量层析液。得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。

叶绿素提取注意事项：

准备滤纸时，要将滤纸的一端剪去两角，这样可使色素扩散到滤纸上，以便于观察实验结果。

过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用，若用其过滤，会导致收集到的滤液色素含量少，使实验效果不明显或失败。

叶绿素的提取和分离

叶绿素是一种含有镁离子的绿色色素，广泛存在于植物、藻类和一些细菌中，是光合作用过程中吸收光能的重要物质。叶绿素的提取和分离通常可以通过以下步骤实现：

1. 采集样品：首先需要采集含有叶绿素的植物、藻类或细菌样品，较好的样品应该是新鲜的、健康的、并且没有被过度受损。

2. 破碎细胞壁：将采集到的样品经过冷冻破碎或高速离心等处理，将细胞壁破碎并释放出细胞内的叶绿素。

3. 溶解蛋白质：用生理盐水或其他适当的缓冲液将样品中的细胞膜、蛋白质等溶解掉，并且使叶绿素以游离形式存在于溶液中。

4. 溶剂萃取：利用溶剂（如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等）对上述溶液中的叶绿素进行萃取，以分离出含有叶绿素的有机相。

5. 色谱分离：将通过溶剂萃取得到的含有叶绿素的色素混合物进行色谱分离，以分离出不同类型的叶绿素，并且去除杂质，获得纯度较高的叶绿素。

总之，叶绿素的提取和分离需要依次实施多个步骤，选择适当的解剖技术和实验方案可提高叶绿素的分离纯度和产量。

叶绿体色素的提取和分离(纸层析法)

叶绿体是植物细胞中重要的细胞质器之一，它们负责植物的光合作用，能够将光能转化为化学能，生产出有机物质和氧气。叶绿体中含有多种色素，包括叶绿素、类胡萝卜素和花青素等，它们的色彩不同，吸收光的波长也不同，能够促进光合作用的进行。

叶绿体色素的提取和分离是一项重要的实验技术，科研工作者可以通过这种方法研究叶绿体的结构和功能，探究光合作用的机制，还可以进一步研究色素的生物活性和作用机理。下面介绍纸层析法提取叶绿体色素的方法。

实验材料：

1.醋酸丙酮乙酯

2.正戊烷

3.氯仿

4.纯化水

5.三氯乙酸

6.薄层色谱板（取硅胶G板）

7.深磁杯

8.玻璃棒（或玻璃片)

9.分离漏斗

实验过程：

1.取新鲜叶片，用纯化水冲洗干净后，将叶片用三氯乙酸溶液浸泡5-10分钟，轻轻搅拌，直至叶绿体脱离。

2.将叶绿体用分离漏斗过滤干净，加入少量的纯化水，制备得到含叶绿体的溶液。

3.将叶绿体溶液与醋酸丙酮乙酯混合，并加入一定量的正戊烷作为流动相，混合均匀后，取一片薄层色谱板，仔细涂抹硅胶G，然后放入深磁杯中。

4.将混合物用玻璃棒（或玻璃片)沿着涂有硅胶的色谱板上的一个角从上往下涂抹成一条线，使其长度大约为2.5cm左右，以保证在移液的过程中色素的有效分离。

5.将涂抹好的薄层色谱板置于流动相中，使其上升，当流动相向上液面到达约10mm处时，将其取出晾干，然后在烘箱中烘干5-10分钟，直至洁白无色，取出备用。

6.利用紫外线灯照射薄层色谱板，色素就会显示出来，然后用扫描器或者其它检测方法，对其中的不同颜色区域进行分离。

叶绿素的提取与分离

三、实验步骤
Ⅴ观察与记录观察滤纸条上出现了几条色素带，每条色素带的颜色。
四、注意事项
叶片要新鲜、颜色要深绿。研磨要充分、迅速。滤液收集后要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。滤液细线要细、直、含较多色素。滤线上的滤液细线不能浸入层析液。
五、实验结果
谢谢观赏
（2）将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
三、实验步骤
Ⅲ画滤液细线（1）用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细线。
（2）待滤液干后，再画两次。
三、实验步骤
Ⅳ分离绿叶中的色素将适量的层析液倒入烧杯中，将滤纸条（有滤液线的一端朝下）轻轻插入层析液中。
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三、实验步骤
Ⅰ提取绿叶中的色素（1）称取5g的绿叶，剪碎，放入研钵中。
（2）向研钵中加入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10ml无水乙醇，进行研磨。（3）将研磨液迅速倒入玻璃漏斗，进行过滤。将滤液收集到试管中。及时用棉塞将试管口塞严
三、实验步骤
Ⅱ制备滤纸条（1）将干燥的定性滤纸剪成略长于烧杯高的滤纸条。
植物叶绿体中色素的提取与分离

高中生物叶绿素提取

高中生物叶绿素的提取

高中生物叶绿素的提取主要涉及到以下几个步骤：

1. 将新鲜菠菜叶片洗净擦干，去掉叶柄及中间脉络，称取10克去掉中间脉络的叶片，剪碎置于研钵内，加入少许固体碳酸钠或碳酸钙和10毫升丙酮，迅速研磨成匀浆，再加15毫升丙酮充分研磨提取叶绿素。

2. 在玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤到已装有15毫升石油醚的分液漏斗中，再用少量丙酮冲洗叶片残渣和研钵，合并滤液。

3. 沿分液漏斗的壁小心加入30毫升蒸馏水，轻轻转动加入4 -8毫升饱和氯化钠水溶液，静止几分钟待分层清楚后，弃去下面的丙酮一水层。再加入30毫升蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残留的丙酮，弃去水层。共洗两次。将含色素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。

请注意，叶绿素的提取与分离需要一定的技巧和耐心，同时要注意实验安全。建议在专业人员的指导下进行。

叶绿素的提取和分离

(6) 盛放滤液的试管管口加棉塞防止乙醇挥发和色素氧化 (1) 滤纸预先干燥处理使层析液在滤纸上快速扩散分离 (2) 滤液细线要直、细、匀使分离出的色素带平整不重叠色 (3) 滤液细线干燥后再画－两次使分离出的色素带清晰分明素 (4) 滤液细线不触及层析液防止色素直接溶解到层析液中
易错警示！
过程 (1) (2) 提 (3) 取色 (4) 素 (5)
1、实验中的注意事项及操作目的
操作目的使滤液中色素含量高溶解色素研磨充分保护色素，防止叶绿素被破坏防止乙醇挥发，充分溶解色素
注意事项选新鲜绿色的叶片研磨时加无水乙醇加少量SiO2 加少量CaCO3 迅速、充分研磨
四、色素种类及吸收光谱：
色素种类吸收光吸收光谱
叶绿素叶绿素a 吸收蓝紫（蓝绿色）（含量光和红约占3/4）叶绿素b （橙）光（黄绿色）类胡萝胡萝卜素（橙黄色）吸收蓝卜素紫光（含量叶黄素约占1/4）（黄色）
五、叶绿体色素的分布和功能 1、分布：叶绿体的类囊体薄膜上。 2、功能：吸收、传递光能（四种色素）、转化光能（只有少量特殊状态的叶绿素a）
一、实验原理：
试剂色素提取原理绿叶中的色素溶于有机溶剂无水乙醇无水乙醇，而不溶于水。
色素分离
层析液
各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸条上扩散得快，反之则慢。

叶绿素的提取和分离

实验名称：叶绿素的提取和分离

一、实验目的

（1）掌握叶绿素提取的方法。

（2）了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作方法。

（3）了解叶绿体中所含色素种类及其在滤纸层析上的分布情况。

二、实验器材

95％乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油，量筒，滤纸，大培养皿，小培养皿，长滴管，剪刀。

三、实验过程

（1）提取色素

将深绿色的植物叶剪碎放入研钵中。放入少量的SiO2 和CaCO3再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。

（2）制备滤纸条

将干燥的定性滤纸剪成稍小于试管长与直径的滤纸条，将一端减去两角，并在距这一端1厘米处用铅笔画一条细线。

（3）画滤液细线

用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀划出一条细线。干燥后，重复一两次。（4）色素分离

取适量层析液倒入烧杯中，将滤纸条轻插入层析液中（滤液细线不能触及层析液，以防止色素溶解于层析液中而无法分离）,用培养皿盖住（防止层析液挥发）。（5）观察与记录

四、实验现象

五、实验结论

绿叶中有一种细胞器叫叶绿体，植物通过叶绿体进行光合作用，把光能、二氧化碳、水转化成化学能。叶绿素分布在叶绿体的类囊体薄膜上。叶绿素 a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取

经过色素分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶绿素占总量3/4。叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。类胡萝卜素占总量1/4。

叶绿素的提取和分离实验

叶
绿
离实验
素的提取
与
分
捕获光能的色素
绿叶中会有哪些种类的色素呢它们分别是什么颜色的？各种色素在绿叶的含量相同吗？
实验：绿叶中色素的提取与分离
实验材料和用具 1)材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片) ; (2)用具：无水乙醇层析液，二氧化硅，碳酸钙；干燥的定性滤纸，烧杯(100ml)，研钵，小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺，量筒(10ml)，天平
(5)色素分离：滤液细线不要触及层析液，否则滤液细线中的色素分子将溶解到层析液中，滤纸条上得不到色素带。
(2)提取色素：研磨要迅速、充分，且加入几种物质（注意 SiO2和CaCO3的量要成比例，以保证提取较多的色素和色素浓度适宜。
(3)制备滤纸条：剪去两角，以保证色素在滤纸条上扩散均匀、整齐，便于观察实验结果，否则，会形成弧形色素带。
4)画滤液细线：用力要均匀快慢要适中滤液细线要细、直，且干燥后重复画一两次，使滤液细线既有较多的色素，又使各色素扩散的起点相同。
1cm
3．画滤液细线
用毛细吸管吸取少量滤液沿铅笔线均匀画出一条细、齐、直的滤液细线待干燥后重复2-3次。
滤液细线
1cm
４．分离色素
将滤纸条浸入层析液中注意滤液细线不能浸入层析液中
层析液
滤液细线
重点三：实验结果（现象：