培养基对兔骨髓间充质干细胞扩增与分化的影响
条件培养液对兔骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响
ｔ ｖ ｅ ｅｔ ｓｎａ ｄｕ ａｂ ｉ １ ｔ ｄｒ ｍｅｉ ｌｏ ｎ ｓ３ ａ ｄ ｌ ｍ（ ｍ）ａｄｉ ｔ ｒ ｅｃ —ｙｅｏｈｓｈｔ（ Ｐ１ ｍ ｌ， ｅａ ｎ ｅｐ ｓｎｅ ｆ ｇ ｃｒｐｏｐａ ＢＧ ， ｍ ｏ￣ ｄｘ． ｎｈ ｅ ｏＢ ］ ｅ ０
ｍｅｈｓｎ （ ｘ １ ｍｏ）ａｄａｃｒｉ ｃｄ ＡＡ，０ ｔ ／ Ｊ ．Ｃ ｌｍｏｐ ｏｏｙ， Ｐａｔｉ ｎ ｂｌｙ ｔａｏ ｅ Ｄｅ ０ ｎ １ ｎ ｏｂｅａｉ（ ｓ ５ Ｌ ｍ ） ｅｌ ｒｈｌｇ ＡＬ ｃ ｖｙａｄａ ｉｔ ｇ ｉｔ ｉ ｔ ｏｍ ｓ ｏａｅｎ Ｂ Ｐ）ｗ ｒ ｂｅｖｄａ ｄｄ ｔｒ ｎｄ Ｒｅａｔ ＡＬ ｅｉｉ ｎ Ｐ ｗ ｒ ｉｈ ｒ ｏｆｒ ｏｔ ｃｌｉ（ Ｇ ｅ ｅｅｏｓｒｅ ｎ ｅ ｍｉｅ ｅ ｓ／ ｓ： Ｐ ａｔ ｔ ａｄＢＧ ｅｅｈｇ￣ ｖｙ
条件培养液对兔骨髓基质细 胞 向成骨细胞分化 的影响
武和明 ， 邢树 忠， 张晓曼
（ 南京 医科大学 口腔 医学 院口腔颌 面外科 ， 江苏南京 ２ １ ２ ） １０ ９ ３
摘 要： 目的 ： 观察条件培养液对兔骨髓基质 细胞向成 骨细胞分化 的影响 。 方法： 离兔骨髓 ， 养骨髓基 质细 分 培
Ａｂｔａ ｔ Ｏｂｅｔｖｓ：ｏｓ ｄ－ｈ ｓｅｂａｔ ｉｅｅ ｔｔ ｎａ ｉｔ ｆ ａｂｔｂＲ ＴＷ ｒｍ ｌｃｌ ｓｒ ｃ ： ｊｃｉｅ Ｔ ｔ ｙｔｅｏｔ ｌｓｉ ｄｆ ｒｎｉｉ ｂｌｙｏ ｂ ｉｏ ｅｍ￣ Ｏ ｓｏ ａ ｌ ｕ ｏ ｃ ａｏ ｉ ｒ ｔ ｅ ｓ
ｃ ｌ ｒｄ ｉ ｘ ｅ ｍ ｎａ ｕｔ ｒ ｄｕ Ｍ ｅｈ ｄ ： ｏ ｅ ｍａｒ ｗ ｓｒｍａ ｃ ｌ ｓｌ ｄ ｆ ｍ ｂ ｉ ｂ Ｒ ｕｔ ｅ ｎ ｅ ｐ ｒ ｅ ｔｌ ｌ ｕ ｅｍｅ ｉｍ． ｕ ｉ ｃ ｔｏ ｓ Ｂ ｎ ｒｏ ｔ ｕ ｌ ｅ ｌ ｉ ￣ｅ ｒ ｒ ｂＩ ｓｅ ｏ ａ ｅ ｏ
骨髓间充质干细胞膜片的体外构建及成骨分化实验研究
骨髓间充质干细胞膜片的体外构建及成骨分化实验研究目的：探索骨髓间充质干细胞膜片的体外构建简便方法，并评估其成骨分化潜能。
方法：将兔骨髓间充质干细胞高密度接种，在成骨诱导条件下连续培养形成细胞膜片。
通过组织学、碱性磷酸酶活性定量检测、透射电镜和扫描电镜等方法，检测细胞膜片的特性。
结果：高密度连续培养及成骨诱导后形成骨髓间充质干细胞膜片。
HE染色证实膜片是一种由多层细胞和细胞外基质组成的聚集体；茜素红染色呈阳性；碱性磷酸酶定量分析含量较高；扫描电镜及透射电镜检查均见基质中大量的矿化结节聚集。
结论：通过体外简单的连续培养和成骨诱导后，可形成具有良好成骨能力的骨髓间充质干细胞膜片。
标签：间充质干细胞；细胞膜片；成骨分化组织工程技术的出现和兴起标志着再造时代的来临，传统的基于细胞的骨组织工程，是利用大量的种子细胞种植在支架材料上，通过活性因子等诱导细胞分化成骨[1]。
但研究发现该方法存在一些缺点，如细胞利用率低、附着效率差；细胞在支架材料上分布不均；常用的蛋白酶消化收集细胞的方法，会改变细胞的表型和生化成分。
并且，培养过程中细胞分泌的细胞外基质及形成的细胞间连接蛋白也常被破坏[2]。
目前这些问题一直未能圆满解决，已成为限制骨组织工程技术应用于临床的瓶颈。
1993年日本学者Okano等[3]首先报道将聚N-异丙基丙烯酰胺应用到细胞培养上，创新性地发明了细胞膜片技术。
应用特殊的外源性温敏聚合物材料提取完整的细胞聚集体，用于组织工程构建。
该技术借助细胞间的连接以片状形式脱附，保留了基质中细胞与细胞间连接、细胞表面蛋白等，细胞生物学行为和功能得以维持[4]。
在本实验中，笔者探讨体外构建骨髓间充质细胞膜片的培养方法并予以改进，试图进一步缩短膜片培养时间，同时增加膜片厚度，以利于构建组织工程骨。
1 材料1.1 实验动物：3月龄成年新西兰大白兔，体重2.5～3.0kg，由乌鲁木齐总医院实验动物中心提供。
1.2 实验仪器设备：倒置相差显微镜及照相系统（Olympas，日本）；酶联免疫检测仪（BIO-RAD680，美国）；JEM-2000EX透射电镜（JEOM Ltd，日本）；S-3400N 扫描电镜（Hitachi，日本）；X-射线能谱分析仪（Oxford，Link ISIS，英国）。
兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、成骨诱导与鉴定
摘要 ： 目的 建 立 一 种 兔 骨 髓 间 充 质干 细 （ Ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ １ ． ＭＳ Ｃ ） 体 外 分 离培 养 、 扩增 及 鉴 定 的 方 法 。方 法 采 用全 骨 髓 贴 壁 培 养 法分 离
原代和传代培 养的 ｒ Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 具 有 活跃 的增 殖 能 力 ， 成骨成脂诱导后， 碱 性磷 酸 酶 染 色 、 茜素 红 染 色 、 ｖ ｏ ｎ Ｋｏ ｓ ｓ ａ法 染 色 、Ｉ型胶 原 免 疫 细 胞 化 学
检 测 和 油 红 。 染 色均 呈 阳性 。成 骨诱 导 电镜 检 测 呈 阳 性 。结 论 全 骨 髓 贴 壁培 养 法操 作 相 对 简单 ， 可大量分离、 纯化 、 扩 增 骨 髓 间 充 质 干 细胞 ，
Ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｓ ＢＭＳ Ｃｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ，ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｐ ｕ ｒ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ ｗ ｈｏ ｌ ｅ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ａ ｄ ｈ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ，Ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ ｗａ ｓ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ Ｐ ｈ ｓｅ ａ — ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｃ ｕ ｖｅ ｒ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｄ ｒ ａ ｗｎ ａ ｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｌ ｙ．Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｅ ｉ ｎ ｔ ｏ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｂ ｌ ｓｔ ａ ｓ ａ ｎ ｄ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ Ａｌ ｋ ａ ｌ ｉ ｎ ｅ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｓｅ ａ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｔ ｉ ｍｅ ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ｓ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ＢＭＳ Ｃｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｎ ｄ ｌ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ — ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ， ｓ ｈ ｏ ｗｉ ｎ ｇ ｒ ａ ｄ ｉ ａ ｌ ｃ ｏ ｌ Байду номын сангаас ｎ ｙ ａ ｒ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ．Ｔ ｈ ｅ ｒｏ ｇ ｔｈ ｗ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｎ ｔ ￣ ； ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｒｏ ｇ ｗｔ ｈ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｉｓ ｒ ｔ ｉ ｃ ｓ ａ ｎ ｄ ｇ ｏ ｏ ｄ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｎ ｏ ｒ ｍａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．Ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗｉ ｎ ｇ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ｏ ｉ ｌ ｒ ｅ ｄ Ｏ
中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展
中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展作者：方健康周轶平李玛琳来源：《中国中药杂志》2014年第15期[摘要] 骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）是一类来源于骨髓的多能干细胞，不仅能够提供造血支持，且具有自我更新、高度增殖以及多向分化的潜能，是目前干细胞研究的热点。
近年来，科研人员就中药对BMSCs的影响开展了一系列的研究，发现有的中药能够促进BMSCs的增殖，有的则能够抑制其凋亡，还有的能够诱导其向成骨细胞、软骨细胞等多个方向分化。
其中，部分研究还就作用机制进行了探讨，作者对其研究进展进行了概述。
[关键词] 中药；骨髓间充质干细胞；增殖；凋亡；分化；研究进展[收稿日期] 2013-12-22[基金项目] 国家自然科学基金项目（30860357）[通信作者] 李玛琳，教授，E-mail：limalinb@[作者简介] 方健康，硕士研究生，E-mail：jackfang1987@骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMCSs）已有半个世纪的研究历史[1]，并日益受到研究人员的广泛关注。
BMSCs在一定条件下可向成骨细胞、软骨细胞、心肌样细胞、血管内皮细胞、神经元样细胞、肝细胞、脂肪细胞等多个方向分化。
BMSCs所具备的这种多向分化潜能和自我更新能力，以及较容易获取、体外扩增快、低免疫排斥等优点，使其成为干细胞研究的热点。
近年来，研究人员利用中药对体外培养的BMSCs进行干预，以探索这些中药对BMSCs增殖、凋亡及分化等生命活动的影响。
这些探索将有助于阐明中医药的作用机制，将对我国中医药事业、重大疾病研究、细胞工程、组织工程等生命科学技术领域的发展产生积极的影响。
1 中药促进BMSCs的增殖细胞增殖是生物体最重要的生命活动之一，是生物生长、发育、繁殖、遗传的基础。
近几年研究发现，多种中药对BMSCs的增殖具有一定的促进作用。
复合富血小板血浆培养液对兔骨髓间充质干细胞增殖及矿化的影响
兔骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定
・ 椎 间盘 退 行 性 变 的 生物 治 疗 研 究 专 题 ・
兔 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 的 分 离 培 养 及 鉴 定
刘 康 ， 白亦光 ， 陈 竹 ， 韩 小伟 ， 杨 泽龙 ， 赵
教研 室 ， 四川 Ｉ南 充 ６ ３ ７ ０ ０ ７ ）
明。 ， 宋桂 芹 ， 冯 刚
（ １ ． Ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ Ｃ ｅ ｌ ｌ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ， Ｎ ｏ ｒ ｔ ｈ Ｓ ｉ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｎ ａ ｎ ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｈ ｏ ￣ｉ ｔ ａ ｌ ； ２ ．Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，
６ ３ ７ ０ ０ ０ ； ２ ．川 北 医 学 院 医学 生物 学
（ １ ．川 Ｉ 北 医 学 院第 二 临床 医学 院 ・ 南 充 市 中心 医 院 组 织 工 程 与 干 细 胞 研 究 所 ， 四川 南 充
【 摘
要 】 目的 ：探讨一种简便可行 的兔骨髓间充质干细胞 （ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ ｍ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍ ａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ， Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ） 体外 分离培
ｃ ｈａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ， ｆ ｏ ｒ ｄ ｒ ａ ｗｉ ｎ ｇ ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ ｃ ｕｒ ｖ ｅ ｓ ．Ｉ ｎ ｖ ｅ ｒ ｔ ｅ ｄ ｐｈ ａ ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐｅ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｍｏ ｒ ｐｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ． ＢＭ ＳＣｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｎ－ ｄｕ ｃ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｔ ｅ ｉ ｎｔ ｏ ｃ ｈｏ ｎｄ ｒ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｄｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｓ ａ ｆ ｒ ａ ｎ ｉ ｎ 一 ０ ａ ｎｄ ｆ ａ ｓ ｔ ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ ｓ ｔ ａ ｉ ｎｉ ｎｇ ａ ｎｄ ｔ ｏ ｌ ｕ ｉ ｄ ｉ ｎ ｅ ｂ ｌ ｕ ｅ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｓ ｐｅ ｃ —
兔骨髓间充质干细胞体外BrdU标记的实验研究
３ ％戊 巴比妥钠按 １
ｍ ／ ｇ经耳缘静脉 行全身麻 醉 ， Ｌｋ 于双侧胫 骨上端 内侧
部及双侧髂后 上嵴 取骨髓 血约 ４ ｍ 。立 即用等量 的 Ｌ
Ｐ Ｓ洗涤后离心 ， Ｂ 弃去上清液 ， 重复 ２次后 即可 采用全
ＭＳ ｓ Ｃ 的体外标记 ， 旨在探 讨其标记 方法 ， 索其标 记 探
嘧 啶 核苷 （ ５一ｂｏ ｏ ｒ 一２一ｄｏｙｒ ｉｅ Ｂｄ 因 无 放 ｍ ｅｘｕ ｄ ， ｒＵ） ｉｎ
司， 北京 ） 鼠抗 兔 Ｂｄ ， ｒＵ单克隆抗 体 （ 北京 中杉 金桥公
司） 过氧化物酶标 记的链酶卵 自素染色试剂 盒 （ ， 北京 中杉金桥公司 ）浓缩 型 Ｄ Ｂ试 剂盒（ ， Ａ 北京 中杉金桥公 司） 等。
【 关键 词】 骨髓间充质干细胞 ； ５一溴脱氧尿 嘧啶核苷 ；兔；全骨髓培养法
骨髓间充质干细胞 （ ａｒ ｍ ｒ ｗ—ｄｒ ｅ ｅｅｃｙ ａ ｏ ｅ ｖｄｍ ｓｎｈｍ ｌ ｉ ｓ ｒ ｃｌ ， Ｓ ｓ在组 织工程学 中的应用 首先遇到 的 ｔｎ ｅ ｓ Ｍ Ｃ ） ｅ ｌ 困难之一是 如何 标记 待移植 的 ＭＳ ｓ 进而 跟踪 其 存 Ｃ， 活 、归巢 ” 生长 、 化等 一系列 过程 。５一溴 脱氧 尿 “ 、 分
进行 观察 ， 发现贴壁细胞胞体 回缩 ， 细胞间隙增大或者 少量贴壁细胞漂浮时 ， 即加 入等量含 Ｆ Ｓ的培养基 立 Ｂ 终止消化 ， 并用无 菌吸管轻柔吹打瓶壁 细胞 ， 促进细胞 脱壁 。多数 细胞脱离瓶壁形成 细胞悬 液后 ， 按照１２ ：重 新接种至 ７ Ｌ培养瓶 中 ， ５ｍ 至第 ３ 代备用 。
增 高， ０Ｉ ｏ Ｌ及 ７ ４ ｍ ｌ ｘ ／ ２ｈ标记 阳性率达 ８ ％ ９ ％。结论 ５ ５
兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应
兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应【摘要】为了研究兔骨髓间充质干细胞(rBM-MSC)的生物学特征及其对不同生长因子的反应，使用贴壁培养法从兔骨髓单个核细胞中获得间充质干细胞，在光学显微镜和电子显微镜下观察其基本生长行为和生物学特征；使用流式细胞仪检测rBM-MSC的免疫学表型；RT-PCR法检测其胶原表达；诱导rBM-MSC多向分化并使用特异性染色和RT-PCR予以鉴定；最后使用MTT法检测IL-1、3、8和HGF对rBM-MSC生长增殖的影响。
结果显示：贴壁生长的rBM-MSC具有典型的成纤维样细胞形态，可传15代以上，第5代rBM-MSC高表达基质受体CD44，低表达造血细胞标记CD45；RT-PCR显示高表达I型胶原，弱表达II型胶原，不表达X型胶原；在不同的诱导条件下，rBM-MSC 可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞。
rBM-MSC对IL-3最为敏感，10 ng/ml的低浓度IL-3可显着促进细胞增殖达32％以上，而高浓度IL-3能显着抑制其生长。
结论：分离培养了rBM-MSC，其生物学特征与人和猕猴等BM-MSC相似的生物学特性，低浓度IL-3可有效促进其增殖。
【关键词】骨髓；间充质干细胞；生长因子；兔Biological Characteristics of Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Their Response to Different Growth FactorsAbstractThis study was aimed to analyze the biological characteristics of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (rBM-MSCs) and their response to different growth factors. RabbitBM-MSCs were separated from bone marrow mononuclear cells by using adherent cultivation. Biologicalcharacteristics were investigated by optical and electron microscopy. Immunophenotype of rBM-MSCs was measured by flow cytometry. Theexpression of collagen was detected by RT-PCR. Differentiation potential was identified by specific staining andRT-PCR. The response of rBM-MSCs to IL-1, 3, 8 and HGF with different concentrations were tested by MTT. The results showed that the rBM-MSCs gave rise to a population of adherent cells characterized by the presence of a predominant cell type with a typical fibroblast-like morphology and could be cultured for over 15 passages. CD44 was highly expressed on F5 rBM-MSCs (32%) and CD45 was lowly expressed (%). Type I collagen was highly expressed, while type II collagen was lowly expressed and type X collagen was not detected on rBM-MSCs using RT-PCR method. In various conditions inducting differentiation, rBM-MSCs could differentiate into the osteoblast, chondrocyte, adipocyte and neuron-like cells. The rBM-MSCs weresensitive to IL-3, even low concentration (10 ng/ml) of IL-3 could promote the proliferation of rBM-MSCs effectively (32％, ), whereas high concentration IL-3 inhibited it significantly. It is concluded that rabbit BM-MSCs were successfully isolated and culture-expanded. The biological characteristics of rabbit BM-MSCs are similar to those of human and rhesus BM-MSCs. IL-3 with low concentration can promote the proliferation of rBM-MSCs effectively, but high concentration of IL-3 can inhibit their proliferation.Key wordsbone marrow; mesenchymal stem cell; growth factor; rabbit骨髓间充质干细胞具有高度自我更新和多向分化的潜能，在不同的诱导条件下，可分化为多种组织细胞类型，如骨髓基质细胞、成骨细胞、成软骨细胞和脂肪细胞［1］。
兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定
16号骨髓穿刺针接10 mL注射器，穿刺进入骨髓腔，注射器内含稀释（3 000 kU/L）的肝素钠1.0 mL ，抽取骨髓液约5.0 mL。
细胞分离培养及传代按文献［3］方法进行。
1.2.2MSC的生长曲线描绘分别取第1、3、5、8、10代MSC，用2.5 g/L胰蛋白酶消化后加入L-DMEM 完全培养液，调整细胞密度至1.0×107/L，接种于5个24孔培养板中，培养板上作相应标记，每孔细胞悬液1.0 mL。
每天每板取3孔消化，形成细胞悬液，混匀，行细胞计数并计算均值，连续9 d（消化8次）。
然后以时间为横坐标，细胞数为纵坐标，绘制生长曲线。
1.3 MSC的鉴定1.3.1形态学观察在倒置显微镜下不定期观察细胞生长情况。
1.3.2超微结构观察取生长状况良好的细胞2瓶，用2.5 g/L胰酶将细胞消化下来，800 r/min离心5 min，弃上清，加入约1.5 mL的L-DMEM完全培养液重悬细胞，移至1.5 mL的Ep管中，1 500 r/min离心10 min，弃上清，可见Ep管底下方有一粒约芝麻大小灰白色团块，沿管壁小心加入25 g/L戊二醛约1.5 mL固定2 h，再用锇酸溶液固定2 h，乙醇梯度及丙酮脱水，环氧树脂包埋，做成超薄切片，醋酸钠及枸橼酸铅双重染色，透射电镜下观察其超微结构。
1.3.3细胞表面标志鉴定收集第3代生长状况良好的细胞，传代培养于6孔板中行爬片，采用免疫化学ABC法检测CD34、CD44、CD90等抗原表达。
2 结果2.1 细胞分离经1.073 kg/L的Percoll分离液分离后，可以看到管内液体分为明显的4层。
最上层约占液柱的1/2，为红色的培养液层;第3层约占液柱的1/2，为乳白色的Percoll分离液层;在两层的交界处为高约1.0 mm的灰白色云雾状层，为单个核细胞层（此层为所要的细胞层）;最底层紧附试管壁，为一薄层红色的细胞层，为密度较大的红细胞等。
兔骨髓间充质干细胞的分离、扩增及诱导分化
兔骨髓间充质干细胞的分离、扩增及诱导分化杨启灿;覃洋海;王大伟【摘要】目的探讨兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)体外培养、定向诱导分化为成骨细胞和成脂肪细胞的途径,为进一步的实验研究打下基础.方法抽取兔股骨骨髓,以全骨髓贴壁培养法进行体外培养,贴壁细胞传代,倒置显微镜下观察细胞形态.取第3代细胞向成骨细胞和成脂肪细胞诱导,14 d后成骨细胞诱导组检测碱性磷酸酶,成脂肪细胞诱导组进行油红O染色.结果全骨髓贴壁培养法可获得BM-MSCs,原代和传代培养的BM-MSCs具有活跃的增殖能力.成骨细胞诱导组碱性磷酸酶检测表达阳性,成脂肪细胞诱导组油红O染色见胞浆内出现大量红染脂滴.结论全骨髓贴壁培养法可有效地分离和扩增BM-MSCs,分离培养的BM-MSCs生长稳定,增殖力强,可向成骨细胞和成脂肪细胞诱导分化.【期刊名称】《中国骨科临床与基础研究杂志》【年(卷),期】2010(002)001【总页数】3页(P49-51)【关键词】骨髓间充质干细胞;细胞,培养的;基因扩增;细胞分化;兔【作者】杨启灿;覃洋海;王大伟【作者单位】530011,南宁,广西中医学院附属瑞康医院骨科;530011,南宁,广西中医学院附属瑞康医院骨科;530011,南宁,广西中医学院附属瑞康医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R329.24骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）是存在于骨髓中的非造血干细胞[1]，具有很强的自我复制能力和多向分化潜能，可以分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞等[2]。
由于BM-MSCs取材方便，可在体外扩增，且具有多向分化潜能，因此成为组织工程及种子细胞研究的热点之一。
本实验旨在建立一种分离、纯化、培养、扩增BM-MSCs的方法，然后将培养的BM-MSCs向成骨细胞和成脂细胞诱导分化并加以鉴定，为BM-MSCs移植治疗膝骨性关节炎提供实验研究基础。
兔骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定与生物学特性观察
兔骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定与生物学特性观察目的：探讨兔骨髓间充质干细胞体外分离、培养和鉴定，观察其生物学特性。
方法：采集兔股骨、胫骨、肱骨骨髓组织，采用密度梯度离心法和细胞贴壁培养法净化和提纯骨髓间充质干细胞，通过体外培养、分离和扩增，倒置相差显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表面标记物，观察细胞生物学特性。
结果：兔骨髓间充质干细胞形态呈梭形、纺锤形，旋涡状生长排列，增值活跃。
细胞表面标记物CD44分子阳性，CD34分子阴性。
结论：成功建立了兔BMSCs体外培养、分离和扩增的试验方法，从而证明骨髓间充质干细胞是理想的组织工程种子细胞。
标签：骨髓间充质干细胞；细胞培养；细胞鉴定骨髓间充质干细胞(bone marrow-drived mes-enchymal stem cells,BMSCs是来源于骨髓的MSCs，具有采集方便的优点，是理想的组织工程种子细胞［1］具有多向分化和自我复制潜能,易于自体采集、无免疫排斥反应、避免伦理学限制等优点,在细胞治疗方面得到了广泛的应用。
但是BMSCs在骨髓微环境中所占比例极少,使用何种简单操作方法快速获取形态均一和纯度较高的BMSCs便成为该研究领域关注的焦点［2］。
本实验采用全骨髓贴壁细胞培养法和密度梯度离心法相结合分离、纯化BMSCs，通过体外培养扩增，以及流式细胞术鉴定，建立稳定的BMSCs培养扩增方法。
1 材料与方法1.1 实验动物：日本大耳白兔4只，4周龄，雌雄不限，体重250~300g，购于兰州生物制品研究所。
1.2 主要试剂及仪器：二氧化碳培养箱(BB16UV型,德国Heraeus公司)、超净工作台(VS-1300L型,苏净集团苏州安泰空气技术有限责任公司)、倒置相差显微镜、超声波清洗仪、纯净水系统、酸度计、台式高速离心机(北京科伟永鑫实验仪器设备厂)、低糖培养基(GBICO公司)、胎牛血清（杭州四季青）、谷氨酰胺、青链霉素、胰酶、流式细胞抗体（北京博奥森生物技术有限公司）。
锌离子浓度可影响兔骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2020)19-02985-06 2985www.CRTER .org·研究原著·赵桥，男，1993年生，西南医科大学在读硕士，主要从事脊柱外科方面的研究。
通讯作者：冯刚，博士，教授，西南医科大学附属医院骨与关节科，四川省骨科置入器械研发与应用技术工程实验室，四川省泸州市 646000；川北医学院第二临床医学院·南充市中心医院组织工程与干细胞研究所，四川省南充市 637000并列通讯作者：段可，博士，副教授，西南医科大学附属医院骨与关节科，四川省骨科置入器械研发与应用技术工程实验室，四川省泸州市 646000文献标识码:A投稿日期：2019-05-08 送审日期：2019-05-22 采用日期：2019-08-07 在线日期：2019-11-25Zhao Qiao, Mastercandidate, Department of Orthopedics and Arthrology, Affiliated Hospital of Southwest MedicalUniversity, Laboratory of Research and Development and Application ofOrthopedic Devices, Luzhou 646000, Sichuan Province, China; Second Clinical College of North Sichuan Medical College • Tissue Engineering and Stem Cell Research Institute ofNanchong Central Hospital, Nanchong 637000, Sichuan Province, ChinaCorresponding author: Feng Gang, MD, Professor, Department of Orthopedics and Arthrology, Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Laboratory of Research and Development and Application of Orthopedic Devices, Luzhou 646000, Sichuan Province, China; Second Clinical College of North Sichuan Medical College • Tissue Engineering and Stem Cell Research Institute of Nanchong Central Hospital, Nanchong 637000, Sichuan Province, China锌离子浓度可影响兔骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化赵 桥1，2，杨 飞3，张成栋2，陈 硕2，孙 枭2，张 波3，肖东琴2，刘 康2，冯 刚1，2，段 可1 (1西南医科大学附属医院骨与关节科，四川省骨科置入器械研发与应用技术工程实验室，四川省泸州市 646000；2川北医学院第二临床医学院·南充市中心医院组织工程与干细胞研究所，四川省南充市 637000；3南充市中心医院骨科，四川省南充市 637000) DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2042 ORCID: 0000-0003-1353-2148(赵桥)文章快速阅读：文题释义：骨髓间充质干细胞：间充质干细胞是一种多能干细胞，最早于骨髓中发现，后来陆续在外周血、脂肪等组织中被分离出来。
干细胞扩增培养基主要成分
干细胞扩增培养基主要成分【原创实用版】目录1.干细胞扩增培养基的概述2.干细胞扩增培养基的主要成分3.各种成分的作用4.培养基的优化及其对干细胞扩增的影响5.干细胞扩增培养基的实际应用正文干细胞扩增培养基是用于干细胞体外扩增和培养的一种基础培养环境。
干细胞具有自我更新和分化为多种细胞类型的能力，因此，干细胞扩增培养基的成分对于干细胞的生长和分化具有至关重要的影响。
本文将详细介绍干细胞扩增培养基的主要成分、各种成分的作用以及培养基的优化及其对干细胞扩增的影响。
1.干细胞扩增培养基的概述干细胞扩增培养基主要用于提供干细胞在体外生长和繁殖所需的营养物质。
干细胞扩增培养基一般包括碳水化合物、氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、生长因子等成分。
不同类型的干细胞需要不同的培养基，因此，针对不同类型的干细胞，培养基的成分和比例会有所不同。
2.干细胞扩增培养基的主要成分干细胞扩增培养基的主要成分包括：（1）碳水化合物：如葡萄糖，是干细胞生长的主要能源。
（2）氨基酸：如谷氨酰胺，是干细胞合成蛋白质和核酸所必需的。
（3）维生素：如维生素 C、维生素 B12 等，参与干细胞的代谢过程。
（4）无机盐：如钙离子、镁离子等，维持干细胞生长的生理环境。
（5）微量元素：如硒、锌等，参与干细胞的抗氧化反应和酶活性。
（6）生长因子：如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子等，促进干细胞的生长和分化。
3.各种成分的作用（1）碳水化合物：提供干细胞生长所需的能量。
（2）氨基酸：用于干细胞合成蛋白质、核酸等生物大分子。
（3）维生素：参与干细胞的代谢过程，保持干细胞生长的正常生理环境。
（4）无机盐：维持干细胞生长的生理环境，参与细胞内的生物反应。
（5）微量元素：参与干细胞的抗氧化反应，保护细胞免受氧化应激损伤；同时，参与酶活性，影响干细胞的生长和分化。
（6）生长因子：通过与干细胞表面的受体结合，激活细胞内信号通路，促进干细胞的生长和分化。
4.培养基的优化及其对干细胞扩增的影响培养基的优化是提高干细胞扩增效率和纯度的关键。
干细胞扩增培养基主要成分
干细胞扩增培养基主要成分摘要：1.干细胞扩增培养基的概述2.干细胞扩增培养基的主要成分3.各成分的作用及其对干细胞生长的影响4.结论正文：干细胞扩增培养基的概述干细胞是一种具有自我更新和分化潜能的细胞，其在生物医学领域具有广泛的应用前景。
干细胞扩增培养基是干细胞体外培养的关键因素，其主要成分对干细胞的生长和分化具有重要影响。
干细胞扩增培养基的主要成分1.碳源：通常使用葡萄糖作为碳源，为干细胞提供能量。
2.氮源：包括氨基酸和氮碱盐，为干细胞提供合成蛋白质和核酸所需的氮元素。
3.维生素：维生素是干细胞生长所必需的有机物质，包括脂溶性和水溶性维生素。
4.脂肪酸：脂肪酸是干细胞膜的重要组成成分，对干细胞的生长和分化具有重要影响。
5.微量元素：微量元素包括铁、锌、铜等，对干细胞的生长和分化具有重要作用。
6.盐浓度：培养基中的盐浓度对干细胞的生长和分化具有重要影响，需要适当调整。
各成分的作用及其对干细胞生长的影响1.碳源：葡萄糖作为碳源可以为干细胞提供能量，促进其生长和分化。
不同类型的干细胞可能对碳源的需求不同，因此需要根据具体情况选择合适的碳源。
2.氮源：氨基酸和氮碱盐是干细胞合成蛋白质和核酸所需的重要成分，对干细胞的生长和分化具有重要影响。
不同类型的干细胞对氮源的需求也不同，需要根据具体情况进行调整。
3.维生素：维生素是干细胞生长所必需的有机物质，对干细胞的生长和分化具有重要影响。
不同类型的干细胞对维生素的需求也不同，需要根据具体情况进行调整。
4.脂肪酸：脂肪酸是干细胞膜的重要组成成分，对干细胞的生长和分化具有重要影响。
不同类型的干细胞对脂肪酸的需求也不同，需要根据具体情况进行调整。
5.微量元素：微量元素包括铁、锌、铜等，对干细胞的生长和分化具有重要作用。
微量元素的缺乏或过量都会对干细胞的生长和分化产生影响，因此需要适当调整。
6.盐浓度：培养基中的盐浓度对干细胞的生长和分化具有重要影响，需要适当调整。
盐浓度过高或过低都会对干细胞的生长和分化产生影响，因此需要根据具体情况进行调整。
间充质干细胞培养基成分
间充质干细胞培养基成分
以间充质干细胞培养基成分为题，我将为大家介绍一下它的具体组成。
间充质干细胞培养基是一种特殊的培养基，它包含了多种成分，以确保干细胞的正常生长和分化。
间充质干细胞培养基的主要成分是基础培养基。
基础培养基是指提供细胞生长所必需的营养物质和能量的培养基。
它通常包含无机盐、氨基酸、维生素和葡萄糖等。
这些成分提供了细胞所需的能量和物质基础，使细胞能够正常生长和分化。
除了基础培养基，间充质干细胞培养基还含有一些特殊的成分，以满足干细胞的特殊需求。
其中一个重要的成分是生长因子。
生长因子是一类能够促进细胞生长和分化的蛋白质。
在间充质干细胞培养基中，常见的生长因子有人源基质细胞生长因子（hMSC-GF）和表皮生长因子（EGF）等。
这些生长因子通过与细胞表面的受体结合，激活细胞内的信号转导通路，从而促进细胞的增殖和分化。
间充质干细胞培养基中还含有一些辅助成分，如胎牛血清、人血清和胰岛素等。
这些成分能够提供额外的营养和生长因子，增强细胞的生长和分化能力。
总的来说，间充质干细胞培养基的成分主要包括基础培养基、生长因子和辅助成分。
这些成分能够为干细胞提供必需的营养和生长因子，促进干细胞的生长和分化。
通过合理调配这些成分的比例和浓
度，可以优化培养条件，提高干细胞的存活率和分化效率。
希望通过这篇文章，您对间充质干细胞培养基的成分有更清晰的了解。
体外诱导兔骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的研究的开题报告
体外诱导兔骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的研究的开题报告一、研究背景和意义随着人口老龄化和生活方式的改变，心血管疾病的发病率不断增加，成为严重威胁人类健康的疾病之一。
平滑肌细胞是心血管系统中的重要组成部分，与血管的收缩和松弛、血压的调节以及血液循环等密切相关。
因此，平滑肌细胞的缺乏或功能异常会导致心血管疾病的发生。
目前，细胞治疗已成为治疗心血管疾病的新途径，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）由于其易得、易扩增、多向分化潜能和免疫调节作用等优点，成为最具潜力的细胞治疗手段之一。
研究表明，BMSCs能够向平滑肌细胞分化，但其分化程度和效果仍有待提高。
因此，本研究旨在探究体外诱导兔BMSCs向平滑肌细胞分化的最佳条件及分化机制，为心血管疾病的治疗提供新的思路和方法。
二、研究内容和方法1. 研究内容（1） BMSCs的提取与鉴定：收集兔骨髓，并通过红细胞溶解液和悬浮培养法提取BMSCs；使用细胞形态学和表面标志物鉴定方法确立BMSCs的特异性。
（2）平滑肌细胞分化条件的筛选：体外诱导BMSCs分化为平滑肌细胞，并通过细胞形态学、分子生物学、蛋白质组学等手段评价分化程度和效果，筛选出最佳的分化条件。
（3）平滑肌细胞分化机制的研究：通过Western blot、Real-time PCR、免疫组化等手段检测与平滑肌分化相关的分子表达变化，探讨平滑肌分化机制。
2. 研究方法（1）实验动物：新西兰白兔。
（2）主要试剂：DMEM/F12基础培养液、FBS、L-Ascorbic Acid、β- glycerophosphate、Dexamethason、Insulin、Fibrinogen、Thrombin等。
（3）实验步骤：BMSCs的提取、平滑肌细胞分化条件的筛选、平滑肌细胞分化机制的研究。
三、研究预期成果（1）筛选出最佳的平滑肌细胞分化条件，提高BMSCs向平滑肌细胞分化的程度和效果。
（2）探究平滑肌细胞分化机制，结合上下游调控因子，探索平滑肌细胞分化的新途径和方法。