实验_叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离一、实验过程1、提取绿色叶片中的色素将除去叶柄和粗叶脉的5g 左右新鲜绿色叶片（菠菜叶或白菜叶、女贞叶），剪碎，放在研钵中，加入少许二氧化硅和碳酸钙，进行充分的研磨，当研磨成糊状时，再加入5-6ml 丙酮，用杵棒迅速搅动后，静止3-5min，就可看到丙酮提取液为深绿色，再将澄清的提取液直接收集到有色的小广口瓶中（不经过滤）。
丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。
在进行实验操作时尽量少吸入丙酮，搅动后静止时，用纸或塑料薄膜盖在研钵上。
因为叶绿体中的各种色素都是脂类化合物，不溶于水，只溶于酒精、乙烷、丙酮、石油醚等有机溶剂中，且用丙酮的效果较好，加入丙酮就是为了快速提取色素。
又因丙酮的化学性质不稳定，极易挥发，所以必须在充分的研磨后加入，而不在研磨前或研磨中加入。
在实验过程中，发现在研钵中加入2ml 丙酮，数量不足，色素提取液量不多，如果再经脱脂棉过滤，滤液几乎全被吸走，提取色素困难，所以改成加入丙酮5-6ml。
将色素收集到有色的小广口瓶中，目的是避免叶绿体中的色素，在接触空气或光照下遭到破坏。
2、制备滤纸条取一张预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成8-9cm 长，1cm 宽的滤纸条，再将滤纸条的一端对折剪去两角。
3、画滤液细线用牙签（或用钢笔尖、六号注射针头等）代替毛细吸管，蘸取有色小广口瓶中滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，划的线条越细越齐（直），而且待滤液干燥后，继续重复画4～5 遍，实验效果越好。
4、叶绿体中的色素分离将4ml 层析液倒入100ml 烧杯中，再将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微倾斜靠着烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯，滤纸上的滤液细线要与层析液离开一定的距离，即层析液不能没及滤纸条上的滤液细线。
5、实验结果的观察层析几分钟以后（约4～5min），滤纸条上便清楚地呈现出四条色素带，从上而下依次是胡萝卜素（橙黄色），叶黄素（黄色），叶绿素a（蓝绿色），叶绿素b（黄绿色）。
叶绿素的提取和分离
色素提取 色素分离
试剂 无水乙醇
层析液
原理
绿叶中的色素溶于有机溶剂 无水乙醇,而不溶于水。
各种色素在层析液中的溶解 度不同,溶解度高的随层析 液在滤纸条上扩散得快,反 之则慢。
层析液：20份石油醚,2份丙酮和1份苯混合而成,93 号汽油也可做层析液用
二、实验步骤：
三、实验结果：
四、色素种类及吸收光谱：
2、绿叶中色素提取分离异常现象分析:
1 收集到的滤液绿色过浅的原因分析: ①未加石英砂 二氧化硅 ,研磨不充分. ②使用放置数天的菠菜叶,滤液色素 叶绿素太少 . ③一次加入大量的无水乙醇,提取浓度太低 正确做 法:分次加入少量无水乙醇 。 ④未加碳酸钙或者加入过少,叶绿素被破坏。 2 滤纸条色素带重叠 ①滤液细线不直 ②滤液细线过粗 3 滤纸条无色素带： ①忘记画滤液细线 ②滤液细线接触到层析液,且时间较长,色素全部溶 解到层析液中。
经典高考题 图中①代表新鲜菠菜叶的光合色素纸层析
结果,则图②所示结果最有可能来自 A．水培的洋葱叶
。
D
B．生长的柳树幼叶
C．培养的衣藻
D．秋冬的银杏落叶
解析 新鲜菠菜叶中的光合色素种类齐全、含量丰富、完整,据 图①可知,滤纸上的四条色素带完整,从上到下依次为胡萝卜素、 叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。图②滤纸上的色素带不完整,只有 胡萝卜素、叶黄素。秋冬的银杏落叶呈黄色 或橙黄色 ,这是由于 低温破坏了叶绿素所致,因此叶片中几乎不含叶绿素。其他选项 中的材料中都含有四种色素。 答案 D
下 ,与正常叶片相比,实验结果是 A．光吸收差异显著,色素带缺第2条
。
B
B．光吸收差异不显著,色素带缺第2条
C．光吸收差异显著,色素带缺第3条
实验五 叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定
• 3、铜代反应：取上述色素提取液加入试管，逐滴加入 浓盐酸，直至溶液呈现褐色，此时叶绿素分子已经遭到 破坏，称为去镁叶绿素，然后加入醋酸铜结晶少许，慢 慢加入溶液，直至出现鲜亮的绿色，此时即形成了铜代 叶绿素。
实验五 叶绿体色素的提取、分 离及理化性质的鉴定
• 一、叶绿体色素的提取与分离
• 1、称取新鲜叶片2 g，放入研钵总加入丙酮5 ml， 少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮10 ml， 以漏一个圆洞，把新华滤纸 剪成20 cm的长条卷成圆柱，一端多次滴上色素提取 液，插入圆形滤纸中间孔中，上面与圆形滤纸齐平
• 五、结果与讨论
• •分析每个实验的结果，注意事项和原因。 • •六、作业 • •1、记录每个实验的结果。 • •2、为什么提取叶绿体色素要加入少许碳
酸钙和石英砂？
• 3、在培养皿中加入展层用的四氯化碳，把上部做 成的滤纸下的含色素圆柱下端浸入展层液，盖上培 养皿上盖，开始展层。等展层液扩散到培养皿边缘 时，取出滤纸，观察同心圆色素带，做好记录。
• 二、叶绿体色素的理化性质 • 1、叶绿体的荧光现象：取上述色素提取液少许于试管
中，分别观察反射光和透射光，比较观察到的颜色不同 并分析原因。
• 4、黄色素与绿色素的分离：取上述色素丙酮提取液10 ml，加入盛有20 ml乙醚的分液漏斗，并沿漏斗边缘加 入30 ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液 分为两层。色素已经全部转入上层乙醚总，弃去丙酮和 水，再加入5 ml30%KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗， 静置10分钟，再加入蒸馏水10 ml，摇动后静置分离， 得到黄色素层和绿色素层，分别保留，分析实验结果和 原因。
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离
叶绿素是植物和藻类中存在的一种绿色色素，它的提取和分离可以通过以下步骤进行：
1. 鲜叶采集：选择新鲜健康的叶子样品，并尽量避免阳光暴晒和长时间储存。
2. 研磨：将采集的叶子样品用搅拌机或者研钵研磨成细碎的绿色浆状物。
3. 植物组织破碎：将研磨好的样品浆液通过高速离心或搅拌法破碎细胞结构，并释放叶绿素。
4. 提取：将破碎的植物组织样品置于溶剂中，通常可以选择乙醇、丙酮、二甲亚砜或乙酸乙酯等有机溶剂。
在室温下浸泡一段时间，使叶绿素溶解到有机溶剂中。
5. 离心：将溶解了叶绿素的有机溶剂进行低速离心，以分
离溶剂和植物残渣。
6. 过滤：将离心后得到的溶剂进行滤过，以去除悬浮的杂质。
7. 浓缩：将过滤后的溶剂用恒温浓缩器或蒸发器进行浓缩，使其体积减小。
8. 纯化：对浓缩后的叶绿素溶液进行进一步纯化，可以使
用柱层析、薄层层析或高效液相层析等技术，以分离和纯
化叶绿素。
9. 干燥：将纯化后的叶绿素溶液进行干燥，可以通过喷雾
干燥、真空干燥或冷冻干燥等方法。
10. 得到叶绿素提取物：经过上述步骤后，叶绿素提取物便可以得到，并可以用于进一步的分析和应用。
需要注意的是，以上步骤仅为提取和分离叶绿素的一种常用方法，具体操作步骤和参数可根据实际情况进行调整。
同时，对于更为复杂的样品和目的，可能需要选择其他提取和分离技术进行操作。
植物生理学实验 叶绿体色素的提取、分离
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或者 95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水 ＝4.5∶4.5∶1的混合液来提 取叶片中的叶绿素，用于测定 叶绿素含量。 之所以要用含 有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 研磨法提取 光合色素
制作绿色标本方法：用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶 绿素
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸 （直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
2. 叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。 （2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
0.1g叶+10ml混合液浸提
实验六 叶绿素的提取、分离
叶绿素的提取、分离一、实验目的1.掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。
2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。
二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。
2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。
毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等剪纸形状滤液基线95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。
（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。
分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取：称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。
准备过滤纸条：将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
画滤细线：用毛细管吸取少量滤液，并沿铅笔线均匀划出一条细线，待滤液干后再画1~2次。
叶绿素分离：在试管中倒入适量层析液。
得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。
叶绿素提取注意事项：
准备滤纸时，要将滤纸的一端剪去两角，这样可使色素扩散到滤纸上，以便于观察实验结果。
过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用，若用其过滤，会导致收集到的滤液色素含量少，使实验效果不明显或失败。
叶绿体色素的提取和分离
1、进一步理解叶绿体色素的提取、分离的原理、 方法；
2、了解叶绿素的光学特性在光合作用中的意义；
二、实验原理
叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要 物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。 它们与类囊体膜相结合成为色素蛋白复合体。这两类色素 都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机 溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附 剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混 合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的 分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各 种色素分开。
② 取1支装有叶绿体色素乙醇提取液的试管和1支装有水研磨 叶片匀浆的试管，放在直射光下，另外两支放到暗处， 40min后对比观察颜色有何变化，解释其原因。
③ 另取本实验中用圆形滤纸层析分离成的色谱一张，通过圆 心裁成两半，一半放在直射日光下，另一半放在暗中，半 小时后比较两张色谱上的四种色素的颜色各有何变化。
四、注意事项
1、叶绿体色素对光、温度、氧气环境、酸碱及其它氧化剂 都非常敏感。色素的提取和分析一般都要在避光、低温及 无酸碱等干扰的情况下进行。乙醚使用前应重蒸除去过氧 化物。
2、使用低沸点易挥发有机溶剂要注意实验室安全。实验 室要保持良好的通风条件，不得靠近明火操作。
3、提取液不宜长期存放，必要时应抽干冲氮避光低温保 存。
(2) H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用
① 取2支试管，第一支试管加叶绿体色素提取液2mL，作为 对照。第二支试管中加叶绿体色素提取液5mL，再加入数 滴50％醋酸，摇匀，观察溶液的颜色变化。
② 当溶液变褐色后，倒出一半于另一试管中，加入醋酸酮粉 末少许，于酒精灯上微微加热，观察溶液的颜色变化，与 未加醋酸铜的一半相比较。
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离
叶绿素是一种含有镁离子的绿色色素，广泛存在于植物、藻类和一些细菌中，是光合作用过程中吸收光能的重要物质。
叶绿素的提取和分离通常可以通过以下步骤实现：
1. 采集样品：首先需要采集含有叶绿素的植物、藻类或细菌样品，较好的样品应该是新鲜的、健康的、并且没有被过度受损。
2. 破碎细胞壁：将采集到的样品经过冷冻破碎或高速离心等处理，将细胞壁破碎并释放出细胞内的叶绿素。
3. 溶解蛋白质：用生理盐水或其他适当的缓冲液将样品中的细胞膜、蛋白质等溶解掉，并且使叶绿素以游离形式存在于溶液中。
4. 溶剂萃取：利用溶剂（如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等）对上述溶液中的叶绿素进行萃取，以分离出含有叶绿素的有机相。
5. 色谱分离：将通过溶剂萃取得到的含有叶绿素的色素混合物进行色谱分离，以分离出不同类型的叶绿素，并且去除杂质，获得纯度较高的叶绿素。
总之，叶绿素的提取和分离需要依次实施多个步骤，选择适当的解剖技术和实验方案可提高叶绿素的分离纯度和产量。
叶绿素的提取与分离
叶绿素的提取与分离
叶绿素是一种绿色的色素，存在于植物、藻类和一些细菌中。
叶绿素
的提取与分离是科学研究中常用的方法之一，可以用于制备药品、化妆品、食品添加剂等。
叶绿素的提取与分离通常包括以下步骤：
1.样品制备：将植物、藻类或细菌等材料研磨或破碎，使叶绿素暴露
在表面。
2.提取叶绿素：将样品放入提取液中，如乙醇、乙醚、丙酮、二甲基
亚砜等，将叶绿素溶解于提取液中。
3.分离叶绿素：通过色谱、凝胶电泳等分离方法分离叶绿素。
4.纯化叶绿素：将分离得到的叶绿素进一步纯化并测定其光谱特性，
以确保其纯度和质量。
除了以上常规方法，近年来一些新的叶绿素提取技术也被开发，如超
声波提取、微波提取、超临界流体提取等，这些技术可以提高叶绿素的提
取效率和纯度。
叶绿素的提取
叶绿素的提取与分离方法:1 纸层析法2 薄层色谱法3柱色谱法综合各方因素，经济，简便操作，易于获取等方面，考虑到实验无需过于精确，故此处采用第一种方法，以下是其详细说明：提取: (1) 取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片(2g左右)，洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入研。
(2) 研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10-15ml 95%乙醇，离心35min，提取上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。
(3) 如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。
取新鲜叶片(以菠菜叶最好)，先用105℃杀青，再在80℃下烘干，研成粉末，密闭储存。
用时称叶粉2g放入小烧杯中，加95%乙醇20-30ml 浸提，并随时搅动。
待乙醇呈深绿色时，滤出浸提液备用。
分离: (1) 取圆形定性滤纸一张(直径11cm)，将其剪成滤纸条(9cm×3cm)，用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的长度方向涂在纸条的一边(距边约1cm)，使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次。
(2) 在层析缸中加入适量的推动剂，将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂中。
迅速盖好层析缸盖。
此时，推动剂借毛细管引力顺滤纸条向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可看到各种色素的条带。
(3) 当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素:叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
用铅笔标出各种色素的位置和名称。
各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快:胡萝卜素次之:叶黄素次之:叶绿素A 最慢:叶绿素B 最宽的是叶绿素A 最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近另外，绿叶中的色素中叶绿素含量约占3/4 类胡萝卜素含量约占1/4 光照中，红光有利于淀粉合成，蓝紫光有利于蛋白质的合成以下是实验改进方面要求：1 实验材料的改进：应根据不同地区不用气候选用不同叶片，但切记一点不用含蜡质叶片2：提取液的改进：丙酮易挥发且有毒，可选用无水乙醇替代3：层析液改进：一般教材给出两种配方：93号汽油或者20份石油醚+2份丙酮+1份苯，经研究发现以下四种方法较好：1：CCI4+少许NASO42: 95%酒精3：9份95%酒精+1份苯4: 20份汽油+2份丙酮+2份石油醚+1份苯此处有一疑问：研磨时加碳酸钙是为了保护叶绿素不分解即叶绿素分子骨架中镁离子不被有机酸给置换出来，此处为何又要除镁离子呢？诸位可好生想下！除叶绿素中镁离子的方法1:选取黄色的叶子，此类树叶缺镁离子，因为镁离子可从老叶自由移动至新叶，故老叶无，即无须耗费精力去除了2:加酸，使所捣碎研磨液中含镁络合物吡啶环中镁离子被氢离子取代，3:加醋酸铜，铜离子取代镁离子，同上方法3:叶子未捣碎前浸入硫酸铜溶液使其染为绿色，铜代叶绿素。
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素是位于植物叶绿体中的一类有机化合物，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
提取和分离叶绿体色素的方法如下：
1. 手工研磨法：将植物叶片取出后，加入适量的减水醇（如乙醇或甲醇），用研钵或机械研磨器搅拌研磨，使细胞破碎释放叶绿体色素。
然后通过离心将悬液离心分离出叶绿体色素。
2. 酒精沉淀法：将植物叶片切碎后加入适量的酒精溶液，用撇去悬浮物，然后再用滤纸滤除酒精中的杂质。
过滤后的溶液可以进行酒精沉淀，即加入适量的酒精悬浮叶绿体色素，并通过离心分离出沉淀。
3. 层析法：将植物叶片经过研磨和过滤后得到的色素溶液，可以通过色谱柱层析进行分离。
常用的色谱柱包括硅胶柱、纸层析柱和高效液相色谱柱等。
通过向色谱柱中加入适当的溶剂系统，可以将叶绿体色素按照其亲水性和亲油性进行分离。
4. 液-液萃取法：将植物叶片研磨并与适量的有机溶剂（如二氯甲烷、苯或正己烷）混合，通过摇晃、振荡或搅拌等方法，使叶绿体色素在有机相和水相之间分配。
随后，分离有机相并蒸干，即可得到叶绿体色素。
这些方法可以根据实验需求和设备条件选择使用，提取和分离叶绿体色素可以用于进一步的分析和研究。
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离摘要叶绿素是植物细胞特有的一种绿色色素，具有重要的生物学功能。
本文将介绍叶绿素的提取和分离的方法和技术，并探讨其在生物科学研究和工业应用中的重要性。
引言叶绿素是植物细胞中最常见的色素，它能够吸收光能，并将其转化为化学能以供光合作用使用。
叶绿素分子由两个部分组成，一个是具有类似横带结构的色团，另一个是镁离子离子或其他离子。
叶绿素的提取和分离是一项重要的实验技术，它可以帮助我们研究叶绿素的结构和功能，也可以用于生物科学研究和工业应用中。
叶绿素的提取方法叶绿素的提取可以使用多种方法，包括有机溶剂提取、超声波提取和减压蒸馏提取等。
以下是其中一种常见的有机溶剂提取方法的步骤：1.准备植物材料：选择富含叶绿素的植物材料，如菠菜、花草等。
鲜叶可以直接使用，而干燥的叶子需要先用适当的溶剂浸泡一段时间。
2.研磨样品：将植物材料研磨成细粉。
可以使用研钵和杵、搅拌器或者高速球磨仪等设备进行研磨。
3.溶剂提取：将研磨好的样品与适当的有机溶剂混合，如乙酸乙酯、丙酮等，使叶绿素溶解在溶剂中。
可将样品与溶剂放在离心管中，使用振荡器或摇床进行震荡，促进叶绿素的溶解。
4.分离溶剂：离心样品，将溶剂层分离。
使用离心机设定合适的转速和时间，使叶绿素溶液与溶剂分离。
5.提取叶绿素：将分离得到的叶绿素溶液转移至干燥的容器中，以便溶剂挥发。
可以使用旋转蒸发仪辅助溶剂的挥发过程。
6.纯化叶绿素：对提取得到的叶绿素溶液进行纯化处理，常见的方法包括使用柱层析、高效液相色谱或制备薄层色谱等技术。
叶绿素的分离方法叶绿素的分离可以使用多种方法，包括色谱技术、电泳技术和质谱技术等。
1.色谱技术：色谱技术是一种常用的叶绿素分离方法，常见的色谱技术包括薄层色谱、柱层析等。
薄层色谱是一种简单、快速的分离方法，通过将样品沿薄层板上的液体流动进行分离。
柱层析是一种较为复杂的色谱技术，可以使用不同的填料和溶剂体系进行叶绿素的分离。
2.电泳技术：电泳技术是一种利用电场将目标物质分离的方法，可以分为凝胶电泳和毛细管电泳等。
【人教版】高三上册生物基础实验：实验7 叶绿体色素的提取和分离(含解析)
——叶绿体色素的提取和分离原理、色素的种类和吸收光谱、试剂的作用和实验成败关键前情提要：关键词：色素提取和分离的原理、色素的种类、试剂的作用难度系数：★★★重要程度：★★★★基础回顾：考点一、实验的原理（1）实验：绿叶中色素的提取和分离（纸层析法）①可以利用无水乙醇提取绿叶中的色素，在研磨时还应加入少许二氧化硅和碳酸钙，其中前者有助于研磨充分，后者可防止在研磨中色素被破坏。
②分离的原理是利用色素在层析液中的溶解度不同，溶解度越大的在滤纸上扩散的快，反之则慢。
考点二、色素的种类和吸收光谱1．提取绿叶中色素的关键（1）叶绿素不稳定，易被破坏，因此研磨要迅速、充分以保证提取较多的色素。
（2）滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以防止滤液挥发。
（3）称取绿叶的质量和加入无水乙醇的体积要适当，以保证提取液的浓度。
2．分离绿叶中色素的关键（1）滤液细线不仅要细、直，而且要含有较多的色素，因此要在滤液干后，重复画1～2次。
（2）滤纸上的滤液细线不能触及（或没入）层析液，否则会使滤液中的色素溶解于层析液中，滤纸条上得不到色素带，使实验失败。
3． 实验流程提取色素⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧取材：称取5 g 绿色叶片↓研磨：加少许SiO 2、CaCO 3和10 mL 无水乙醇↓过滤：漏斗基部放一块单层尼龙布 ↓收集：收集滤液，试管口用棉塞塞严制备滤纸条⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧干燥滤纸↓剪滤纸条：将滤纸剪成长与宽略小于试管长和宽的滤纸条，并在一端剪去两角↓铅笔画线：在距剪去两个角一端1 cm 处用 铅笔画一条细的横线画滤液细线⎩⎪⎨⎪⎧用毛细吸管吸取少量滤液↓画线：沿铅笔线画出一条细线↓待滤液干后，重复画一两次分离绿叶中的色素⎩⎪⎨⎪⎧将3 mL 层析液倒入试管中，装置如图所示插入滤纸条有滤液细线的一端朝下，随后用软木塞塞紧试管口。
注意：不能让滤纸条上的滤液细线触到层析液4、由操作要求探究操作目的5（1）收集到的滤液绿色过浅的原因分析 ①未加石英砂（二氧化硅），研磨不充分。
叶绿素的提取和分离 (2)
叶绿素的提取和分离引言叶绿素是植物中最常见的色素之一，它在光合作用中起着关键的作用。
叶绿素不仅使植物能够吸收和利用太阳光能，还能进行光合作用，将二氧化碳转化为氧气和有机物质。
因此，研究叶绿素的提取和分离对于我们更好地了解植物的光合作用过程以及使用叶绿素在食品、医药和化妆品等领域具有重要的意义。
本文将介绍叶绿素的提取和分离的方法和步骤，并探讨其中的优缺点及应用领域。
提取叶绿素的方法乙醇提取法乙醇提取法是最常用的叶绿素提取方法之一。
其步骤如下：1.取适量的植物组织，如叶片或茎部。
2.将植物组织切碎，并加入乙醇溶液中，浸泡一段时间。
3.将浸泡的植物组织过滤，收集滤液。
4.使用离心机进行离心，以分离叶绿素和植物细胞残渣。
5.取得上清液，其中就包含了叶绿素。
乙醇提取法的优点是简单易行，提取效率较高。
然而，乙醇提取法有时会导致叶绿素的破坏或氧化，因此需要在低温和避光条件下操作。
液液萃取法液液萃取法也是一种常用的叶绿素提取方法。
其步骤如下：1.取适量的植物组织，如叶片或茎部。
2.将植物组织切碎，并加入有机溶剂（如丙酮或二氯甲烷）中，浸泡一段时间。
3.摇匀混合物，使叶绿素溶解于有机溶剂中。
4.进行液液分离，将叶绿素溶液和有机溶剂分开。
通常使用分液漏斗进行分离。
5.取得叶绿素溶液，并将有机溶剂蒸发，得到纯净的叶绿素。
液液萃取法的优点是提取纯度较高，并且提取过程中对叶绿素的保护较好。
然而，该方法需要使用有机溶剂，操作过程相对较为繁琐。
薄层层析法薄层层析法是一种常用的叶绿素分离方法。
其步骤如下：1.将提取得到的叶绿素溶液加入到薄层层析板上。
2.将薄层层析板放入溶液中，让溶液沿着薄层层析板上升。
3.叶绿素分子在溶液上升过程中会出现不同的颜色带，表示叶绿素的不同类型。
4.根据颜色带的出现位置和疏水性质，可以将叶绿素分离和鉴定。
薄层层析法是一种相对快速和简单的叶绿素分离方法。
它可以同时分离多种类型的叶绿素，并对其进行鉴定。
[详解]叶绿素分离试验
![[详解]叶绿素分离试验](https://img.taocdn.com/s3/m/999da949f342336c1eb91a37f111f18583d00ca1.png)
[详解]叶绿素分离试验一、叶绿体中色素的提取和分离说明1、取材时要选用新鲜的颜色较深的叶片，以便使滤液中含较多的色素2、研磨时加入二氧化硅的目的是为了研磨的充分，更有效的破坏细胞结构;加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。
因为叶绿素分子结构中含有一个镁原子，当细胞破裂时，细胞液内有机酸的氢可以取代镁原子而成为褐色的去镁叶绿素，碳酸钙可中和有机酸以防止去镁反应的发生3、研磨时要迅速、充分。
一是因为丙酮容易挥发;二是为了使叶绿体完全破裂，从而能提取出较多的色素;三是叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。
4、制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角。
这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀，便于观察实验结果。
5、画滤液细线时，一定要细且直。
这样可以防止色素带重叠，使色素分子均匀分布在一条直线上，做到扩散起点一致。
重复划2,3次，是为了增加滤液细线上的色素分子数量，使实验效果更加明显。
6、分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解于层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
7、识记实验结果的色素带分布及宽窄(四种四素扩散速度的先后顺序为:胡萝卜素,叶黄素,叶绿素a,叶绿素b)二、习题一、选择题1、叶绿素不溶于( )A(水 B(石油醚 C(丙酮 D(苯2、下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是( )A(提取高等植物叶绿体中的色素 B(用纸层析法分离色素C(了解各种色素的吸收光谱 D(验证叶绿体中所含色素的种类3、通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，自上而下依次为 ( )A(胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿紊b B(胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素C(叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素 D(叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 4、在进行叶绿素提取和分离的实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是( )A(滤纸上几种色素会扩散不均影响实验效果 B(滤纸上的滤液细线会变粗而使色素太分散C(色素会溶解在层析液中，使实验结果不明显 D(滤纸上的几种色素会混合起来不分散5、对“叶绿体中色素的提取和分离”实验中，下列描述正确的是( )A(将5 g新鲜完整的菠菜叶，放入研钵中，加入丙酮、石英砂、CaCO以后，迅速研磨 3B(用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划2,3次C(把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散D(色素分子是有机物，不溶于水，所以研磨过程中加入丙酮是为了溶解色素6、在叶绿体中的色素提取和分离实验中，四种色素在滤纸条上扩散速度最快的和最慢的是( )A、胡萝卜素和叶绿素bB、胡萝卜素和叶绿素aB、叶黄素和叶绿素b D、叶黄素和叶绿素a7、装置甲是用来验证绿色植物在有光条件下释放氧气的装置，装置乙和丙是另外两个装置，通常可作为本实验的对照实验的装置( )A(乙和丙 B(乙C(丙 D(乙和丙都不是8、叶绿素体中的各种色素能够在滤纸上彼此分离的原因是( )A(色素提取液中的不同色素已经分层B(阳光的照射使各种色素能彼此分开C(各种色素随层析液在滤纸上扩散速度不同D(丙酮使色素溶解并分离的扩散速度不同9、下列生物实验:?制作洋葱根尖分生区装片时，用10,盐酸处理根尖;?将重组质粒导人大肠杆菌，先用氯化钙溶液处理大肠杆菌;?用胰蛋白酶处理动物组织，使细胞分散开来，进行细胞培养;?用纤维素酶和果胶酶处理白菜和甘蓝体细胞，进行体细胞杂交;?为了更充分提取叶绿体中的色素，在研磨叶片时，加入二氧化硅。
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二、实验步骤
提取叶绿体色素
取2-3片菠菜叶，撕去叶脉，尽量剪碎，放入研钵。
向研钵中放入少量石英砂和碳酸钙，加入一滴管无 水乙醇，边加无水乙醇边研磨，进行充分地研磨至匀浆状态。
在玻璃漏斗上放入单层纱布，将研磨液倒入漏斗， 漏斗下端放置培养皿，过滤制备得到滤液。
【注】
加石英砂是为了使研磨充分 加碳酸钙是为了防止叶绿体色素被破坏 加入CaCO3和石英砂的量均很少，无水乙醇的量不应太少
叶黄素（黄色） 类胡萝卜素
胡萝卜素（橙黄色）
二、叶绿体色素
选择吸收光能，传递和转化光能
叶绿素：主要吸收红橙光和蓝紫光 类胡萝卜素：主要吸收蓝紫光
一、实验原理
叶绿体色素易溶于无水乙醇等有机溶剂中，可以用无水 乙醇提取绿叶中的叶绿体色素。
纸层析法 不同的叶绿体色素随层析液在滤纸上扩散速度不同。
（不同的色素会在扩
植物进行光合作用的场所？
叶绿体
一、叶绿体
椭圆球形
外膜、内膜、 叶绿体基质、 基粒(由单层膜的类囊体垛叠构成)
一、叶绿体
①酶（光合作用有关） 光反应的酶—— 暗反应的酶——
②少量DNA和RNA
③色素
二、叶绿体色素
类囊体膜
色素
叶绿素a（蓝绿色） 叶绿素
叶绿素b （黄绿色）
画线
将干燥的定性滤纸制成如右图 所示，用铅笔划线（已准备好）。
用盖玻片蘸取少量滤液，沿铅笔线均匀 压出细线。待滤液干后，重复画线3-4次。
【注】
画滤液线时尽量画直、画细、画浓 每次画完，要等滤液干时再重复画，以防滤液扩散开使滤液
线过宽，影响结果
分离叶绿体色素
将4mL层析液倒入层析管中， 将画好线的滤纸条固定于右图装置中。
10min后，将滤纸条取出，风 干。观察色素带及其颜色，作好记录。
【注】
放滤液条时，要避免滤液细线浸没到层析液。不要让 滤纸条贴在层析管壁上。
层析液中一些成分易挥发，要避免开放在空气中。
滤液细线
一、实验结果
类胡萝卜素 （橙黄色）
1 /4
（黄色）
叶绿素
3 /4
(蓝绿色) （黄绿色）
可以看出： ❖ 色素扩散距离不同 ❖ 色素带宽度不同